研讨雌激素丹皮酚对大鼠肝癌前病变预防作用及其药动学

论文导读：率而导致慢性肝病、肝硬化、肝癌的高发性。肝炎-肝纤维化-肝癌前病变-肝癌是慢性肝病的恶性进展历程,肝纤维化具有可逆性,早期诊断和治疗可阻断其向肝硬化方向进展；早期肝癌若得到及时治疗,可提升五年存活率。肝癌前病变是指在慢性肝病中出现的肝细胞不典型增生、腺瘤样增生、肝细胞再生结节、肝细胞小管状化生和卵圆细胞增生
摘要：目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,从下简称肝癌)是一种恶性程度高、预后凶险的肿瘤,5年存活率只有7%左右,是全球第五位最常见的恶性肿瘤,在全世界肿瘤患者的致死率中高居第三位。在我国,由于乙肝病毒(HBV)的高感染率而导致慢性肝病、肝硬化、肝癌的高发性。肝炎-肝纤维化-肝癌前病变-肝癌是慢性肝病的恶性进展历程,肝纤维化具有可逆性,早期诊断和治疗可阻断其向肝硬化方向进展；早期肝癌若得到及时治疗,可提升五年存活率。肝癌前病变是指在慢性肝病中出现的肝细胞不典型增生、腺瘤样增生、肝细胞再生结节、肝细胞小管状化生和卵圆细胞增生,其进展为肝癌的几率高,尤其是肝硬化病灶中出现的异型增生病灶或结节和异型增生的细胞。近年来,虽然肝癌的治疗取得了一定发展,但临床疗效仍未得到显著提升,因而阻止或延缓肝癌前病变的发生进展,预防肝脏癌症的发生,具有重要的现实作用。本论文在前期实验的基础上,建立肝癌前病变大鼠模型,探讨丹皮酚对肝癌前病变的预防效果极为药动学变化。办法1大鼠肝癌前病变模型的建立建立二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱发的肝癌前病变大鼠模型,DEN剂量分别为0.0、25、50、75、100mg/kg,给药18周,观察各组病理变化、异型性指数,回归各组异型性指数与造模处理对数小时时程之间的时效曲线,回归各剂量组曲线下面积(AUCi)与对数效能剂量之间的量效曲线,研究二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前病变的时效联系与量效联系。2丹皮酚对大鼠肝癌前病变的预防意义探讨建立DEN诱发的肝癌前病变大鼠模型,采取丹皮酚进行预防干预,对比各组大鼠的一般状况及肝脏病理组织形态学、生化指标、形态计量相关指标的状况,并运用免疫组化、实时荧光定量PCR(RT-PCR)的办法检测大鼠肝组织甲胎蛋白(AFP)的表达。3丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的药动学探讨建立DEN诱发的肝癌前病变大鼠模型,分别在病变不同阶段灌胃给予丹皮酚,观察丹皮酚在各阶段大鼠体内的药动学变化,并用免疫组化、RT-PCR的办法检测大鼠肝组织雌激素硫酸转移酶(estrogen sulfotranerase, SULT1E1)的表达。结果1大鼠肝癌前病变模型的建立在肝脏组织病变上,0.0mg/kg组各时程肝组织病变轻微,可找到灶性细胞水肿、小滴脂变或点状坏死；25.0、50.0论文导读：,对照组肝小叶结构正常,肝索呈单行放射状排列在静脉周围,肝细胞无变性、坏死,肝窦无狭窄；模型组静脉偏离或缺如,肝索排列紊乱,肝血窦狭窄,在汇管区有大量的结缔组织增生,胶原纤维增生显著,广泛假小叶形成；可见大量肝细胞异型增生灶及异型增生结节,肝细胞大小不等,核仁显著,细胞核具有多形性；丹皮酚组大部分肝小叶结构
mg/kg组随时程,肝组织有“变质-纤维化-肝硬化-异型增生”等阶段性病变；75.0、100.0mg/kg组随时程,肝组织“阶段性病变”出现早、程度重。随时程异型性指数增多,其中,5剂量组分别为0.21%-0.61%、0.20%-1.17%、0.27%-1.55%、0.29%-2.24%、0.30%-2.25%。从异型性指数(肝细胞核/浆体积比校正值),回归0、25、50、75、100mg/kg二乙基亚硝胺造模的半效时程(95%CI)分别为70347(0-)1734(937-3211)、1536(948-2490)、1530(890-2632)、1183(955-1466)h,曲线下面积分别为0.0064、0.0084、0.0123、0.0165、0.0167[异型性指数·log(h)]。从曲线下面积,回归二乙基亚硝胺诱发肝细胞癌前病变的半效剂量为48.255mg/kg。50.000mg/kg造模各时程的异型性指数与核分裂像总数之间呈直线正相关(y=0.0023x-0.0056,r=0.9217,n=10,P0.01)。