阐释消化吸阳虚对消化吸收功能影响及其机制

论文导读：
摘要：目的：本课题立足肾脾相关论述，从脾阳根于肾阳为切入点，从双侧肾上腺大部切除术建立肾阳虚证动物模型为平台，观察模型大鼠的消化吸收功能，围绕血清GAS、血清D-木糖含量，研究细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达与肾阳虚影响消化吸收功能的相关机制，并观察参附汤对肾阳虚证模型大鼠消化吸收指标的影响。应用现代探讨手段检测胃窦粘膜组织、小肠粘膜吸收细胞的凋亡率，胃窦粘膜组织G细胞的表达及G细胞表达Caspase-3的百分率，小肠粘膜吸收细胞的Bcl-2、Bax表达极为超微病理形态等消化吸收相关指标，旨在以分子基因水平初步研究肾阳虚影响消化吸收功能的可能机制。办法：本课题采取8周龄雄性SD大鼠，从双侧肾上腺大部切除办法建立肾阳虚证动物模型，并设假手术组作为对照。术后4周，将手术大鼠随机分为模型组和参附汤组。参附汤组大鼠于每天上午8:30灌胃给予参附汤水煎液（药物浓度为每ml药液含生药0.5g）1.6ml/200g体重，假手术组和模型组均灌胃给予等容量的生理盐水。共4周。实验结束时，测定实验大鼠体温，收集24小时尿液，采集血液，留取胃窦粘膜组织及小肠粘膜组织，分离、收集小肠粘膜吸收细胞进行相关指标检测：①检测24小时尿17-OH-CS含量；②检测血清GAS、D-木糖含量；③观察胃窦粘膜组织、小肠粘膜组织显微结构转变；④观察小肠粘膜吸收细胞的超微结构转变；⑤TUNEL法检测胃窦粘膜组织凋亡率、免疫组化法检测G细胞表达的平均光密度值及免疫组化双染法检测G细胞表达Caspase-3的百分率；⑥取小肠粘膜吸收细胞单细胞悬液，用流式细胞仪检测小肠粘膜吸收细胞的凋亡率；⑦免疫组化法检测小肠粘膜吸收细胞的Bcl-2、Bax蛋白表达的平均光密度。结果：①体温、24小时尿液指标检测结果：与假手术组对比，模型组大鼠体温、尿17-OH-CS含量明显降低（P＜0.01）;与模型组对比，参附汤组大鼠体温、尿17-OH-CS含量均明显升高（P＜0.01）。②血清指标检测结果：与假手术组对比，模型组大鼠血清GAS、D-木糖含量均明显降低（P＜0.01）；与模型组对比，参附汤组大鼠血清GAS、D-木糖含量均明显升高（P＜0.01）。③胃窦粘膜组织指标检测结果：与假手术组对比，模型组大鼠的胃窦粘膜组织变薄，细胞间隙变大，粘膜腺体有不同程度的排列紊乱、疏松、出现大量空泡样变；与模型组对比，参附汤组大鼠的胃窦粘膜组织稍厚，细胞间隙变小，腺细胞排列较规则，空泡样变减少。与假手术组对比，模型组大鼠胃窦粘膜组织的凋亡率、G细胞表达Caspase-3的百分率明显升高（P＜0.01），G细胞表达的平均光密度值明显降低（P＜0.01）；与模型组对比，参附汤组大鼠胃窦粘膜组织的凋亡率、G细胞表达Caspase-3的百分率明显下降（P＜0.01），G细胞表达的平均光密度值明显升高（P＜0.01）。④小肠粘膜组织指标检测结果：光镜结果显示，与假手术组对比，模型组大鼠小肠粘膜组织厚度略欠均匀，绒毛边缘不整齐，部分上皮细胞脱落、缺失；与模型组对比，参附汤组大鼠小肠粘膜组织厚度较均匀，绒毛排列规则，上皮基本完整。电镜结果显示，与假手术组对比，模型组大鼠小肠粘膜吸收细胞微绒毛略显稀疏，细胞间连接疏松，细胞器模糊，细胞核膜内陷，异染色质凝聚、边集，胞质内空泡多见；参附汤组大鼠小肠粘膜吸收细胞超微结构较模型组状况有明显改进，细胞间连接对比紧密，胞质内空泡化结构少见，异染色质凝集、边集及核膜内陷现象均较模型组好转。免疫组化结果显示，与假手术组对比，模型组大鼠小肠粘膜组织吸收细胞Bcl-2、Bax蛋白表达均明显升高（P＜0.01）；与模型组对比，参附汤组大鼠小肠粘膜组织吸收细胞Bcl-2蛋白的表达明显升高（P＜0.01），Bax蛋白的表达明显降低（P＜0.01）。⑤小肠粘膜吸收细胞指标检测结果：与假手术组对比，模型组大鼠小肠粘膜组织吸收细胞的凋亡率明显升高（P＜0.01）；与模型组对比，参附汤组大鼠小肠粘膜组织吸收细胞的凋亡率明显降低（P＜0.01）。结论：①采取肾上腺大部切除法建立肾阳虚证大鼠模型，模型组大鼠的一般体现符合肾阳虚的诊断标准，且模型组大鼠体温、24小时尿17-OH-CS含量均明显下降，说明肾阳虚证动物模型建立成功。②模型组大鼠血清GAS、D-木糖含量较假手术组明显下降，说明肾阳虚证模型动物的消化吸收功能下降。③模型组大鼠胃窦粘膜组织的凋亡率、G细胞表达Caspase-3的百分率明显升高，G细胞表达的平均光密度值明显降低，说明胃窦粘膜组织极为G细胞的过度凋亡影响了GAS的分泌，进而影响了模型大鼠的消化功能。④模型组大鼠小肠粘膜吸收细胞的超微组织结构转变符合凋亡细胞的典型体现，吸收细胞的凋亡率显著升高，同时，小肠吸收细胞Bax蛋白的表达明显升高，凋亡显著，凋亡与增殖论文导读：
失衡，使小肠粘膜吸收细胞凋亡增多，增殖问题，得不到及时更新，以而影响了模型大鼠的吸收功能。⑤温补肾阳方药—参附汤可从调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达，以而抑制消化吸收相关组织细胞的过度凋亡，推动其更新，维护其功能，以而改进肾阳虚证模型大鼠的消化吸收功能。本课题首次采取双侧肾上腺大部切除的办法建立肾阳虚证动物模型,率先应用现代技术办法探讨肾阳虚影响消化吸收功能的相关机制。肾阳虚证模型大鼠胃窦粘膜组织G细胞凋亡关键蛋白Caspase-3的表达明显增强，小肠粘膜吸收细胞的促凋亡基因Bax表达明显增强，使模型大鼠消化吸收相关组织细胞凋亡增多，功能受损，进而体现为消化吸收功能下降。温补肾阳方药—参附汤可从下调胃窦粘膜组织G细胞的Caspase-3表达、小肠粘膜吸收细胞的Bax表达，抑制过度凋亡，改进肾阳虚导致的消化吸收功能下降。因此可知，消化吸收相关组织细胞的过度凋亡可能是肾阳虚影响消化吸收功能的机制之一。关键词：肾阳虚论文消化吸收论文细胞凋亡论文意义机制论文
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ABSTRACT8-14
英文缩略词表14-15
论述研究15-25
1 肾脾相关15-21
2 肾阳对脾的温煦激发意义21-23
参考文献23-25
实验探讨25-68
前言25-27
参考文献26-27
实验

