试析细胞血管紧张素Ⅱ诱导神经细胞衰老作用及药物干预
最后更新时间：2024-04-09
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论文导读：报道。灯盏乙素(scutellarin)是中药灯盏花的主要有效成分,被广泛用于治疗心脑血管疾病。近年来探讨发现,灯盏乙素具有抗氧化能力,可减轻细胞内ROS累积,减轻氧化损伤而保护细胞。由此,本探讨使用体外培养的PC12细胞探讨H202诱导神经细胞衰老的意义及机制,并进一步研究灯盏乙素的保护意义。探讨办法：使用SA-β-gal染色观察在不
摘要：探讨目的：血管性痴呆(vascular dementia, VD)主要体现为智力相关功能的进行性不可逆的衰退或消失,作为一种年龄相关性疾病除与脑血管病相关外,也与神经细胞的异常死亡及中枢神经体系的衰老存在密切的关系。血管紧张素Ⅱ(Angiotensin II, Ang II)是肾素-血管紧张素体系(renin-angiotensin system, RAS)的核心部分,最新探讨表明脑内RAS有着可影响正常的神经可塑性和学习记忆等认知功能,参与脑老化历程。衰老是正常机体组织细胞结构和功能的进行性衰退历程,与痴呆的进行性不可逆性变化相吻合,据此我们推测也许是Ang Ⅱ通过诱导神经细胞衰老继而诱导或推动VD的发生。由此,本探讨课题使用体外培养的PC12细胞和大鼠原代海马神经元,探讨Ang Ⅱ致神经细胞衰老的意义,并使用特异性受体阻断剂研究其相关机制。探讨办法：1.体外培养PC12细胞,MTT法检测不同浓度Ang Ⅱ诱导从及最佳Ang Ⅱ诱导浓度下分别加入厄贝沙坦、PD123319、卡托普利处理后PC12细胞生长增殖状况；SA-β-gal染色后观察细胞衰老染色形态变化；ELISA法检测端粒酶逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase, TERT)活性；Western blot检测TERT、P53、P21在衰老PC12细胞中的表达变化。2.选用新生24h内的乳大鼠体外培养原代海马神经元,并观察不同生长时间下细胞形态变化。采取不同诱导浓度Ang Ⅱ和时间处理细胞,通过SA-β-gal染色检测神经细胞衰老状况,确定Ang Ⅱ诱导细胞衰老的最佳浓度和时间；进一步检测厄贝沙坦和PD123319对Ang Ⅱ诱导神经细胞衰老的影响；Western blot法检测P53、P21的表达变化。探讨结果：1. Ang Ⅱ (1-1000μmol/L,48h)呈浓度依赖性地抑制PC12细胞增殖,10μmol/L Ang Ⅱ孵育48h可有效诱导细胞衰老,厄贝沙坦、PD123319、卡托普利对PC12细胞无毒性意义,而厄贝沙坦和卡托普利可不同程度的改进AngⅡ对细胞的抑制意义并减缓细胞衰老,而PD123319无此意义；ELISA检测到AngⅡ处理组TERT活性显著降低,Western blot证实TERT表达减少,P53、P21表达增多,厄贝沙坦和卡托普利组可不同程度地增多TERT活性和表达,降低P53和P21表达,而PD123319对此无影响。2.在原代海马神经细胞实验中,10μmol/L Ang Ⅱ孵育48h可诱导神经细胞衰老；Western blot检测到Ang Ⅱ组P53、P21表达增多,厄贝沙坦可抑制AngⅡ所致神经细胞衰老,降低P53、P21表达量,而PD123319对此无意义。探讨结论：10μmol/L AngⅡ孵育48h可诱导PC12细胞和大鼠原代海马神经细胞衰老,此历程由ATI受体介导,与AT2受体无关。AngⅡ诱导神经细胞衰老的机制可能与TERT表达及活性降低,P53、P21表达增多有关。探讨目的：衰老自由基学说认为机体组织细胞产生的自由基不断积累损伤蛋白质、核酸进而引起结构和功能的退行性变化,最终导致机体或细胞衰老发生。活性氧(reactive oxygen species, ROS)基团是指含氧的自由基,可产生氧化应激引起生物大分子的氧化损伤继而影响细胞衰老进程。过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)能产生大量自由基,常被用作细胞氧化应激诱导剂。目前探讨发现H202可诱导血管内皮细胞衰老进而引发血管衰老,但H202诱导神经细胞衰老的意义及机制少见报道。灯盏乙素(scutellarin)是中药灯盏花的主要有效成分,被广泛用于治疗心脑血管疾病。近年来探讨发现,灯盏乙素具有抗氧化能力,可减轻细胞内ROS累积,减轻氧化损伤而保护细胞。由此,本探讨使用体外培养的PC12细胞探讨H202诱导神经细胞衰老的意义及机制,并进一步研究灯盏乙素的保护意义。探讨办法：使用SA-β-gal染色观察在不同诱导浓度和不同诱导时间下H2O2致PC12细胞衰老状况,确定最佳诱导浓度和诱导时间；进而采取SA-β-gal染色检测不同浓度灯盏乙素对H2O2诱导PC12细胞衰老意义的影响；Real-time RT-PCR法测定T论文导读：