2丹皮酚对大鼠肝癌前病变的预防意义探讨在大鼠一般状况上,模型组大鼠在予DEN腹腔注射第3周从后开始出现几点相关的病态体现,丹皮酚组大鼠病变程度较模型组轻。在大鼠肝脏大体形态上,对照组大鼠肝脏质地光滑柔软,颜色淡红；模型组大鼠肝脏颜色暗红、肿大,可见黄褐色细颗粒状结节生成；丹皮酚组大鼠肝脏表面相对光滑,结节较少、较小,肝脏体现界于对照组和模型组之间。HE染色显示,对照组肝小叶结构正常,肝索呈单行放射状排列在静脉周围,肝细胞无变性、坏死,肝窦无狭窄；模型组静脉偏离或缺如,肝索排列紊乱,肝血窦狭窄,在汇管区有大量的结缔组织增生,胶原纤维增生显著,广泛假小叶形成；可见大量肝细胞异型增生灶及异型增生结节,肝细胞大小不等,核仁显著,细胞核具有多形性；丹皮酚组大部分肝小叶结构接近正常,肝索排列仍较紊乱,肝细胞变性坏死、结缔组织增生程度较轻,肝细胞异型增生灶和异型增生结节数目显著减少。Mas son染色显示各组大鼠肝纤维化的状况与HE类似,而胶原纤维着色更为显著。相关形态计量指标分析结果表明丹皮酚可改进肝细胞异型性,提升单个假小叶体积比,降低单个肥大细胞释放量。生化指标测定结果表明丹皮酚能显著改进肝脏组织炎症,修复损伤肝细胞,减少脂质过氧化物对肝细胞的氧化性论文导读：28-d056-d112，对肝细胞损伤逐步加重,机体的抗氧化能力依次减弱。免疫组化结果显示,各组肝组织均可见EST阳性表达,EST在肝细胞中的表达由d000-d028-d056-d112依次降低,在内皮细胞中的表达由d000-d028-d056-d112依次升高。RT-PCR结果显示,ESTmRNA表达水平由d000-d028-d056-d112依次降低。血液药动学结果显示,丹皮酚高、中、低剂
损伤。免疫组化结果显示,与模型组相比,丹皮酚组能显著减少AFP阳性灶数极为面积,有极明显性差别(P0.01)。RT-PCR结果显示,与模型组相比,丹皮酚组AFPmRNA的相对表达量降低,有极明显性差别(P0.01)。3丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的药动学探讨生化指标测定结果表明由d000-d028-d056-d112，对肝细胞损伤逐步加重,机体的抗氧化能力依次减弱。免疫组化结果显示,各组肝组织均可见EST阳性表达,EST在肝细胞中的表达由d000-d028-d056-d112依次降低,在内皮细胞中的表达由d000-d028-d056-d112依次升高。RT-PCR结果显示,ESTmRNA表达水平由d000-d028-d056-d112依次降低。血液药动学结果显示,丹皮酚高、中、低剂量组,由d000-d028-d056-d112,吸收量和最大吸收浓度增多,表观分布容积和平均滞留时间减小,体内消除速率减小(中剂量组由d056-d112增多)。组织分布结果表明,相对于对照组,模型组大鼠吸收量和最大吸收浓度增多,体内消除速率减小(肺的增多),表观分布容积减小(胃的增多),肝、心、肾、胃的平均滞留时间增多,脾、肺、脑、肠的平均滞留时间减小。肝肾是主要的分布器官。结果表明丹皮酚在模型进展不同阶段的药动学有着一定差别。结论从异型性指数为指标,每隔84h腹腔注射1次二乙基亚硝胺,诱发♂大鼠肝细胞癌前病变的最佳造模剂量为48.255mg/kg,最佳造模累积连续时程为9周。丹皮酚可从显著改进肝癌前病变大鼠的相关指标,降低AFPmRNA表达,具有预防肝癌前病变的意义。建立用UPLC测定大鼠血浆及组织中丹皮酚浓度的办法,通过对丹皮酚在大鼠肝癌前病变模型各个阶段的药动学探讨,证实丹皮酚在肝癌前病变模型进展不同阶段的药动学结果有着一定差别；通过丹皮酚在对照组和肝癌前病变大鼠体内的组织分布可知,丹皮酚主要分布在肝肾,其它组织也有分布。雌激素硫酸转移酶在肝脏表达的减少、肾脏表达的增多从及对丹皮酚的外排减少可能是影响其参数变化的主要理由。关键词：肝癌前病变论文丹皮酚论文异型性指数论文甲胎蛋白论文药代动力学论文组织分布论文雌激素硫酸转移酶论文形态计量论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。论文导读：免疫调节183.6癌基因的抑制和抑癌基因的激活18-193.7细胞周期和调控蛋白193.8肿瘤微环境193.9血管相关指标表达转变19-203.10抑制癌相关信号传导通路203.11阻滞致癌物质代谢20-21综述二丹皮酚的药理意义和药代动力学探讨发展21-341丹皮酚的药理意义探讨21-26

