探究牙周炎五丹散凝胶对糖尿病合并牙周炎大鼠治疗意义及免疫机制初探

论文导读：alsotheinfluencefornterleukins-2（IL-2）andinterleukin-1β（IL-1β）.MethodsAccordingtorandomnumbertablemethod，60SDratsweredividedintonormalcontrolgroup（grou摘自：学年论文www.7ctime.compA），diabeticperiodontitiodelcontrolgroup（groupB），Wudansangelatumshort-termgroup
[摘要] 目的 观察五丹散凝胶对糖尿病合并牙周炎大鼠的治疗作用，及外周血白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）的影响，探讨其对糖尿病合并牙周炎免疫调节的作用机制。 方法 将60只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（A组）、糖尿病合并牙周炎造模对照组（B组）、五丹散凝胶短期治疗组（C组）、短期治疗同期阳性对照组（D组）、五丹散凝胶长期治疗组（E组）及长期治疗同期阳性对照组（F组）共6组。经过五丹散凝胶短期治疗（4周）及长期治疗（12周）后，比较各组大鼠牙齿松动度及外周血IL-2、IL-1β水平。 结果 ①牙齿松动度计分：五丹散凝胶治疗的C、E组大鼠牙齿松动度变化计分的减少差异有统计学意义（P < 0.05）。②外周血IL-1β含量：五丹散凝胶治疗组（C、E组）IL-1β含量均低于同时间段阳性对照组（P0.05），随着治疗时间的延长，五丹散凝胶治疗组大鼠的外周血IL-2含量持续上升，在治疗12周后与同时期阳性对照组差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 五丹散凝胶通过降低大鼠血清IL-1β含量，提高IL- 2含量，调整体内Th1/Th2 细胞因子平衡，对糖尿病合并牙周炎大鼠的牙周治疗有良好的效果。
[关键词] 五丹散凝胶；白细胞介素；动物实验；糖尿病；牙周炎
[] A [文章编号] 1674-4721（2013）06（c）-0006-03
Therapeutic action and the discussion of immunologic mechani for Wudansan gelatum treat the diabetes rat of merger of periodontitis
LI Jianwen1 ZHONG Jin1 CUI Lijuan1▲ LUO Ren2
1.The First People's Hospital of Baiyun District of Guangzhou City in Guangdong Province， Guangzhou 510410， China；2.Southern Medical University，Guangzhou 510515， China
[Abstract] Objective To explore the mechani of action of periodontitis immune regulation by observed therapeutic action of Wudansan gelatum treat the diabetes rat of merger of periodontitis，and also the influence for nterleukins-2 （IL-2） and interleukin-1β （IL-1β）. Methods According to random number table method，60 SD rats were divided into normal control group （grou摘自：学年论文www.7ctime.com
p A）， diabetic periodontitis model control group （group B），Wudansan gelatum short-term group （group C），the short-term treatment of positive control group in the same period （group D），Wudansan gelatum long-term treatment group （group E） and the long-term treatment of positive control group in the same period （group F），a total of 6 sets.All of them accepted short-term treatment （4 weeks） and long-term therapy （12 weeks） of Wudansan gelatum，and than，loose teeth and peripheral blood IL-2 and IL-1 beta levels groups of rats would be compared between them. Results ①Degre论文导读：症，糖尿病患者较非糖尿病患者牙周炎发生率高20%～30%，多表现为牙龈肿胀出血、牙间隙增大、牙周脓肿、牙齿松动移位和脱落缺失。近年来，牙周致病菌诱导以Th1为主的细胞免疫反应逐渐引起学者的重视，不少研究证实作为重要免疫应答因子的白细胞介素与促进牙龈组织炎症、加速牙周结缔组织破坏和牙槽骨的吸收有不同程度的关系
e of loose teeth scoring： compared with group C and E which treated by Wudansan gelatum was statistically significant （P < 0.05）. ②The content of IL-1β of peripheral blood content：content IL-1 of Wudansan gelatum treatment group （group C， E） was below with the positive control group in the corresponding period（P0.05）. With the extension of treatment time，content of IL-2 of the peripheral blood has continue to rise，there was a appeared statistical difference （P < 0.05） compared with positive control group at 12 weeks after treatment. Conclusion Wudansan gelatum has a good effect periodontal therapy on diabetic periodontitis rats by djusting the Th1/Th2 cytokines balance inside body by reducing the content of serum IL-1 beta and raise content of IL-2. [Key words] Wudansan gelatum；Interleukin；Animal experiments；Diabetes；Periodontitis
牙周炎是糖尿病患者的常见并发症[1-3]，糖尿病患者较非糖尿病患者牙周炎发生率高20%～30%，多表现为牙龈肿胀出血、牙间隙增大、牙周脓肿、牙齿松动移位和脱落缺失[3]。
近年来，牙周致病菌诱导以 Th1 为主的细胞免疫反应逐渐引起学者的重视，不少研究证实作为重要免疫应答因子的白细胞介素与促进牙龈组织炎症、加速牙周结缔组织破坏和牙槽骨的吸收有不同程度的关系[4]。本实验通过检测五丹散凝胶治疗前后大鼠外周血中细胞因子白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的水平变化，从细胞免疫学的角度分析五丹散凝胶治疗糖尿病合并牙周炎的作用机制。
1 材料与方法

