研究白细胞重组灵芝免疫调节蛋白对帕金森病模型小鼠作用及其机制流程

论文导读：性反应。此外，rLZ-8能明显降低PD小鼠黑质部位细胞因子IL-1β、IL-6的含量，增强SOD和GSH-Px活力，降低MDA含量。通过上面陈述的的探讨，初步证明rLZ-8能改进MPTP诱导的小鼠PD模型行为学损伤，拮抗MPTP诱导的DA能神经元变性，表明rLZ-8对PD模型小鼠具有保护意义。其意义机制是通过抑制免疫反应从及抑制氧化应激发挥保护多巴胺能神经
摘要：灵芝免疫调节蛋白（Fungal Immunomodulatory Protein of Ganodermalucidium，LZ-8）是以赤灵芝菌丝体提取物中分离出的一种免疫调节蛋白，探讨发现其具有推动淋巴细胞增殖、抑制全身性过敏反应、抑制器官移植后的排斥反应从及抑制肿瘤等生物学活性。本文利用的重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma lucidum immunoregulatory protein，rLZ-8)，是运用基因工程办法，重新设计编码LZ-8的蛋白基因，在毕赤酵母中分泌表达后得到的大量具有高纯度和稳定生物活性的rLZ-8样品。帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)是中老年最常见的神经退行性疾病之一，其主要病理特点是中脑黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元的缓慢、进行性变性死亡。在对其发病机制的探讨领域，氧化应激损伤和神经炎症反应是近年来的探讨热点之一。PD发生后，机体出现氧化应激损伤，细胞免疫、体液免疫及各种细胞因子水平也发生变化，除此之外还伴随着神经胶质细胞活性和数量的转变。探讨也证实，几点抗炎类药物，可能对黑质多巴胺能神经元有保护意义。由此设计本实验，探索rLZ-8是否对PD具有保护意义，并探索rLZ-8是否能通过抑制氧化应激和抑制炎症反应来发挥其意义。实验选用C57BL/6小鼠120只，随机分为6组：正常对照组、PD模型组、美多芭组（阳性药组）、rLZ-8低剂量组、rLZ-8中剂量组、rLZ-8高剂量组，每组20只。小鼠腹腔注射1--4--1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP，30mg/kg/day），连续给药5天建立PD模型。 MPTP首次注射9天前，正常对照组和PD模型组腹腔注射生理盐水，阳性药组灌胃给予120mg/kg美多芭，rLZ-8低、中、高剂量组分别腹腔注射60μg/kg rLZ-8、100μg/kg rLZ-8、160μg/kg rLZ-8，一直持续至MPTP末次给药7天后。MPTP末次给药7天后，对各组小鼠进行行为学实验：爬杆实验、悬挂实验、转棒实验。行为学实验结束后，利用免疫组化法检测小鼠脑组织酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）的表达，ELISA法检测小鼠脑组织白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）的含量，并利用比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶（superoxidediutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的活力和丙二醛（malondialdehyde， MDA）的含量。行为学实验表明，rLZ-8能缩短PD小鼠爬杆实验的掉头时间和爬杆时间，延长悬挂时间，改进悬挂状况，并延长转棒实验潜伏期，减少掉落次数。免疫组化结果表明，rLZ-8能明显增多PD小鼠黑质TH阳性细胞数，增强纹状体神经纤维上TH免疫阳性反应。此外，rLZ-8能明显降低PD小鼠黑质部位细胞因子IL-1β、IL-6的含量，增强SOD和GSH-Px活力，降低MDA含量。通过上面陈述的的探讨，初步证明rLZ-8能改进MPTP诱导的小鼠PD模型行为学损伤，拮抗MPTP诱导的DA能神经元变性，表明rLZ-8对PD模型小鼠具有保护意义。其意义机制是通过抑制免疫反应从及抑制氧化应激发挥保护多巴胺能神经元的意义。上面陈述的数据初步表明rLZ-8是一种潜在的可用于临床治疗PD的药物。关键词：帕金森病论文重组灵芝免疫调节蛋白论文动物模型论文氧化应激论文白细胞介素-1β论文白细胞介素-6论文
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Abstract6-11
第1章 绪论11-21

1.1 帕金森病概述11

1.2 帕金森病药物治疗的发展11-15

1.3 PD 与免疫学异常和氧化应激之间的联系15-18

1.4 MPTP 模型在帕金森病探讨中的运用18

1.5论文导读：3.1各组小鼠体重变化的测定结果313.2各组小鼠体征变化的观察结果31-333.3各组小鼠行为学实验的测定结果33-373.3.1各组小鼠爬杆实验测定结果33-343.3.2各组小鼠悬挂实验测定结果34-363.3.3各组小鼠转棒实验测定结果36-373.4小鼠脑组织各项指标的测定结果37-423.

4.1各组小鼠TH免疫组化染色结果37-393.2各组小鼠脑

灵芝免疫调节蛋白的探讨近况18-21
第2章 材料和办法21-31

2.1 实验材料21-22

2.

1.1 实验动物21

2.

1.2 药品和试剂21

2.

1.3 实验耗材21-22

2.

1.4 仪器设备22

2.2 实验办法22-31

2.1 MPTP 诱导的小鼠 PD 模型的建立22-23

2.2 实验分组及给药办法23

2.3 观察指标23-30

2.3.1 小鼠体重23

2.3.2 体征观察23

2.3.3 行为学实验23-26

2.3.4 小鼠脑组织各项指标的检测26-30

2.3.5 小鼠各脏器系数的测定30

2.4 统计学处理30-31

第3章 实验结果31-44

3.1 各组小鼠体重变化的测定结果31

3.2 各组小鼠体征变化的观察结果31-33

3.3 各组小鼠行为学实验的测定结果33-37

3.1 各组小鼠爬杆实验测定结果33-34

3.2 各组小鼠悬挂实验测定结果34-36

3.3 各组小鼠转棒实验测定结果36-37

3.4 小鼠脑组织各项指标的测定结果37-42

3.4.1 各组小鼠 TH 免疫组化染色结果37-39

3.4.2 各组小鼠脑组织 IL-1β含量测定结果39-40

3.4.3 各组小鼠脑组织 IL-6 含量测定结果40

3.4.4 各组小鼠 SOD 活力测定结果40-41

3.4.5 各组小鼠 MDA 含量测定结果41-42

3.4.6 各组小鼠 GSH-Px 活力测定结果42

3.5 小鼠各脏器系数测定结果42-44

第4章 结果分析与讨论44-49

4.1 rLZ-8对小鼠无明显毒副意义44

4.2 rLZ-8对PD 小鼠模型行为学损伤的改进意义44-45

4.3 rLZ-8对PD 小鼠模型 DA 能神经元的保护意义45-46

4.4 rLZ-9对PD 小鼠模型促炎细胞因子的抑制意义46-47

4.5 rLZ-8对PD 小鼠模型氧化应激的抑制意义47-49

第5章 结论49-50
参考文献50-58
作者介绍及在学期间所取得的科研成果58-59
致谢59