探讨支气管哮喘白细胞介素-23对哮喘小鼠记忆T细胞增殖功能影响

论文导读：肺脏，CD4~+与CD4~-记忆T细胞均参与了哮喘的发病，其中CD4~+记忆T细胞是引起12下一页
摘要：探讨背景：支气管哮喘目前被认为是一种Th2优势的疾病，记忆T细胞处于其发病机制的上游环节，它能够在哮喘机体长期有着，并维持Th2细胞的形态和功能，当机体再次接触同种过敏原时，记忆T细胞能够迅速增殖、活化为Th2细胞，分泌Th2细胞因子，引发气道炎症。由此，了解记忆T细胞在哮喘机体中的意义机制和规律，寻找可从调控记忆T细胞增殖与活化的物质，将有利于我们从记忆T细胞为靶点，探寻有效防治哮喘的新措施。IL-23能够推动正常机体记忆T细胞的增殖与活化，同时IL-23又能够推动哮喘小鼠Th2气道炎症，那么，IL-23是不是通过推动哮喘小鼠记忆T细胞增殖、以而推动哮喘Th2气道炎症的呢？本探讨试图解答该不足，为治疗哮喘提供新思路。探讨目的：1.了解哮喘小鼠肺脏、脾脏记忆T细胞比例在哮喘不同时期的变化规律，确定观察记忆T细胞增殖功能的最佳时间点，并为深入探讨记忆T细胞在哮喘中的功能奠定基础；2.明确抑制IL-23是否能够减少哮喘小鼠肺脏记忆T细胞的数量，试图揭示IL-23参与哮喘Th2气道炎症的意义机理。探讨办法：1.运用OVA致敏、激发小鼠，构建哮喘小鼠动物模型，于激发前1天始至激发后30天，按规定时间点处死小鼠，分离脾脏、肺脏，制成单个核细胞悬液，运用流式抗体、流式细胞仪检测小鼠脾脏、肺脏记忆T细胞比例，确定观察记忆T细胞增殖功能的最佳时机；2.根据小鼠IL-219基因序列设计干涉靶序列，慢病毒包装，体外感染小鼠细胞系，通过实时-PCR法检测细胞内IL-219mRNA表达水平，筛选出能够沉默小鼠IL-219基因的有效序列；3.将小鼠分为正常组、哮喘组、空载体组、哮喘IL-219基因沉默组，后2组模型致敏、激发办法与哮喘组相同，在第1次激发前1天经鼻滴入携带有空载体或有效干涉靶序列的慢病毒液。于前期实验确定的最佳时机处死小鼠，进行相关指标的检测，包括实时-PCR、免疫组化法检测IL-219基因体内沉默效果，流式细胞仪分析肺组织中记忆T细胞比例，实时-PCR法检测肺组织转录因子T-bet、GATA-3、RORC表达水平，HE染色、刚果红染色观察肺组织病理学转变从及PCR检测Th2细胞因子表达水平等哮喘炎症指标。结果：1.记忆T细胞检测结果⑴哮喘小鼠脾脏、肺脏CD4~+、CD4~-记忆T细胞比值均比正常小鼠显著增高（p0.0001）；⑵CD4~+记忆T细胞变化规律：哮喘小鼠脾脏、肺脏CD4~+记忆T细胞在运用OVA激发后持续上升，激发停止后仍继续上升，肺脏CD4~+记忆T细胞在末次激发后2~9天达到高峰，峰值超过50%，后逐渐下降；脾脏CD4~+记忆T细胞在末次激发后7天达到高峰，峰值超过40%，后逐渐下降。至末次激发后30天，脾脏、肺脏记忆T细胞均回降至激发前水平；⑶CD4~-记忆T细胞变化规律：哮喘小鼠肺脏CD4~-记忆T细胞在运用OVA激发后持续上升，末次激发后2天达到峰值，然后迅速下降，至末次激发后7天时下降至激发前水平；脾脏CD4~-记忆T细胞于激发7天后始上升，维持在30%左右，于末次激发后14天下降至激发前水平；⑷在本模型的构建条件下，观察小鼠肺脏记忆T细胞增殖功能的最佳时机为末次激发后2天；2.沉默哮喘小鼠肺脏IL-219基因表达对小鼠的影响⑴记忆T细胞：哮喘基因沉默组小鼠肺脏CD4~+记忆T细胞占CD4~+T细胞比值较哮喘组降低（p 0.0001），CD4~-记忆T细胞占CD4~-T细胞比值无变化（p0.05）；⑵Th2气道炎症：基因沉默组小鼠肺组织Th2细胞因子IL-4、IL-13mRNA表达较哮喘组降低（p 0.001，p 0.0001），肺组织炎症病变程度、嗜酸性粒细胞气道浸润均较哮喘组减轻（p 0.05，p 0.0001）；⑶转录因子：哮喘基因沉默组小鼠肺组织Th2转录因子GATA-3、Th1转录因子T-bet mRNA表达较哮喘组减低（p 0.0001）；Th17转录因子Rocr mRNA表达无变化（p0.05）。结论：1.哮喘小鼠体内的记忆T细胞在哮喘不同时期呈现出一定的规律：⑴无论CD4~+还是CD4~-记忆T细胞，肺脏总是先于脾脏升高，且在哮喘急性期，肺脏记忆T细胞的比例明显高于脾脏；⑵在哮喘效应器官肺脏，CD4~+与CD4~-记忆T细胞均参与了哮喘的发病，其中CD4~+记忆T细胞是引起论文导读：
哮喘气道炎症持续的主要细胞，CD4~-记忆T细胞可能在哮喘急性发作方面发挥了意义；2.抑制IL-23表达能够减少哮喘小鼠肺脏CD4~+记忆T细胞的增殖，抑制Th2转录因子GATA-3的表达，同时能够减轻哮喘气道炎症，提示IL-23有可能通过调控CD4~+Tm的增殖来参与哮喘Th2气道炎症，IL-23主要对CD4~+Tm发挥意义。关键词：记忆T细胞论文支气管哮喘论文白细胞介素-23论文RNA干扰论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可从关系人员哦。前言4-5
中文摘要5-8
Abstract8-13
英文缩略词表13-16
第1章 绪论16-34