1.1 试验药品制备

本口腔凝胶处方采用本课题组临床经验方五丹散（五倍子15 g、丹参30 g、白芨30 g、黄连45 g），全部中药均来自南方医科大学附属南方医院中药房。将1--2-吡咯烷酮和三乙酸甘油酯按7∶3 配成混合溶剂，加入35%聚乳酸-羟基乙酸共聚物，静置，待完全溶解后加入五倍子、丹参、黄连、白芨水提取物冻干粉，彻底搅拌均匀，漩涡震荡，在常温避光条件下，磁力搅拌机缓慢搅拌5 d，制成含中药终末浓度为40 g/kg的凝胶。静置24 h，4℃避光保存。

1.2 实验动物分组

选用10月龄SD大鼠共60只，体重（400±50） g，雌雄各半，按随机数字表法分成A、B、C、D、E、F共6组，每组10只，全部SD大鼠均来自南方医科大学实验动物中心。A组：正常对照组，于实验开始时处死（0周）；B组：糖尿病合并牙周炎造模对照组，于五丹散凝胶治疗前处死（第4周）；C组：五丹散凝胶短期治疗组，造模后五丹散凝胶治疗4周后处死（第8周）；组：短期治疗同期阳性对照组，于造模后与C组同时处死（第8周）；E组：五丹散凝胶长期治疗组，造模后五丹散凝胶治疗12周处死（第16周）；F组：长期治疗同期阳性对照组，于造模后与E组同时处死（第16周）。

1.3 糖尿病合并牙周炎模型的建立

全部6组大鼠均以软食饲养，按60 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素溶液，72 h后测空腹血糖，高于16.7 mmol/L为糖尿病模型建立成功。糖尿病模型建立成功1周后，开始建立糖尿病合并牙周炎模型，除A组外，其余5组大鼠均按照 Achong 等[5]的方法，2%钠30 mg/kg全麻下，以直径0.20 mm的丝线结扎大鼠双侧上颌第二磨牙颈部，制造牙周炎动物模型。造模时，由于麻醉意外C组1只、F组1只大鼠死亡。

1.4 药物干预

A 组不造模，待其他各组造模成功后处死大鼠，B组于造模后药物干预前，与A组一同处死大鼠，其余4组造模后开始药物干预，其中C、E组在造模成功患牙上使用五丹散凝胶，以完全覆盖患牙为基本治疗用量，阳性对照组（D、F组）使用等量空白凝胶载体。使用频率为2次/d，持续12周。

1.5 动物处死方法及标本采集

5%水合氯醛全麻各大鼠，将全部大鼠经腹主动脉取血5 ml（加肝素钠抗凝），1000 r/min 离心 10 min，吸取上清液0.5 ml，装管标记后，用IL-2 、IL-1β试剂盒测定其浓度。采血过程中，B、F组各有一只大鼠采血量过少（不足5 ml）。最终实际检测样本数为A组10个、B组9个、C组9个、D组10个、E组10个、F组8个。

