试谈支原体支原体小GTP结合蛋白类似片段（SGLP）与宿主细胞Rac1和Stat3相互作用及其功能影响
最后更新时间：2024-04-07
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论文导读：机制。办法首先通过生物信息学的办法,分析支原体基因组序列,寻找几点具有保守性的共有序列。在候选的序列中,通过查阅相关文献,确定SGLP为可能的突破口,即可能和Rac1从及Stat3相互意义的支原体蛋白。然后将目的片段的编码序列分别克隆至原核和真核表达载体。通过GST融合蛋白和GFP融合蛋白在原核和真核实验体系中的表达来探讨
摘要：第一部分：细胞培养中支原体污染的鉴定和清除目的研究细胞培养中支原体污染的种类及清除办法。办法检测实验室不同培养者培养的各细胞系污染支原体状况。首先设计支原体种属特异性的简并引物,针对其16s-23s基因间隔区序列,用来检测支原体阳性片段条带。根据简并引物扩增的片段测序明确为何种支原体污染。然后针对污染支原体的种类和滴度,采取方差分析办法,经过统计检验,探索一种合理的配方药物用于细胞培养,能够短期杀灭细胞培养中污染的支原体。对于药物对支原体的杀灭意义采取定量PCR的办法检测,对于药物对细胞的副意义,采取流式细胞数测细胞周期的办法作为指标来评估。对于细胞内支原体的污染,采取免疫荧光后激光共聚焦显微镜观察的办法来明确细胞内变化。结果1)设计的支原体属及莱氏无胆甾原体属简并引物及特异性引物可从快速的检测出有无支原体污染,根据条带比较可从初步明确为何种支原体污染,进一步明确还可从通过测序的金标准来明确。通过该办法可从快速的检测且准确性可靠。2)经方差分析各种药物浓度组合,筛选出具有抗支原体意义明显的几种组合。药物选自三种类型,分别为：截短侧耳素类,第三代喹诺酮类及从上,四环素类。分别配成A,B,C液。所述试剂由A液、B液等体积混合或A液、B液、C液等体积混合而成,其中,A液由半合成截短侧耳素衍生物和0.01M PBS混合而成,混合液中半合成截短侧耳素衍生物的质量-体积百分比浓度为0.5%—1.5%；B液由喹诺酮类衍生物和0.01MPBS混合而成,混合液中喹诺酮类衍生物质量-体积百分比浓度为0.5%—1.5%；C液由四环素类衍生物和0.01M PBS混合而成,混合后四环素类衍生物的质量-体积百分比浓度为0.25%—0.75%；3)该种配方组合不仅可从杀灭细胞外支原体污染,还可从杀灭潜藏于宿主细胞内的支原体。利用之后细胞内部微生物感染引起的自噬反应消失。4)该种配方组合在正常利用浓度下对实验用肿瘤细胞系无显著毒副意义。利用治疗浓度10倍从上的浓度处理细胞未见显著细胞周期变化。结论该发明的目的是提供一种用于清除细胞培养中支原体污染的试剂极为利用办法,能够体系的检测出支原体的种类并将清除,可从有效的清除支原体污染,并不会对细胞的本身代谢带来影响。第二部分：支原体小GTP结合蛋白类似片段(SGLP)与宿主细胞Racl和Stat3目互意义极为功能影响目的研究支原体对宿主肿瘤细胞的影响,鉴别一种毒力因子SGLP (all GTPase-pke protein fragment)并探索其与宿主细胞内分子相互意义的机制。办法首先通过生物信息学的办法,分析支原体基因组序列,寻找几点具有保守性的共有序列。在候选的序列中,通过查阅相关文献,确定SGLP为可能的突破口,即可能和Rac1从及Stat3相互意义的支原体蛋白。然后将目的片段的编码序列分别克隆至原核和真核表达载体。通过GST融合蛋白和GFP融合蛋白在原核和真核实验体系中的表达来探讨目的蛋白片段和宿主分子Rac1和Stat3的相互意义。通过激光共聚焦显微镜观察目的蛋白分子和宿主细胞Rac1和Stat3在细胞内的共定位。通过Western blot探讨该支原体蛋白片段对Rac1和Stat3活性的影响。通过转染突变型的Rac1质粒,转变宿主细胞内Rac1的活性,探讨支原体蛋白片段对Stat3的激活是否依赖于Rac1的活性。通过Transwell实验和BrdU掺入实验,探讨该支原体蛋白片段对宿主肿瘤细胞体外的迁移和增殖能力的影响。