论肾小管NF-κB和FcγR在糖尿病肾病中作用及黄芩素干预学术
最后更新时间：2024-03-27
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论文导读：糖诱导的HK-2细胞IκBa蛋白表达下调有显著的抑制意义,与高糖组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素1234下一页
摘要：近年探讨提示,炎症和免疫是糖尿病肾病的重要发病机制,本探讨通过实验探讨和临床探讨两方面,分别观察NF-κB炎症信号通路,免疫受体Fcγ RIIB/C蛋白在糖尿病肾病发生进展历程中的意义。实验探讨：黄芩素在高糖诱导人近端肾小管上皮细胞损伤中的意义和机制探讨NF-κB作为一个炎症信号通路的关键因子,其介导的炎症反应在糖尿病肾病的病理进展历程中起着十分重要的意义,但其在糖尿病近端肾小管上皮细胞损伤中的意义尚不明确。本实验通过体外探讨发现：NF-κB信号激活参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤；中药黄芩的单体成分—黄芩素,可能通过抑制NF-κB通路激活,减轻高糖诱导的肾脏细胞炎症状态。目的：1.观察高糖对HK-2细胞糖毒性意义及相关信号通路。2.黄芩素干预高糖诱导HK-2细胞损伤的意义及机制探讨。办法：不同糖浓度(5.5mM-60mM)和不同甘露醇浓度(30mM,45mM,分别对应各高糖渗透压)孵育HK-2细胞24h,观察细胞活力变化。不同糖浓度(5.5mM-45mM)刺激HK-2细胞24h,观察IκBα-和p65蛋白表达规律。不同剂量的黄芩素(25-200uM)处理未加刺激的HK-2细胞36h,观察细胞活力变化。选择45mM浓度的葡萄糖刺激HK-2细胞24h,将NF-κB特异抑制剂PDTC作为阳性对照,观察不同剂量黄芩素(25-100uM)对高糖诱导的HK-2细胞NF-KB通路激活极为下游炎症因子和细胞外基质的影响。MTT比色法检测细胞活力。Western blot法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IKBa、p65、 p-p65、IKKa),极为下游炎症分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和细胞外基质重要成分IV型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)表达。结果：1.高糖诱导的HK-2细胞糖毒性损伤不同糖浓度(5.5mM、15mM、30mM、45mM、60mM)孵育HK-2细胞24h后,MTT法检测细胞活力。5.5maM浓度的葡萄糖视为正常糖对照组。结果发现不同糖浓度呈浓度依赖性对HK-2细胞活力有着抑制意义,与正常糖对照组对比,除15mM浓度的葡萄糖外(P0.05),30mM、45mM、60mM浓度的葡萄糖差别有明显性(P0.05,P0.01);30mM、45mM浓度的葡萄糖与60mM浓度的葡萄糖对比差别有明显性(P0.05)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。不同甘露醇浓度(35mM,45mM,分别对应各高糖渗透压)孵育HK-2细胞24h后,结果发现与止常糖对照组对比,30mM.45mM浓度的甘露醇对HK-2细胞活力没有显著的抑制意义(P0.05)；30mM与45maM浓度的甘露醇对比差别无明显性(P0.05)。上面陈述的结果提示高糖诱导的HK-2细胞毒性损伤呈一定的浓度依赖联系,且与渗透压意义无显著关联。结合国内外相关探讨及死亡细胞过多会影响实验结果的经验,本探讨初步选择5.5mM-45mM浓度的葡萄糖进行下一步实验。2.高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活的意义Western blot结果发现：IκBa蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而逐渐降低,与正常糖对照组对比,30mM、45mM浓度的葡萄糖差别有明显性(P0.05,P0.01)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。p65蛋白随葡萄糖浓度的升高而表达上调,30maM、45mM浓度的葡萄糖与正常糖对照组对比差别有明显性(P0.05,P0.01)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。