1.6 统计学处理

采用 SPSS 13.0软件对数据进行单因素方差分析，以 x±s形式表示，以P <0.05为差异有统计学意义。
2 结果

2.1 一般观察的情况

所有大鼠均存活至处死，正常对照组大鼠毛发光洁，饮食、活动正常。牙周炎造模后的B～F组大鼠在论文导读：，能促进T细胞的增殖和活化，抑制T细胞的凋亡、刺激NK细胞的生长和增强其杀伤功能、激发B细胞生长及抗体产生，已经有部分学者通过实验证明其与牙周炎免疫状态有关；IL-1β则在牙周炎的骨破坏过程中还发挥着重要作用，IL-1β可促进骨吸收，且其水平与牙周附着丧失显著相关。五丹散凝胶以五倍子为君收敛解毒，黄连清热泻火为
造模后5～7 d始均不同程度的出现皮毛稀疏、粗糙、光泽度减低，少动倦怠的现象。但随着五丹散凝胶治疗次数的增加，C、E组大鼠的上述表现较D、F组大鼠明显减轻，皮毛逐渐恢复光泽，活动增加。实验结束时E组大鼠全身状态最为接近A组正常大鼠水平，而D、F组大鼠全身状态明显次于C、E组。

2.2 大鼠牙齿松动度变化计分的情况

每只大鼠造模各2颗牙齿，颊舌向松动者计1分，颊舌向、近中远中向均松动者计2分；颊舌向、近中远中向和垂直向均松动者计3分。与D、F组比较，五丹散凝胶治疗的C、E组大鼠牙齿松动度变化计分的减少差异有统源于：论文大纲怎么写www.7ctime.com
计学意义（P < 0.05）（表1）。
表1 五丹散凝胶对糖尿病合并牙周炎大鼠各组治疗前后牙齿
松动度的评分结果（分，x±s）
注：与同时期A组比较，*P < 0.05

2.3 外周血中IL-1β含量的分析

B、C、D、E、F组IL-1β含量明显高于A组（P < 0.05），C、E组IL-1β含量均低于同时间段D、F组（P < 0.05）（表2）。
表 2 五丹散凝胶对糖尿病合并牙周炎大鼠各组治疗前后外周血
IL-1β含量的比较（pg/ml，x±s）
注：与A组比较，*P < 0.05；与同时期A组比较，#P < 0.05

2.4 外周血中IL-2含量的分析

B、C、D、E、F组IL-2含量明显低于A组（P0.05），但随着治疗时间的延长，五丹散凝胶治疗组（C、E组）大鼠的外周血IL-2含量持续上升，在治疗12周后与同时期阳性对照组差异有统计学意义（P < 0.05）（表3）。 3 讨论
早在1928年，William等通过研究认为，糖尿病患者与非糖尿病患者的牙周炎具有不同特征，因此提出了“糖尿病性牙周炎”的概念[6]。糖尿病患者因牙周组织中糖分解代谢、蛋白质和脂肪合成代谢减弱，对局部致病因子敏感性增高，且多合并微循环障碍，导致牙周组织细菌繁殖加速，牙周炎已经成为糖尿病继神经病变、视网膜病变、血管病变、肾病及伤口愈合不良之后的第六并发症[1-3]。
近年来，众多研究显示牙周炎的发病过程与细胞因子的分泌异常导致促炎/抑炎平衡失调有密切关系，多表现为Th1细胞功能相对亢进，Th2细胞功能不足[4，7-10]。IL-2、IL-1β等是细胞免疫应答中的关键因子，IL-2是引起T细胞增殖的主要细胞因子，能促进T细胞的增殖和活化，抑制 T 细胞的凋亡、刺激 NK 细胞的生长和增强其杀伤功能、激发B细胞生长及抗体产生，已经有部分学者通过实验证明其与牙周炎免疫状态有关[11-12]；IL-1β则在牙周炎的骨破坏过程中还发挥着重要作用[13]，IL-1β可促进骨吸收，且其水平与牙周附着丧失显著相关。
五丹散凝胶以五倍子为君收敛解毒，黄连清热泻火为臣药，丹参凉血活血，助黄连清热之功，为佐药，白芨收敛止血，消肿生肌为使药，全方凉血止血，消肿生肌，临床效果较好。本研究表明，五丹散凝胶通过提高糖尿病合并牙周炎模型大鼠外周血IL-2水平，从一定程度上改善了糖尿病合并牙周炎模型大鼠的免疫功能紊乱情况，同时降低IL-1β水平，避免了机体过激的炎症反应，减少了破骨细胞的形成，直接和间接地抑制了骨吸收。五丹散凝胶可有效延缓牙周炎的进程、减轻其炎性反应、抑制破骨细胞的形成及作用，促进牙周膜修复及牙槽骨再生，改善牙周指标[14]。本研究结果显示，五丹散凝胶对2型糖尿病合并牙周炎的治疗有积极的意义，有望为中医药对2型糖尿病合并牙周炎的免疫治疗开辟一条新途径。
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