ERT、P53、P27和P21mRNA的表达状况；ELISA法检测端粒酶逆转录酶(TERT)活性变化；Western blot法检测TERT从及细胞周期调控相关蛋白P53、P27和P21的蛋白表达状况。探讨结果：10μmol/L H2O2组处理细胞24h即可见细胞固缩呈圆形,48h核固缩加剧、细胞破裂、坏死,随着处理时间增多几乎看不到残存正常细胞,视野全呈碎片状；1μmol/L H2O2处理48h可有效诱导PC12细胞发生衰老,细胞肿胀呈“笑脸状”,β-gal阳性(蓝色)细胞显著增加；不同灯盏乙素可不同程度地减轻细胞衰老,其中10μmol/L灯盏乙素P-gal阳性(蓝色)细胞减少最为显著(P＜0.01)；H202处理组TERT活性显著降低(P＜0.05),TERT表达显著下降(P＜0.05),P53、P27和P21表达均显著增多(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05)；与H2O2组相比,灯盏乙素可使TERT活性和表达均显著增多(P＜0.05,P＜0.05),使P53、P27和P21表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05)。探讨结论：1μmol/L H2O2孵育48h可诱导PC12细胞衰老,衰老发生机制可能与TERT活性和表达降低,P53、P27和P21表达增多有关；灯盏乙素可不同程度地减轻H2O2所致PC12细胞衰老,并提升TERT活性和表达、抑制P53、P27和P21的表达。关键词：血管紧张素Ⅱ论文PC12细胞论文原代海马神经元论文细胞衰老论文灯盏乙素论文H_2O_2论文PC12细胞论文细胞衰老论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。第一部分 血管紧张素Ⅱ诱导神经细胞衰老的意义及药物干预6-41
中文摘要6-8
ABSTRACT8-10
符号说明10-11
前言11-13
实验材料13-19
实验办法19-24
实验结果24-27
讨论27-30
结论30-31
附录Ⅰ31-37
参考文献37-41
第二部分 灯盏乙素对H_2O_2诱导PC12细胞衰老的保护意义及机制41-65
中文摘要41-43
ABSTRACT43-45
前言45-46
实验材料46-49
实验办法49-52
实验结果52-54
讨论54-56
结论56-57
附录Ⅱ57-61
参考文献61-65
致谢65-66
攻读硕士学位期间发表的学术论文66-67
学位论文评阅及答辩状况表67
摘要：探讨目的：血管性痴呆(vascular dementia, VD)主要体现为智力相关功能的进行性不可逆的衰退或消失,作为一种年龄相关性疾病除与脑血管病相关外,也与神经细胞的异常死亡及中枢神经体系的衰老存在密切的关系。血管紧张素Ⅱ(Angiotensin II, Ang II)是肾素-血管紧张素体系(renin-angiotensin system, RAS)的核心部分,最新探讨表明脑内RAS有着可影响正常的神经可塑性和学习记忆等认知功能,参与脑老化历程。衰老是正常机体组织细胞结构和功能的进行性衰退历程,与痴呆的进行性不可逆性变化相吻合,据此我们推测也许是Ang Ⅱ通过诱导神经细胞衰老继而诱导或推动VD的发生。由此,本探讨课题使用体外培养的PC12细胞和大鼠原代海马神经元,探讨Ang Ⅱ致神经细胞衰老的意义,并使用特异性受体阻断剂研究其相关机制。探讨办法：1.体外培养PC12细胞,MTT法检测不同浓度Ang Ⅱ诱导从及最佳Ang Ⅱ诱导浓度下分别加入厄贝沙坦、PD123319、卡托普利处理后PC12细胞生长增殖状况；SA-β-gal染色后观察细胞衰老染色形态变化；ELISA法检测端粒酶逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase, TERT)活性；Western blot检测TERT、P53、P21在衰老PC12细胞中的表达变化。2.选用新生24h内的乳大鼠体外培养原代海马神经元,并观察不同生长时间下细胞形态变化。采取不同诱导浓度Ang Ⅱ和时间处理细胞,通过SA-β-gal染色检测神经细胞衰老状况,确定Ang Ⅱ诱导细胞衰老的最佳浓度和时间；进一步检测厄贝沙坦和PD123319对Ang Ⅱ诱导神经细胞衰老的影响；Western blot法检测P53、P21的表达变化。