提示高糖刺激HK-2细胞下调IκBα蛋白表达和上调p65蛋白表达,呈一定的浓度依赖联系。由此,本探讨选择45mM浓度的葡萄糖作为高糖刺激组,进行黄芩素干预实验探讨。3.黄芩素对正常培养的HK-2细胞活力的影响MTT法实验结果所示：25uM、50uM、100uM剂量的黄芩素对未加刺激正常培养的HK-2细胞活力没有显著的抑制意义,与空白对照组对比差别无明显性(P0.05);200uM的黄芩素对正常培养的HK-2细胞活力有显著的抑制意义,与空白对照组对比差别有明显性(P0.05)。提示200uM剂量的黄芩素对HK-2细胞有着一定的细胞毒性。基于本实验结果,初步选择25uM、50uM、100uM剂量的黄芩素,分别设为黄芩素低剂量组、黄芩素中剂量组、黄芩素高剂量组进行下一步实验。4.黄芩素对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活的意义1)黄芩素干预抑制高糖诱导的HK-2细胞IκBa蛋白表达下调Western blot实验结果所示：100uM的NF-κB特异抑制剂PDTC对高糖诱导的HK-2细胞IκBa蛋白表达下调有显著的抑制意义,与高糖组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素论文导读：tors)可从刺激外周血中性粒细胞NF-kB通路激活,提示FcyRs与NF-κB密切相关。FcγRs是免疫球蛋白G(IgG)恒定区Fc的受体。最新的探讨发现,激活型FcγRs参与免疫复合物介导的糖尿病小鼠肾脏炎症历程,而抑制型FcγRIIB能够抑制激活型FcγRs的功能；且C反应蛋白(CRP)参与FcγRs和NF-κB的激活。由此,观察FcγRIIB/C在糖尿病肾病
可从剂量依赖性的抑制高糖诱导的HK-2细胞IKBa蛋白表达下调,其中黄芩素中、高剂量组与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01),黄芩素低剂量组与高糖组对比无明显差别(P0.05)。2)黄芩素抑制高糖诱导的HK-2细胞p65活化Western blot实验结果所示：高糖刺激HK-2细胞24h可明显上调p-p65/p65比值,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能抑制高糖诱导的HK-2细胞p-p65/p65比值上调,与高糖组对比差别有明显性(P0.05,P0.01)；黄芩素低剂量组与高糖组对比无明显差别(P0.05)。提示高糖通过磷酸化意义活化p65推动其向胞核转位；黄芩素呈一定的剂量依赖联系阻断p65活化。3)黄芩素干预抑制高糖诱导的HK-2细胞IKKa表达Western blot实验结果所示：高糖刺激HK-2细胞24h可明显上调IKKa蛋白表达,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组能下调高糖诱导的HK-2细胞IKKa蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。结合上面陈述的结果,提示黄芩素可能通过抑制IKKa介导的IκBα降解和p65磷酸化,抑制NF-κB通路激活。5.黄芩素干预对高糖诱导的HK-2细胞炎症分子MCP-1、ICAM-1表达的影响Western blot实验结果所示：高糖刺激24h可诱导HK-2细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能下调高糖诱导的MCP-1、ICAM-1蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。6.黄芩素干预对高糖诱导的HK-2细胞外基质成分Collagen IV表达的影响Western blot实验结果所示：高糖刺激24h可诱导HK-2细胞Collagen IV蛋白表达上调,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能下调高糖诱导的Collagen IV蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。结论：1.高糖诱导的HK-2细胞毒性损伤呈一定的浓度依赖联系,且与渗透压意义无显著关联。高糖能够刺激HK-2细胞1KKα/IκBα/p65通路激活,并上调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,及推动ECM成分Collagen IV堆积。2.黄芩素可从通过抑制高糖诱导的HK-2细胞IKKα/IκBα/p65通路激活,下调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,减少ECM成分Collagen IV堆积。