一、肾阳虚对实验大鼠体温及尿 17-OH-CS 的影响27-33

1 材料与办法27-29
2 结果29-31
3 讨论31-32
参考文献32-33
实验

二、肾阳虚对实验大鼠血清胃泌素、D-木糖含量的影响33-38

1 材料与办法33-35
2 结果35
3 讨论35-37
参考文献37-38
实验

三、肾阳虚对实验大鼠胃窦、小肠粘膜组织显微结构的影响38-42

1 材料与办法38-39
2 结果39-40
3 讨论40-41
参考文献41-42
实验四 肾阳虚对实验大鼠胃窦粘膜组织凋亡、G 细胞极为 Caspase-3 表达的影响42-54
1 材料与办法42-46
2 结果46-48
3 讨论48-52
参考文献52-54
实验

五、肾阳虚对实验大鼠小肠粘膜吸收细胞凋亡的影响54-59

1 材料与办法54-56
2 结果56
3 讨论56-58
参考文献58-59
实验

六、肾阳虚对实验大鼠小肠粘膜吸收细胞超微结构的影响59-63

1 材料与办法59-60
2 结果60
3 讨论60-61
参考文献61-63
实验

七、肾阳虚对实验大鼠小肠粘膜吸收细胞 Bcl-

2、Bax 表达的影响63-68

1 材料与办法63-64 2 结果64-65
3 讨论65-66
参考文献66-68
总结与讨论68-76
1 肾阳虚证动物模型的建立68-70
2 肾阳对消化吸收功能的推动意义70-71
3 肾阳虚影响消化吸收功能的机制71-74
4 温补肾阳方药—参附汤的意义机理74-76
结语76-80
参考文献77-80
附图80-90
文献综述 胃泌素在中医药探讨中的应用90-104
1 GAS 在中医证型探讨中的应用90-91
2 GAS 在西医疾病中医辨证分型中的应用91-95
3 GAS 在中药探讨中的应用95-97
4 GAS 在中医病因及治法探讨中的应用97-98
5 GAS 在针刺等外治法探讨中的应用98-99
6 结语99-100
参考文献100-104
致谢104