用流式检测支原体蛋白片段对细胞内活性氧生成水平的影响,并探讨其效应是否依赖于Rac1。用染色质免疫共沉淀证实Stat3的可能靶基因是否包含Rab7。结果本实验证实所克隆的支原体保守蛋白Chromosome partition protein Smc的N端240个氨基酸残基具有类似小GTP结合蛋白的序列特点(SGLP)。结果显示,SGLP是分子量约27KDa的蛋白片段,可从和宿主细胞Rac1从及Stat3相互意义。SGLP可从上调Rac1的活性和Stat3的磷酸化水平,且推动Stat3磷酸化的意义依赖于Rac1的活性。本实验还发现,SGLP可从推动肿瘤细胞体外的迁移和增殖能力。本实验还探索了SGLP激活Rac1和Stat3的下游效应。为进一步探讨打下基础。结论支原体保守蛋白片段SGLP论文导读：关键词：支原体论文细胞培养论文泰妙菌素论文恩诺沙星论文二甲胺四环素论文支原体蛋白论文小GTP结合蛋白论文Rac1论文Stat3论文肿瘤细胞论文本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。引言5-14参考文献8-14第一部分：细胞培
可从通过和Rac1从及Stat3的相互意义推动Rac1和Stat3的激活,以而推动宿主肿瘤细胞的迁移和增殖,从及产生一系列其他的影响。关键词：支原体论文细胞培养论文泰妙菌素论文恩诺沙星论文二甲胺四环素论文支原体蛋白论文小GTP结合蛋白论文Rac1论文Stat3论文肿瘤细胞论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。引言5-14
参考文献8-14
第一部分：细胞培养中支原体污染的鉴定和清除14-42
摘要14-15
Abstract15-16
前言16-17
材料和办法17-23
实验结果23-32
讨论32-36
参考文献36-42
第二部分：支原体小GTP结合蛋白类似片段(SGLP)与宿主细胞Rac1和Stat3相互意义极为功能影响42-71
摘要42-43
Abstract43-44
前言44-45
材料和办法45-52
实验结果52-62
讨论62-65
参考文献65-71
文献综述71-92
参考文献82-92
附录 实验试剂的配制办法92-94
发表论文及科研成果94-95
致谢95
摘要：第一部分：细胞培养中支原体污染的鉴定和清除目的研究细胞培养中支原体污染的种类及清除办法。办法检测实验室不同培养者培养的各细胞系污染支原体状况。首先设计支原体种属特异性的简并引物,针对其16s-23s基因间隔区序列,用来检测支原体阳性片段条带。根据简并引物扩增的片段测序明确为何种支原体污染。然后针对污染支原体的种类和滴度,采取方差分析办法,经过统计检验,探索一种合理的配方药物用于细胞培养,能够短期杀灭细胞培养中污染的支原体。对于药物对支原体的杀灭意义采取定量PCR的办法检测,对于药物对细胞的副意义,采取流式细胞数测细胞周期的办法作为指标来评估。对于细胞内支原体的污染,采取免疫荧光后激光共聚焦显微镜观察的办法来明确细胞内变化。结果1)设计的支原体属及莱氏无胆甾原体属简并引物及特异性引物可从快速的检测出有无支原体污染,根据条带比较可从初步明确为何种支原体污染,进一步明确还可从通过测序的金标准来明确。通过该办法可从快速的检测且准确性可靠。2)经方差分析各种药物浓度组合,筛选出具有抗支原体意义明显的几种组合。药物选自三种类型,分别为：截短侧耳素类,第三代喹诺酮类及从上,四环素类。分别配成A,B,C液。所述试剂由A液、B液等体积混合或A液、B液、C液等体积混合而成,其中,A液由半合成截短侧耳素衍生物和0.01M PBS混合而成,混合液中半合成截短侧耳素衍生物的质量-体积百分比浓度为0.5%—1.5%；B液由喹诺酮类衍生物和0.01MPBS混合而成,混合液中喹诺酮类衍生物质量-体积百分比浓度为0.5%—1.5%；C液由四环素类衍生物和0.01M PBS混合而成,混合后四环素类衍生物的质量-体积百分比浓度为0.25%—0.75%；3)该种配方组合不仅可从杀灭细胞外支原体污染,还可从杀灭潜藏于宿主细胞内的支原体。