提示黄芩素可从通过减轻肾脏细胞炎症来延缓糖尿病肾病的发展,且与抑制NF-κB炎症信号通路的激活密切相关。临床探讨：Fcγ RIIB/C与糖尿病肾病相关性及中医证型分析在第一部分探讨中,我们证实,炎症最关键的通路NF-kB的激活参与了DN的发生进展。从往的探讨发现,促炎症免疫受体Fcγ Rs (Fc gamma receptors)可从刺激外周血中性粒细胞NF-kB通路激活,提示FcyRs与NF-κB密切相关。Fcγ Rs是免疫球蛋白G(IgG)恒定区Fc的受体。最新的探讨发现,激活型Fcγ Rs参与免疫复合物介导的糖尿病小鼠肾脏炎症历程,而抑制型Fcγ RIIB能够抑制激活型Fcγ Rs的功能；且C反应蛋白(CRP)参与Fcγ Rs和NF-κB的激活。由此,观察FcγRIIB/C在糖尿病肾病中的表达规律,分析其与超敏C反应蛋白(hs-CRP)等相关指标的联系,对糖尿病肾病的临床与实验探讨可能具有一定的价值。目的：1.观察血清Fcγ RIIB/C在糖尿病肾病中的表达规律；2.观察血清hs-CRP在糖尿病肾病中的表达规律;3.分析Fcγ RIIB/C与hs-CRP等相关指标的联系；4.分析糖尿病肾病中医证型分布特征；5.分析糖尿病肾病中医证型与hs-CRP的联系。办法：探讨对象为2012年6月至2013年1月我院内分泌科和肾病科住院的2型糖尿病(含糖尿病肾病)患者共53例。参照文献根据尿白蛋白/肌酐比值分为：①糖尿病正常蛋白尿组(DM)：尿白蛋白/肌酐比值40mg/g,其中男8例,女10例,年龄55.44±14.51岁；②糖尿病微量蛋白尿组(DNl)：尿白蛋白／肌酐比值为40～300mg/g,其中男10例,女8例,年龄59.15±13.45岁；③糖尿病临床蛋白尿组(DN2):尿白蛋白/肌酐比值为300mg/g,其中男8例,女9例,年龄62.60±8.73岁。另设健康对照组(NC)：10例,其中男4例,女6例,年龄52.00±13.58岁。记录临床基本资料,如年龄、身高、体重、病程、血压、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血肌酐、胰岛素抵抗指数、超论文导读：
敏C反应蛋白等,并进行中医证型分析。酶联免疫吸附法检测血清Fcγ RIIB/C蛋白水平。结果：1.各组基本临床资料对比结果显示：DN2组患者年龄最大,与NC组对比有明显差异(P0.05)。DN1组和DN2组患者病程显著延长,与DM组对比有明显差异(P0.05)。DN1组总胆固醇最高,与DM组对比有明显差异(P0.05)。NC组、DM组和DN2组低密度脂蛋白低于DN1组,差异具有明显性(P0.05)。DM组、DN1组和DN2组胰岛素抵抗指数高于NC组,其中DM组和DN2组与NC组对比有明显(P0.05)。血压、体重指数、甘油三酯、血肌酐、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白各组间对比无明显差异(P0.05)。2.DM组(18.06±5.34)血清Fcγ RIIB/C浓度明显低于NC组(25.28±8.96)、DN1组(26.75±9.15)和DN2组(24.09±8.39),差异具有明显性(P0.05,P0.0I)。DN1和DN2组血Fcγ RIIB/C浓度与NC组相近,差异无明显性(P0.05)。3.DM组(2.06±1.60)、DN1组(3.21±2.20)、DN2组(1.90±2.14)血清hs-CRP浓度明显高于NC组(0.86±0.94)(P0.05,P0.01)。DN1组血清hs-CRP浓度高于DM组和DN2组,但三组无明显差别(P0.05)。4.血清Fcγ RIIB/C仅与hs-CRP呈负相关(r=-0.276,P=0.048),与年龄、病程、血压、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血肌酐、胰岛素抵抗指数、尿白蛋白/肌酐比值均无显著相关。5.本证证型中未见阴阳两虚证；阴虚证、气阴两虚证、脾肾气虚证三个本证中,从气阴两虚证为主,明显高于阴虚证、脾肾气虚证(P0.01)。标证从血瘀证、湿热证为主,血瘀证明显多于湿热证(P0.01)。6.糖尿病肾病患者本证证型中,阴虚证(2.40±1.06)、气阴两虚证(3.84±1.93)、脾肾气虚证(2.13±0.90)血清hs-CRP浓度明显高于健康对照组(0.86±0.94)(P0.05,P0.01),气阴两虚证血清hs-CRP浓度明显高于阴虚、脾肾气虚组(P0.05)。