探讨结果：1. Ang Ⅱ (1-1000μmol/L,48h)呈浓度依赖性地抑制PC12细胞增殖,10μmol/L Ang Ⅱ孵育48h可有效诱导细胞衰老,厄贝沙坦、PD123319、卡托普利对PC12细胞无毒性意义,而厄贝沙坦和卡托普利可不同程度的改进AngⅡ对细胞的抑制意义并减缓细胞衰老,而PD123319无此意义；ELISA检测到AngⅡ处理组TERT活性显著降低,Western blot证实TERT表达减少,P53、P21表达增多,厄贝沙坦和卡托普利组可不同程度地增多TERT活性和表达,降低P53和P21表达,而PD123319对此无影响。2.在原代海马神经细胞实验中,10μmol/L Ang Ⅱ孵育48h可诱导神经细胞衰老；Western blot检测到Ang Ⅱ组P53、P21表达增多,厄贝沙坦可抑制AngⅡ所致神经细胞衰老,降低P53、P21表达量,而PD123319对此无意义。探讨结论：10μmol/L AngⅡ孵育48h可诱导PC12细胞和大鼠原代海马神经细胞衰老,此历程由ATI受体介导,与AT2受体无关。AngⅡ诱导神经细胞衰老的机制可能与TERT表达及活性降低,P53、P21表达增多有关。探讨目的：衰老自由基学说认为机体组织细胞产生的自由基不断积累损伤蛋白质、核酸进而引起结构和功能的退行性变化,最终导致机体或细胞衰老发生。活性氧(reactive oxygen species, ROS)基团是指含氧的自由基,可产生氧化应激引起生物大分子的氧化损伤继而影响细胞衰老进程。过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)能产生大量自由基,常被用作细胞氧化应激诱导剂。目前探讨发现H202可诱导血管内皮细胞衰老进而引发血管衰老,但H202诱导神经细胞衰老的意义及机制少见报道。灯盏乙素(scutellarin)是中药灯盏花的主要有效成分,被广泛用于治疗心脑血管疾病。近年来探讨发现,灯盏乙素具有抗氧化能力,可减轻细胞内ROS累积,减轻氧化损伤而保护细胞。由此,本探讨使用体外培养的PC12细胞探讨H202诱导神经细胞衰老的意义及机制,并进一步研究灯盏乙素的保护意义。探讨办法：使用SA-β-gal染色观察在不同诱导浓度和不同诱导时间下H2O2致PC12细胞衰老状况,确定最佳诱导浓度和诱导时间；进而采取SA-β-gal染色检测不同浓度灯盏乙素对H2O2诱导PC12细胞衰老意义的影响；Real-time RT-PCR法测定T论文导读：
ERT、P53、P27和P21mRNA的表达状况；ELISA法检测端粒酶逆转录酶(TERT)活性变化；Western blot法检测TERT从及细胞周期调控相关蛋白P53、P27和P21的蛋白表达状况。探讨结果：10μmol/L H2O2组处理细胞24h即可见细胞固缩呈圆形,48h核固缩加剧、细胞破裂、坏死,随着处理时间增多几乎看不到残存正常细胞,视野全呈碎片状；1μmol/L H2O2处理48h可有效诱导PC12细胞发生衰老,细胞肿胀呈“笑脸状”,β-gal阳性(蓝色)细胞显著增加；不同灯盏乙素可不同程度地减轻细胞衰老,其中10μmol/L灯盏乙素P-gal阳性(蓝色)细胞减少最为显著(P＜0.01)；H202处理组TERT活性显著降低(P＜0.05),TERT表达显著下降(P＜0.05),P53、P27和P21表达均显著增多(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05)；与H2O2组相比,灯盏乙素可使TERT活性和表达均显著增多(P＜0.05,P＜0.05),使P53、P27和P21表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05)。探讨结论：1μmol/L H2O2孵育48h可诱导PC12细胞衰老,衰老发生机制可能与TERT活性和表达降低,P53、P27和P21表达增多有关；灯盏乙素可不同程度地减轻H2O2所致PC12细胞衰老,并提升TERT活性和表达、抑制P53、P27和P21的表达。关键词：血管紧张素Ⅱ论文PC12细胞论文原代海马神经元论文细胞衰老论文灯盏乙素论文H_2O_2论文PC12细胞论文细胞衰老论文
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中文摘要6-8
ABSTRACT8-10
符号说明10-11
前言11-13
实验材料13-19
实验办法19-24
实验结果24-27
讨论27-30
结论30-31
附录Ⅰ31-37
参考文献37-41
第二部分 灯盏乙素对H_2O_2诱导PC12细胞衰老的保护意义及机制41-65
中文摘要41-43
ABSTRACT43-45
前言45-46
实验材料46-49
实验办法49-52
实验结果52-54
讨论54-56
结论56-57
附录Ⅱ57-61
参考文献61-65
致谢65-66
攻读硕士学位期间发表的学术论文66-67
学位论文评阅及答辩状况表67