阐述心肌过氧化物酶模拟酶DhHP-6对心肌缺血再灌注损伤保护作用机制学位

论文导读：in},需要论文可从关系人员哦。提要4-6中文摘要6-10Abstract10-23英文缩略词表23-26第1章绪论26-581.1选题的作用及探讨背景简介26-291.2心肌缺血再灌注损伤及机制探讨概况29-401.2.1自由基与心肌缺血再灌注损伤30-311.2.2钙超载与心肌缺血再灌注损伤31-321.
摘要：缺血组织恢复血流灌注时，导致再灌注区心肌细胞及局部血管网明显的病理生理变化，这些变化共同意义可促使进一步的组织损伤，该病理历程称为“缺血再灌注损伤”。再灌注后大量Ca2+内流，并产生大量自由基，是再灌注心肌细胞损伤的主要机制。随着再灌注治疗的广泛开展，再灌注损伤已成为一个普遍的临床不足，引起了人们的极大关注。本文从在体大鼠心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）动物模型和体外培养的H9c2心肌细胞缺氧再给氧(H/R)损伤模型，拟研究由本实验室设计并合成的过氧化物酶模拟酶DhHP-6对心肌缺血再灌注损伤的保护意义极为相关机制。试验结果表明，对于大鼠心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）动物模型（:1）DhHP-6（2.0mg·kg~(-1)）可保护大鼠MI/RI导致的心肌损伤：减少MI/RI大鼠心肌梗死面积，降低S-T段，降低血清CK、LDH、GOT活性；改进心肌组织损伤病理学转变；(2)DhHP-6可增强MI/RI大鼠抗氧化能力：增强血清和心肌组织SOD、CAT、GSH-Px活性，降低MDA含量，增多GSH含量，减少心肌组织ROS产生；(3)DhHP-6对MI/RI大鼠具有抗细胞凋亡意义：降低心肌细胞凋亡率，上调心肌组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达量，提升Bcl-2/Bax，下调Caspase-3蛋白表达。对于体外培养的H9c2心肌细胞缺氧再给氧(H/R)损伤模型，DhHP-6（4.0μmol·L~(-1)）可显著增多H/R损伤H9c2心肌细胞的细胞生存率，减少LDH释放量，升高Ca++-ATPase活性，改进损伤细胞形态学变化，降低细胞凋亡率；增强SOD活性，降低MDA含量，减少ROS产生。DhHP-6对H/R引起的H9c2心肌细胞损伤具有保护意义。通过建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型，探讨DhHP-6抗心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡机制。结果表明：(1)DhHP-6（4μmol·L~(-1)）通过激活SIRT1/P53通路，激活SIRT1，使P53去乙酰化，抑制P53、P21活性，以而增多Bcl-2/Bax的表达，抑制Caspase-3，以而抑制细胞凋亡；（2）DhHP-6通过SIRT1/T通路激活SIRT1信号，进而激活T信号通路，使Bcl-2/Bax增多，抑制Caspase-3的活性,以而抑制细胞凋亡；（3）DhHP-6的意义也可能与SIRT1/JNK通路相关，通过激活ERK而抑制P38信。本探讨证明DhHP-6具有抗大鼠心肌缺血再灌注及H9c2心肌细胞缺氧再给氧损伤意义。DhHP-6可通过激活SIRT1/P53通路，抑制P53、P21活性，增多Bcl-2/Bax，抑制Caspase-3，抑制心肌细胞凋亡；并与激活SIRT1/T通路有关。关键词：DhHP-6论文过氧化物酶模拟酶论文心肌缺血再灌注损伤论文心肌细胞损伤论文SIRT1论文P53论文T论文JNK论文
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中文摘要6-10
Abstract10-23
英文缩略词表23-26
第1章 绪论26-58