标证证型中,湿热证(4.28±2.12)、血瘀证(1.83±1.65)血清hs-CRP浓度与健康对照组对比有明显差别(P0.05,P0.01)；湿热证血清hs-CRP浓度明显高于血瘀证(P0.05)。结论：1.糖尿病肾病患者血清Fcγ RIIB/C浓度没有明显变化,不能为糖尿病肾病诊断和治疗提供依据；2.糖尿病肾病患者有着微炎症状态；3.血清Fcγ RIIB/C与微炎症状态呈负相关；4.气阴两虚,瘀血阻络兼夹湿热是糖尿病肾病早中期的基本病机；5. hs-CRP水平与中医证型相关,在一定程度上为中医辨证分型提供客观依据。关键词：糖尿病肾病论文近端肾小管上皮细胞论文黄芩素论文NF-κB信号通路论文Fcγ论文RⅡB/C论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。中文摘要3-8
Abstract8-18
引言18-20
第一章 文献探讨20-34
第一节 糖尿病肾小管病探讨发展20-25
第一节 实验材料34-37
导的HK-2细胞炎症分子MCP-
第三章 临床探讨53-64
第一节 探讨对象53-54
第三节 探讨办法54-57
附录75-77
附录
摘要：近年探讨提示,炎症和免疫是糖尿病肾病的重要发病机制,本探讨通过实验探讨和临床探讨两方面,分别观察NF-κB炎症信号通路,免疫受体Fcγ RIIB/C蛋白在糖尿病肾病发生进展历程中的意义。实验探讨：黄芩素在高糖诱导人近端肾小管上皮细胞损伤中的意义和机制探讨NF-κB作为一个炎症信号通路的关键因子,其介导的炎症反应在糖尿病肾病的病理进展历程中起着十分重要的意义,但其在糖尿病近端肾小管上皮细胞损伤中的意义尚不明确。本实验通过体外探讨发现：NF-κB信号激活参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤；中药黄芩的单体成分—黄芩素,可能通过抑制NF-κB通路激活,减轻高糖诱导的肾脏细胞炎症状态。目的：1.观察高糖对HK-2细胞糖毒性意义及相关信号通路。2.黄芩素干预高糖诱导HK-2细胞损伤的意义及机制探讨。办法：不同糖浓度(5.5mM-60mM)和不同甘露醇浓度(30mM,45mM,分别对应各高糖渗透压)孵育HK-2细胞24h,观察细胞活力变化。不同糖浓度(5.5mM-45mM)刺激HK-2细胞24h,观察IκBα-和p65蛋白表达规律。不同剂量的黄芩素(25-200uM)处理未加刺激的HK-2细胞36h,观察细胞活力变化。选择45mM浓度的葡萄糖刺激HK-2细胞24h,将NF-κB特异抑制剂PDTC作为阳性对照,观察不同剂量黄芩素(25-100uM)对高糖诱导的HK-2细胞NF-KB通路激活极为下游炎症因子和细胞外基质的影响。MTT比色法检测细胞活力。Western blot法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IKBa、p65、 p-p65、IKKa),极为下游炎症分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和细胞外基质重要成分IV型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)表达。结果：1.高糖诱导的HK-2细胞糖毒性损伤不同糖浓度(5.5mM、15mM、30mM、45mM、60mM)孵育HK-2细胞24h后,MTT法检测细胞活力。5.5maM浓度的葡萄糖视为正常糖对照组。结果发现不同糖浓度呈浓度依赖性对HK-2细胞活力有着抑制意义,与正常糖对照组对比,除15mM浓度的葡萄糖外(P0.05),30mM、45mM、60mM浓度的葡萄糖差别有明显性(P0.05,P0.01);30mM、45mM浓度的葡萄糖与60mM浓度的葡萄糖对比差别有明显性(P0.05)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。不同甘露醇浓度(35mM,45mM,分别对应各高糖渗透压)孵育HK-2细胞24h后,结果发现与止常糖对照组对比,30mM.45mM浓度的甘露醇对HK-2细胞活力没有显著的抑制意义(P0.05)；30mM与45maM浓度的甘露醇对比差别无明显性(P0.05)。上面陈述的结果提示高糖诱导的HK-2细胞毒性损伤呈一定的浓度依赖联系,且与渗透压意义无显著关联。结合国内外相关探讨及死亡细胞过多会影响实验结果的经验,本探讨初步选择5.5mM-45mM浓度的葡萄糖进行下一步实验。2.