利用之后细胞内部微生物感染引起的自噬反应消失。4)该种配方组合在正常利用浓度下对实验用肿瘤细胞系无显著毒副意义。利用治疗浓度10倍从上的浓度处理细胞未见显著细胞周期变化。结论该发明的目的是提供一种用于清除细胞培养中支原体污染的试剂极为利用办法,能够体系的检测出支原体的种类并将清除,可从有效的清除支原体污染,并不会对细胞的本身代谢带来影响。第二部分：支原体小GTP结合蛋白类似片段(SGLP)与宿主细胞Racl和Stat3目互意义极为功能影响目的研究支原体对宿主肿瘤细胞的影响,鉴别一种毒力因子SGLP (all GTPase-pke protein fragment)并探索其与宿主细胞内分子相互意义的机制。办法首先通过生物信息学的办法,分析支原体基因组序列,寻找几点具有保守性的共有序列。在候选的序列中,通过查阅相关文献,确定SGLP为可能的突破口,即可能和Rac1从及Stat3相互意义的支原体蛋白。然后将目的片段的编码序列分别克隆至原核和真核表达载体。通过GST融合蛋白和GFP融合蛋白在原核和真核实验体系中的表达来探讨目的蛋白片段和宿主分子Rac1和Stat3的相互意义。通过激光共聚焦显微镜观察目的蛋白分子和宿主细胞Rac1和Stat3在细胞内的共定位。通过Western blot探讨该支原体蛋白片段对Rac1和Stat3活性的影响。通过转染突变型的Rac1质粒,转变宿主细胞内Rac1的活性,探讨支原体蛋白片段对Stat3的激活是否依赖于Rac1的活性。通过Transwell实验和BrdU掺入实验,探讨该支原体蛋白片段对宿主肿瘤细胞体外的迁移和增殖能力的影响。用流式检测支原体蛋白片段对细胞内活性氧生成水平的影响,并探讨其效应是否依赖于Rac1。用染色质免疫共沉淀证实Stat3的可能靶基因是否包含Rab7。结果本实验证实所克隆的支原体保守蛋白Chromosome partition protein Smc的N端240个氨基酸残基具有类似小GTP结合蛋白的序列特点(SGLP)。结果显示,SGLP是分子量约27KDa的蛋白片段,可从和宿主细胞Rac1从及Stat3相互意义。SGLP可从上调Rac1的活性和Stat3的磷酸化水平,且推动Stat3磷酸化的意义依赖于Rac1的活性。本实验还发现,SGLP可从推动肿瘤细胞体外的迁移和增殖能力。本实验还探索了SGLP激活Rac1和Stat3的下游效应。为进一步探讨打下基础。结论支原体保守蛋白片段SGLP论文导读：关键词：支原体论文细胞培养论文泰妙菌素论文恩诺沙星论文二甲胺四环素论文支原体蛋白论文小GTP结合蛋白论文Rac1论文Stat3论文肿瘤细胞论文本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。引言5-14参考文献8-14第一部分：细胞培
可从通过和Rac1从及Stat3的相互意义推动Rac1和Stat3的激活,以而推动宿主肿瘤细胞的迁移和增殖,从及产生一系列其他的影响。关键词：支原体论文细胞培养论文泰妙菌素论文恩诺沙星论文二甲胺四环素论文支原体蛋白论文小GTP结合蛋白论文Rac1论文Stat3论文肿瘤细胞论文
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参考文献8-14
第一部分：细胞培养中支原体污染的鉴定和清除14-42
摘要14-15
Abstract15-16
前言16-17
材料和办法17-23
实验结果23-32
讨论32-36
参考文献36-42
第二部分：支原体小GTP结合蛋白类似片段(SGLP)与宿主细胞Rac1和Stat3相互意义极为功能影响42-71
摘要42-43
Abstract43-44
前言44-45
材料和办法45-52
实验结果52-62
讨论62-65
参考文献65-71
文献综述71-92
参考文献82-92
附录 实验试剂的配制办法92-94
发表论文及科研成果94-95
致谢95