试析受体美国红鱼清道夫受体SRCR和巨噬细胞迁移抑制因子MIF表达和功能学

论文导读：P1基因的克隆462.1.6序列分析462.1.7原核蛋白表达载体构建46-522.1.

7.1SoSRCRP1中SR12下一页

摘要：本论文对红鱼的一种清道夫受体(scenger receptor cysteine-rich protein, SRCR)和巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)进行了基因克隆表达及生物学功能探讨。富含半胱氨酸的清道夫受体蛋白是分泌或者膜结合受体,具有一个或者多个SRCR结构域。SRCR家族成员具有多种功能,包括病原识别和免疫调控。在硬骨鱼中,虽然已经分离了SRCR结构的蛋白序列,但对其功能了解很少。巨噬细胞迁移抑制因子是一个多功能的细胞因子,参与免疫调控和炎症反应。在SRCR探讨中,我们以红鱼中发现并探讨了一个SRCR基因,该基因编码蛋白命名为SoSRCRPl。SoSRCRP1含有410个残基,预测是一个跨膜蛋白。SoSRCRP1基因主要在免疫相关组织中表达,受到细菌和病毒刺激后表达上调。细胞定位探讨表明SoSRCRP1位于细胞表面。SoSRCRP1的SRCR功能域在大肠杆菌表达后,获得的重组蛋白rSoSRCRPl能够结合革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。对SoSRCRP1的五个保守位点进行突变,获得5个突变蛋白,发现相对于rSoSRCRPl,突变蛋白与细菌的结合能力明显降低。总之,这些结果表明SoSRCRP1是一个位于膜上的SRCR蛋白,有结合细菌的能力,该能力依赖于五个保守氨基酸的结构。在MIF探讨中,我们发现红鱼MIF (SoMIF)含有115个氨基酸残基,同些硬骨鱼的相似度达到85%-99%。SoMIF在各个组织中都有表达,受到细菌和病毒感染后表达量上调。细胞定位探讨表明该蛋白是一个分泌蛋白。功能检测表明,重组SoMIF (rSoMIF)可从抑制单核细胞和淋巴细胞的迁移。当rSoMIF注射到红鱼中时,可引起头肾单核细胞活性氧的产生。体内感染探讨表明,腹腔注射rSoMIF可从降低细菌在血、脾、肾和肝中的感染。这些结果表明rSoMIF可从调控免疫细胞迁移,并且参与病原引起的免疫反应。关键词：清道夫受体论文美国红鱼论文方式识别受体论文巨噬细胞迁移抑制因子论文细胞迁移论文
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摘要5-6
ABSTRACT6-8
目录8-13
第一章 文献综述13-43

1.1 红鱼介绍13-14

1.1 形态特点13

1.2 生活习性13

1.3 繁殖习性13-14

1.2 鱼类免疫体系介绍14-22

1.2.1 鱼类免疫体系的发生14-15

1.2.2 鱼类免疫器官15-16

1.2.3 非特异性免疫16-20

1.2.3.1 非特异性体液免疫16-18

1.2.3.2 非特异性细胞免疫18-20

1.2.4 特异性免疫20-22

1.2.4.1 特异性体液免疫20-21

1.2.4.2 特异性细胞免疫21-22

1.3. 清道夫受体和SRCR超家族（SRCR-）22-34

1.3.1 SRCR超家族结构24-26

1.3.2 SRCR家族功能26-27

1.3.3 SR-A结构极为免疫意义27-28

1.3.4 MARCO结构极为免疫意义28-31

1.3.5 SCARA5结构及功能31

1.3.6 其他SRCR家族成员31-34

1.4 MIF34-43

1.4.1 MIF的结构和生物活性34-35

1.4.2 MIF细胞来源和组织分布35-36

1.4.3 MIF和先天性免疫36-37

1.4.4 MIF和获得性免疫37-38

1.4.5 MIF与炎症38-40

1.4.5.1 MIF在动脉粥样硬化中的意义38-39

1.4.5.2 MIF和败血病39-40

1.4.6 MIF和肿瘤40-41

1.4.7 MIF在肥胖和2型糖尿病中的意义41-43

第二章 红鱼一种清道夫受体SoSRCRP1基因的克隆及功能分析43-83

2.1 材料和办法43-70

2.