高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活的意义Western blot结果发现：IκBa蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而逐渐降低,与正常糖对照组对比,30mM、45mM浓度的葡萄糖差别有明显性(P0.05,P0.01)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。p65蛋白随葡萄糖浓度的升高而表达上调,30maM、45mM浓度的葡萄糖与正常糖对照组对比差别有明显性(P0.05,P0.01)；30mM与45mM浓度的葡萄糖对比差别无明显性(P0.05)。提示高糖刺激HK-2细胞下调IκBα蛋白表达和上调p65蛋白表达,呈一定的浓度依赖联系。由此,本探讨选择45mM浓度的葡萄糖作为高糖刺激组,进行黄芩素干预实验探讨。3.黄芩素对正常培养的HK-2细胞活力的影响MTT法实验结果所示：25uM、50uM、100uM剂量的黄芩素对未加刺激正常培养的HK-2细胞活力没有显著的抑制意义,与空白对照组对比差别无明显性(P0.05);200uM的黄芩素对正常培养的HK-2细胞活力有显著的抑制意义,与空白对照组对比差别有明显性(P0.05)。提示200uM剂量的黄芩素对HK-2细胞有着一定的细胞毒性。基于本实验结果,初步选择25uM、50uM、100uM剂量的黄芩素,分别设为黄芩素低剂量组、黄芩素中剂量组、黄芩素高剂量组进行下一步实验。4.黄芩素对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活的意义1)黄芩素干预抑制高糖诱导的HK-2细胞IκBa蛋白表达下调Western blot实验结果所示：100uM的NF-κB特异抑制剂PDTC对高糖诱导的HK-2细胞IκBa蛋白表达下调有显著的抑制意义,与高糖组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素论文导读：tors)可从刺激外周血中性粒细胞NF-kB通路激活,提示FcyRs与NF-κB密切相关。FcγRs是免疫球蛋白G(IgG)恒定区Fc的受体。最新的探讨发现,激活型FcγRs参与免疫复合物介导的糖尿病小鼠肾脏炎症历程,而抑制型FcγRIIB能够抑制激活型FcγRs的功能；且C反应蛋白(CRP)参与FcγRs和NF-κB的激活。由此,观察FcγRIIB/C在糖尿病肾病
可从剂量依赖性的抑制高糖诱导的HK-2细胞IKBa蛋白表达下调,其中黄芩素中、高剂量组与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01),黄芩素低剂量组与高糖组对比无明显差别(P0.05)。2)黄芩素抑制高糖诱导的HK-2细胞p65活化Western blot实验结果所示：高糖刺激HK-2细胞24h可明显上调p-p65/p65比值,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能抑制高糖诱导的HK-2细胞p-p65/p65比值上调,与高糖组对比差别有明显性(P0.05,P0.01)；黄芩素低剂量组与高糖组对比无明显差别(P0.05)。提示高糖通过磷酸化意义活化p65推动其向胞核转位；黄芩素呈一定的剂量依赖联系阻断p65活化。3)黄芩素干预抑制高糖诱导的HK-2细胞IKKa表达Western blot实验结果所示：高糖刺激HK-2细胞24h可明显上调IKKa蛋白表达,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组能下调高糖诱导的HK-2细胞IKKa蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。结合上面陈述的结果,提示黄芩素可能通过抑制IKKa介导的IκBα降解和p65磷酸化,抑制NF-κB通路激活。5.黄芩素干预对高糖诱导的HK-2细胞炎症分子MCP-1、ICAM-1表达的影响Western blot实验结果所示：高糖刺激24h可诱导HK-2细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能下调高糖诱导的MCP-1、ICAM-1蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。6.黄芩素干预对高糖诱导的HK-2细胞外基质成分Collagen IV表达的影响Western blot实验结果所示：高糖刺激24h可诱导HK-2细胞Collagen IV蛋白表达上调,与正常糖对照组对比有明显差别(P0.01)；黄芩素中、高剂量组和PDTC组能下调高糖诱导的Collagen IV蛋白表达,与高糖组对比有明显差别(P0.05,P0.01)。