阐释炎症ADs蛋白在大鼠脑缺血再灌注后作用及调控机制

论文导读：的变化。我们推测在脑缺血再灌注后，AD2/3蛋白和mRNA表达之所从不平行，可能受到了microRNA的调节。由此，我们通过数据库搜索发现，miR-145论述上可同时结合AD2和AD3mRNA的3’-UTR端。之后，我们构建了含AD2/3mRNA3’-UTR端的荧光报告载体，将其与miR-145的抑制剂（inhibitor）和激动剂（mimic）共转染后测定miR-145对荧光素酶
摘要：本实验从大鼠神经元细胞系PC12细胞从及大鼠脑缺血再灌注模型为对象，探讨AD2和AD3在脑缺血区域的表达、调控从极为对脑梗死后炎症和细胞凋亡的影响。本实验共分3部分：1. AD2和AD3在脑缺血区域的动态表达及与炎症、凋亡的相关性。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，分别于模型制作成功后6h、24h、72h和7d时处死大鼠。RT-PCR检测AD2/3mRNA的表达，western blot法检测AD2/3蛋白从极为磷酸化蛋白的表达，Tunel染色检测凋亡细胞， ELISA法检测IL-1β的表达。结果发现模型组（model）缺血周边区域中AD2/3mRNA在6h时即高于对照组（control）和假手术组（sham），之后逐渐升高，至72h达到最高点，7d后下降；磷酸化AD2/3蛋白（p-AD2/3）表达走势与mRNA一致；在缺血后6h、24h和72h时，model组缺血周边区域中AD2/3蛋白表达与control组和sham组相比并无显著差别，仅在7d时高于control组和sham组；AD3蛋白表达与细胞凋亡、炎症反应呈负相关，而AD2蛋白表达水平与凋亡、炎症反应并无明确相关性。此结果表明脑缺血再灌注可引起缺血周围区域中AD2/3表达的变化，且AD2/3基因表达可能受到转录后水平的调节，AD3可能具有抗炎、抗凋亡的神经保护意义。2. miR-145在细胞水平下调AD2和AD3蛋白的表达MicroRNA是一类长18-25nt的非编码小RNA分子，可在转录后水平调节基因的表达。在脑缺血再灌注后，缺血周围区域可出现一系列microRNA表达水平的变化。我们推测在脑缺血再灌注后，AD2/3蛋白和mRNA表达之所从不平行，可能受到了microRNA的调节。由此，我们通过数据库搜索发现，miR-145论述上可同时结合AD2和AD3mRNA的3’-UTR端。之后，我们构建了含AD2/3mRNA3’-UTR端的荧光报告载体，将其与miR-145的抑制剂（inhibitor）和激动剂（mimic）共转染后测定miR-145对荧光素酶活性的影响，结果发现miR-145inhibitor可上调荧光素酶活性，而miR-145mimic下调荧光素酶活性。对报告载体上miR-145结合位点进行点突变后，其荧光素酶活性不受miR-145mimic和inhibitor的影响。转染miR-145mimic和inhibitor后，PC12细胞中AD2和AD3蛋白显著下调。这些结果表明了miR-145在细胞水平上通过转录后机制调节AD2/3蛋白的表达，这可能是脑缺血再灌注后AD2/3mRNA和蛋白表达并不平行的理由。3.过表达脑内AD3蛋白表达减轻脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡和缺血区域的炎症反应。我们将含有AD3cDNA的腺病毒质粒注射至大鼠侧脑室内，使用转基因技术探讨AD3蛋白对脑缺血再灌注后细胞凋亡和炎症反应的影响。结果发现与干预的脑缺血再灌注大鼠模型相比，过表达AD3表达后，缺血区域tunel染色阳性细胞数显著减少，caspase3水平下降而Bcl2水平上升，TNF-α和IL-1β mRNA的表达也显著减少。该结果表明AD3具有抗凋亡、抗炎的神经保护意义，可作为临床治疗脑梗死的潜在药物意义靶点。关键词：TGF-β论文AD2论文脑梗死论文AD3论文炎症论文凋亡论文
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中文摘要5-7
Abstract7-11
第一篇 绪论11-13
第二篇 文献综述13-25

一、TGF-β/AD2/3 信号通路介绍13-16

二、TGF-β 信号通路在正常中枢神经体系的分布与生理功能16-19

三、TGF-β 与神经体系疾病19-25

第三篇 实验探讨25-64
第1章 AD2 和 AD3 在脑缺血区域的动态表达及与炎症、凋亡的相关性25-39

1.1 实验材料25-26

1.2 实验办法26-33

1.3 实验结果33-36

1.4 讨论36论文导读：-523.2实验办法52-593.3结果59-623.4讨论62-64第四篇结论64-65参考文献65-77作者介绍77在学期间取得的科研成果77-78致谢78上一页12
-39
第2章 MIR-145 在细胞水平下调AD2 和 AD3 蛋白的表达39-51

2.1 实验材料39-40

2.2 实验办法40-46

2.3 实验结果46-48

2.4 讨论48-51

第3章 上调脑内 AD3 蛋白表达减轻脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡和缺血区域的炎症反应51-64

3.1 实验材料51-52

3.2 实验办法52-59

3.3 结果59-62

3.4 讨论62-64

第四篇 结论64-65
参考文献65-77
作者介绍77
在学期间取得的科研成果77-78
致谢78