1.1 实验动物及菌株来源43

2.

1.2 试剂43-44

2.

1.3 仪器44-45

2.

1.4 引物45-46

2.

1.5 SoSRCRP1基因的克隆46

2.

1.6 序列分析46

2.

1.7 原核蛋白表达载体构建46-52

2.1.7.1 SoSRCRP1中SR论文导读：抗体的制备853.1.9荧光定量PCR分析鱼组织中的rSoMIF表达853.1.10rSoMIF对细胞迁移的影响85-863.1.11rSoMIF在体内的影响86-873.2实验结果87-943.2.1SoMIF的序列分析87-893.2.2制备纯化重组蛋白SoMIF(rSoMIF)和抗rSoMIF血清893.2.3rSoMIF内毒素去除893.2.4SoMIF在鱼组织中的表达89-913.2.5SoMIF在头肾白细胞中的表达
CR功能域的基因扩增47-48
2.

1.7.2 体会态细胞制备48-49

2.

1.7.3 TA克隆49-50

2.

1.7.4 质粒酶切50-51

2.

1.7.5 表达载体构建连接51-52

2.

1.8 蛋白突变载体构建52-53

2.

1.9 原核表达体系重组蛋白表达及纯化53-61

2.

1.9.1 原核表达体系重组蛋白表达53-54

2.

1.9.2 SDS-PAGE54-56

2.

1.9.3 重组蛋白的纯化56-61

2.

1.10 抗rSoSRCRP1多克隆抗体的制备61-64

2.

1.10.1 多克隆抗体制备61-62

2.

1.10.2 ELISA检测血清效价62

2.

1.10.3 Westernblot62-64

2.

1.11 荧光定量PCR分析鱼组织中的SoSRCRP1表达64-68

2.

1.11 SoSRCRP1在红鱼中的组织特异性表达64-65

2.

1.12 病原刺激后SoSRCRP1的表达65

2.

1.13 SoSRCRP1在头肾细胞中的表达65-68

2.

1.12 SoSRCRP1的亚细胞定位68

2.

1.13 rSoSRCRP1蛋白结合细菌能力检测68-70

2.

1.13.1 ELISA检测重组蛋白结合活性68-69

2.

1.13.2 荧光显微镜检测结合活性69-70

2.2 实验结果70-80

2.1 SoSRCRP1的序列分析70

2.2.2 重组蛋白SoSRCRP1(rSoSRCRP1)和抗rSoSRCRP1血清的制备.6070-73

2.3 SoSRCRP1在红鱼组织中的表达73-75

2.4 SoSRCRP1在头肾细胞中的表达及定位75-77

2.5 rSoSRCRP1同病原细菌的结合77-79

2.6 SRCR中保守结构对rSoSRCRP1细菌结合能力的影响79-80

2.3 讨论80-83

第三章 红鱼MIF调控免疫细胞迁移并参与病原介导的免疫反应83-96

3.1 材料和办法83-87

3.

1.1 实验动物及菌株来源83

3.

1.2 试剂83

3.

1.3 仪器83

3.

1.4 序列分析83

3.

1.5 原核蛋白表达载体pEtMif和pEtOmp257构建83-84

3.

1.6 蛋白诱导及纯化84

3.

1.7 内毒素去除84-85

3.

1.8 抗rSoMIF多克隆抗体的制备85

3.

1.9 荧光定量PCR分析鱼组织中的rSoMIF表达85

3.

1.10 rSoMIF对细胞迁移的影响85-86

3.

1.11 rSoMIF在体内的影响86-87

3.2 实验结果87-94
3.

2.1 SoMIF的序列分析87-89

3.

2.2 制备纯化重组蛋白SoMIF(rSoMIF)和抗rSoMIF血清89

3.

2.3 rSoMIF内毒素去除89

3.

2.4 SoMIF在鱼组织中的表达89-91

3.

2.5 SoMIF在头肾白细胞中的表达91

3.

2.6 rSoMIF对单核细胞和淋巴细胞迁移的影响91-93

3.

2.7 rSoMIF对鱼体宿主免疫反应的影响93-94

3.3 讨论94-96
结论96-98
参考文献98-120
个人简历120-121
博士期间发表文章121