结论：1.高糖诱导的HK-2细胞毒性损伤呈一定的浓度依赖联系,且与渗透压意义无显著关联。高糖能够刺激HK-2细胞1KKα/IκBα/p65通路激活,并上调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,及推动ECM成分Collagen IV堆积。2.黄芩素可从通过抑制高糖诱导的HK-2细胞IKKα/IκBα/p65通路激活,下调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,减少ECM成分Collagen IV堆积。提示黄芩素可从通过减轻肾脏细胞炎症来延缓糖尿病肾病的发展,且与抑制NF-κB炎症信号通路的激活密切相关。临床探讨：Fcγ RIIB/C与糖尿病肾病相关性及中医证型分析在第一部分探讨中,我们证实,炎症最关键的通路NF-kB的激活参与了DN的发生进展。从往的探讨发现,促炎症免疫受体Fcγ Rs (Fc gamma receptors)可从刺激外周血中性粒细胞NF-kB通路激活,提示FcyRs与NF-κB密切相关。Fcγ Rs是免疫球蛋白G(IgG)恒定区Fc的受体。最新的探讨发现,激活型Fcγ Rs参与免疫复合物介导的糖尿病小鼠肾脏炎症历程,而抑制型Fcγ RIIB能够抑制激活型Fcγ Rs的功能；且C反应蛋白(CRP)参与Fcγ Rs和NF-κB的激活。由此,观察FcγRIIB/C在糖尿病肾病中的表达规律,分析其与超敏C反应蛋白(hs-CRP)等相关指标的联系,对糖尿病肾病的临床与实验探讨可能具有一定的价值。目的：1.观察血清Fcγ RIIB/C在糖尿病肾病中的表达规律；2.观察血清hs-CRP在糖尿病肾病中的表达规律;3.分析Fcγ RIIB/C与hs-CRP等相关指标的联系；4.分析糖尿病肾病中医证型分布特征；5.分析糖尿病肾病中医证型与hs-CRP的联系。办法：探讨对象为2012年6月至2013年1月我院内分泌科和肾病科住院的2型糖尿病(含糖尿病肾病)患者共53例。参照文献根据尿白蛋白/肌酐比值分为：①糖尿病正常蛋白尿组(DM)：尿白蛋白/肌酐比值40mg/g,其中男8例,女10例,年龄55.44±14.51岁；②糖尿病微量蛋白尿组(DNl)：尿白蛋白／肌酐比值为40～300mg/g,其中男10例,女8例,年龄59.15±13.45岁；③糖尿病临床蛋白尿组(DN2):尿白蛋白/肌酐比值为300mg/g,其中男8例,女9例,年龄62.60±8.73岁。另设健康对照组(NC)：10例,其中男4例,女6例,年龄52.00±13.58岁。记录临床基本资料,如年龄、身高、体重、病程、血压、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血肌酐、胰岛素抵抗指数、超论文导读：
敏C反应蛋白等,并进行中医证型分析。酶联免疫吸附法检测血清Fcγ RIIB/C蛋白水平。结果：1.各组基本临床资料对比结果显示：DN2组患者年龄最大,与NC组对比有明显差异(P0.05)。DN1组和DN2组患者病程显著延长,与DM组对比有明显差异(P0.05)。DN1组总胆固醇最高,与DM组对比有明显差异(P0.05)。NC组、DM组和DN2组低密度脂蛋白低于DN1组,差异具有明显性(P0.05)。DM组、DN1组和DN2组胰岛素抵抗指数高于NC组,其中DM组和DN2组与NC组对比有明显(P0.05)。血压、体重指数、甘油三酯、血肌酐、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白各组间对比无明显差异(P0.05)。2.DM组(18.06±5.34)血清Fcγ RIIB/C浓度明显低于NC组(25.28±8.96)、DN1组(26.75±9.15)和DN2组(24.09±8.39),差异具有明显性(P0.05,P0.0I)。DN1和DN2组血Fcγ RIIB/C浓度与NC组相近,差异无明显性(P0.05)。3.DM组(2.06±1.60)、DN1组(3.21±2.20)、DN2组(1.90±2.14)血清hs-CRP浓度明显高于NC组(0.86±0.94)(P0.05,P0.01)。DN1组血清hs-CRP浓度高于DM组和DN2组,但三组无明显差别(P0.05)。4.血清Fcγ RIIB/C仅与hs-CRP呈负相关(r=-0.276,P=0.048),与年龄、病程、血压、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血肌酐、胰岛素抵抗指数、尿白蛋白/肌酐比值均无显著相关。5.