1.1 记忆 T 细胞在支气管哮喘中的意义18-23

1.1 哮喘机体记忆 T 细胞的特征19-21

1.2 调控记忆 T 细胞的因素21-23

1.2 IL-23 对记忆 T 细胞的意义23-30

1.2.1 记忆 T 细胞表达 IL-23R23-25

1.2.2 IL-23 推动记忆 T 细胞增殖25

1.2.3 IL-23 推动记忆 T 细胞分泌 IL-1725-28

1.2.4 IL-23 推动记忆 T 细胞分泌 IFN-γ28-29

1.2.5 IL-23 推动记忆 T 细胞分泌 IL-2229-30

1.3 IL-23 在支气管哮喘中的意义30-34

1.3.1 IL-23 参与哮喘发病30

1.3.2 IL-23 推动哮喘 Eos 和 Neu 气道炎症30-31

1.3.3 IL-23 参与哮喘气道炎症的机制31-32

1.3.4 临床运用前景展望32-34

第2章 哮喘小鼠动物模型构建34-52

2.1 材料与办法34-41

2.2 结果41-45

2.3 讨论45-50

2.4 小结50-52

第3章 确定观察记忆 T 细胞增殖功能的最佳时机52-66

3.1 材料与办法52-54

3.2 结果54-60

3.3 讨论60-65

3.4 小结65-66

第4章 体外筛选能够沉默小鼠 IL-219 基因的有效序列66-76

4.1 材料与办法67-71

4.2 结果71-72

4.3 讨论72-74

4.4 小结74-76

第5章 抑制哮喘小鼠气道 IL-219 基因表达对记忆 T 细胞增殖功能及 TH2 气道炎症的影响76-98

5.1 材料与办法77-82

5.2 结果82-94

5.3 讨论94-97

5.4 小结97-98

第6章 结论98
本课题的创新点98-100
参考文献100-118
作者介绍及在学期间所取得的科研成果118-120
致谢120