1.1抗肿瘤意义21-232抗炎意义233免疫增强意义23-24

中文摘要6-9
ABSTRACT9-14
前言14-15
第一部分 文献综述15-34
综述

一、中医药对肝癌前病变防治的探讨发展15-21

1 国内外探讨近况15
2 病因病机15-16
3 中医药防治肝癌前病变的意义机制探讨16-21

3.1 对肝癌前病变细胞增殖的抑制16

3.2 对肝癌前病变细胞凋亡的推动16-17

3.3 对肝癌前病变细胞分化的推动17

3.4 抗氧化和清除自由基17-18

3.5 免疫调节18

3.6 癌基因的抑制和抑癌基因的激活18-19

3.7 细胞周期和调控蛋白19

3.8 肿瘤微环境19

3.9 血管相关指标表达转变19-20

3.10 抑制癌相关信号传导通路20

3.11 阻滞致癌物质代谢20-21

综述

二、丹皮酚的药理意义和药代动力学探讨发展21-34

1 丹皮酚的药理意义探讨21-26

1.1 抗肿瘤意义21-23

1.2 抗炎意义23

1.3 免疫增强意义23-24

1.4 对心血管体系的意义24-25

1.5 其他药理意义25-26

1.6 小结26

2 丹皮酚的药代动力学探讨26-34

2.1 丹皮酚测定办法的探讨26-27

2.2 丹皮酚的药代动力学探讨27-32

2.3 小结32-34

第二部分 大鼠肝癌前病变模型的建立34-44
1 材料和办法34-36

1.1 材料34

1.2 办法34-36

2 结果36-41

2.1 一般状态与肝脏解剖形态36-37

2.2 肝脏组织病变37-38

2.3 病变形态计量38

2.4 时效联系38

2.5 量效联系38

2.6 特异性验证38-41

3 讨论41-44
第三部分 丹皮酚对大鼠肝癌前病变的预防意义探讨44-59
1 材料和办法44-51

1.1 材料44-46

1.2 办法46-51

2 结果51-57

2.1 一般状况51-52

2.2 肝脏组织病理体现52-53

2.3 生化指标53-54

2.4 病变形态计量54-55

2.5 免疫组化检测结果55-56

2.6 用RT-PCR法观察AFP在对照组、模型组、丹皮酚组肝组织中的mRNA表达水平56-57
3 讨论57-59
第四部分 丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的药动学探讨59-82

一、丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的血液药动学探讨59-69

1 材料和办法59-62

1.1 材料59-60

1.2 办法60-62

2 结果62-69
2.1 肝论文导读：56),d_(112)4组肝组织中的mRNA表达水平77-78四讨论78-821色谱条件优化782办法学考察78-793丹皮酚的血液药动学结果分析794丹皮酚的组织分布结果分析79-805丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的药动学变化机制研究80-82结论82-83参考文献83-107致谢107-108个人介绍108上一页12345
脏组织病理体现62-63

2.2 生化指标63-64

2.3 病变形态计量64-66

2.4 分析办法的认证66-67

2.5 丹皮酚ig给药后在大鼠体内的药动学参数67-69

二、丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的组织分布探讨69-74

1 材料和办法69-71

1.1 材料69

1.2 办法69-71

2 结果71-74

2.1 分析办法的认证71-73

2.2 组织分布结果73-74

三、丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的雌激素硫酸转移酶变化探讨74-78

1 材料和办法74-75

1.1 材料74-75

1.2 办法75

2 结果75-78
2.1 用免疫组化法观察EST在d_(000),d_(028),d_(056),d_(112)肝组织中的蛋白表达状况75-76
2.2 用免疫组化法观察EST在d_(000),d_(028),d_(056),d_(112)肾组织中的蛋白表达状况76-77
2.3 用RT-PCR法观察EST在d_(000),d_(028),d_(056),d_(112)4组肝组织中的mRNA表达水平77-78

四、讨论78-82

1 色谱条件优化78
2 办法学考察78-79
3 丹皮酚的血液药动学结果分析79
4 丹皮酚的组织分布结果分析79-80
5 丹皮酚在肝癌前病变模型大鼠体内的药动学变化机制研究80-82
结论82-83
参考文献83-107
致谢107-108
个人介绍108