本证证型中未见阴阳两虚证；阴虚证、气阴两虚证、脾肾气虚证三个本证中,从气阴两虚证为主,明显高于阴虚证、脾肾气虚证(P0.01)。标证从血瘀证、湿热证为主,血瘀证明显多于湿热证(P0.01)。6.糖尿病肾病患者本证证型中,阴虚证(2.40±1.06)、气阴两虚证(3.84±1.93)、脾肾气虚证(2.13±0.90)血清hs-CRP浓度明显高于健康对照组(0.86±0.94)(P0.05,P0.01),气阴两虚证血清hs-CRP浓度明显高于阴虚、脾肾气虚组(P0.05)。标证证型中,湿热证(4.28±2.12)、血瘀证(1.83±1.65)血清hs-CRP浓度与健康对照组对比有明显差别(P0.05,P0.01)；湿热证血清hs-CRP浓度明显高于血瘀证(P0.05)。结论：1.糖尿病肾病患者血清Fcγ RIIB/C浓度没有明显变化,不能为糖尿病肾病诊断和治疗提供依据；2.糖尿病肾病患者有着微炎症状态；3.血清Fcγ RIIB/C与微炎症状态呈负相关；4.气阴两虚,瘀血阻络兼夹湿热是糖尿病肾病早中期的基本病机；5. hs-CRP水平与中医证型相关,在一定程度上为中医辨证分型提供客观依据。关键词：糖尿病肾病论文近端肾小管上皮细胞论文黄芩素论文NF-κB信号通路论文Fcγ论文RⅡB/C论文
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Abstract8-18
引言18-20
第一章 文献探讨20-34
第一节 糖尿病肾小管病探讨发展20-25
一、近端肾小管重吸收葡萄糖的生理机制20-21
二、糖尿病肾小管病变的主要病理机制21-22
三、近端肾小管上皮细胞在糖尿病肾小管病中的意义22-24
四、结语与展望24-25
第二节 Fcγ Rs相关探讨发展25-28一、Fcγ Rs家族25-26
二、Fcγ Rs与C反应蛋白26
三、Fcγ Rs与动脉粥样硬化26-27
四、Fcγ Rs与糖尿病肾病27-28
五、结语与展望28
第三节 糖尿病肾病中医药探讨发展28-34一、糖尿病肾病中医病名28
二、糖尿病肾病中医病因病机28-30
三、临床探讨30-32
四、基础实验探讨32-33
五、结语33-34
第二章 实验探讨34-53第一节 实验材料34-37
一、实验细胞34
二、主要实验试剂34-35
三、主要实验试剂配制35-36
四、主要仪器36-37
第二节 实验办法37-53一、细胞培养37
二、细胞传代37
三、实验分组37-38
四、MTT比色法38
五、Western blot检测办法38-41
六、统计学办法41-42
第三节 实验结果42-49一、HK-2细胞株形态42
二、高糖诱导的HK-2细胞糖毒性损伤42-43
三、高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活意义43-44
四、黄芩素对正常培养的HK-2细胞活力的影响44-45
五、黄芩素对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活的影响45-47
六、黄芩素干预对高糖诱论文导读：C浓度对比57-58三、NC组、DM组、DN1和DN2组间患者血清hs-CRP浓度对比58-59四、FcγRIIB/C与hs-CRP等指标相关性分析59-60五、糖尿病肾病患者中医证型分布与血清hs-CRP的联系60-62第五节讨论62-64结语64-65一、结论64二、展望64-65参考文献65-75附录75-77附录一英文缩略语75-76附录二在校期间发表论文状况76-77致谢77导的HK-2细胞炎症分子MCP-
1、ICAM-1表达的影47-49
七、黄芩素干预对高糖诱导的HK-2细胞外基质成分Collagen Ⅳ表达的影响49
第四节 讨论49-53第三章 临床探讨53-64
第一节 探讨对象53-54
一、纳入标准53
二、排除标准53
三、西医诊断标准53-54
四、病例分组54
第二节 主要实验试剂及仪器54第三节 探讨办法54-57
一、标本收集54
二、主要指标检测办法54-56
三、中医辩证分型标准56
四、统计学办法56-57
第四节 实验结果57-62一、NC组、DM组、DN1和DN2组间患者临床资料对比57
二、NC组、DM组、DN1和DN2组间患者血清FcγRIIB/C浓度对比57-58
三、NC组、DM组、DN1和DN2组间患者血清hs-CRP浓度对比58-59
四、Fcγ RIIB/C与hs-CRP等指标相关性分析59-60
五、糖尿病肾病患者中医证型分布与血清hs-CRP的联系60-62
第五、节讨论62-64
结语64-65一、结论64
二、展望64-65
参考文献65-75附录75-77
附录