1.1 选题的作用及探讨背景简介26-29

1.2 心肌缺血再灌注损伤及机制探讨概况29-40

1.2.1 自由基与心肌缺血再灌注损伤30-31

1.2.2 钙超载与心肌缺血再灌注损伤31-32

1.2.3 细胞调亡与心肌缺血再灌注损伤32-36

1.2.4 心肌缺血再灌注损伤与细胞凋亡信号转导通路36-40

1.3 心肌缺血再灌注损伤的治疗药物探讨概况40-43

1.3.1 中药治疗41-42

1.3.2 化学药治疗42-43

1.4 抗心肌缺血再灌注损伤多肽类药物及意义机制探讨概况43-44

1.5 SIRT1 与心肌缺血再灌注损伤44-56

1.5.1 SIRT1 结构45-46

1.5.2 与 SIRT1 意义的蛋白因子46-47

1.5.3 Sirtl 的调控因子47-48

1.5.4 SIRT1 的生物学功能48-52

1.5.5 SIRT1 与心血管疾病52-55

1.5.6 小结及展望55-56

1.6 本文的探讨作用与立题依据56-58

第2章 DHHP-6 对大鼠心肌论文导读：se-3、Bcl-2、Bax、SIRT1、P53蛋白表达的变化62-652.2.11统计学分析652.3结果65-882.3.1DhHP-6对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积的影响65-672.3.2DhHP-6对心肌缺血再灌注损伤大鼠心电图S-T段转变的影响67-692.3.3DhHP-6对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清LDH、GOT、CK活性的影响69-712.3.4DhHP-6对心肌缺血再灌
缺血再灌注损伤保护意义的实验探讨58-94

2.1 实验材料58-59

2.

1.1 实验动物58

2.

1.2 实验药品与主要试剂58-59

2.

1.3 主要实验仪器59

2.2 实验办法59-65

2.1 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型(MI/RI)的制备59-60

2.2 动物分组与给药办法60

2.3 心电图(ECG)记录60

2.4 血清心肌标志酶 LDH、GOT、CK 的测定60

2.5 心肌组织 SOD、MDA 测定60-61

2.6 心肌梗死面积测定61

2.7 心肌组织形态学观察61

2.8 心肌细胞凋亡检测61

2.9 心肌组织 ROS 的检测61-62

2.2.10 Western Blot 检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、SIRT

1、P53蛋白表达的变化62-65

2.2.11 统计学分析65

2.3 结果65-88

2.3.1 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积的影响65-67

2.3.2 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤大鼠心电图 S-T 段转变的影响67-69
2.3.3 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清 LDH、GOT、CK 活性的影响69-71
2.3.4 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血清 SOD、CAT、GSH-Px 活性及 MDA、GSH 含量的影响71-75
2.3.5 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织 SOD、CAT、GSH-Px 活性及 MDA、GSH 含量的影响75-78

2.3.6 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织病理转变的影响78-79

2.3.7 DhHP-6 对 MI/RI 大鼠心肌组织 ROS 的影响79-81

2.3.8 DhHP-6 对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响81-83

2.3.9 DhHP-6 对 MI/RI 大鼠心肌组织 Caspase-3 蛋白表达的影响83-84
2.3.10 DhHP-6对MI/RI大鼠心肌组织Bcl-2,Bax 蛋白表达的影响84-85
2.3.11 DhHP-6对MI/RI大鼠对心肌组织SIRT1 蛋白表达的影响85-86
2.3.12 DhHP-6 对MI/RI 大鼠对心肌组织P53 蛋白及乙酰化P53 蛋白表达的影响86-88

2.4 讨论88-93

2.5 小结93-94

第3章 DHHP-6 对体外培养 H9C2 心肌细胞缺氧再给氧损伤保护意义的实验探讨94-116

3.1 实验材料94-96

3.

1.1 实验药品、H9c2 心肌细胞、试剂94

3.

1.2 试剂配制94-95

3.

1.3 主要实验仪器95-96

3.2 实验办法96-97
3.2.1 H9c2心肌细胞缺氧再给氧损伤（hypoxia/reoxygenation，H/R）模型的构建96
3.

2.2 实验分组与给药96

3.

2.3 细胞生存率的测定（MTT 比色法）96-97

3.

2.4 细胞 LDH、SOD 活性、MDA 含量的测定97

3.

2.5 细胞 Ca2+-ATPase 酶活性的测定97

2.6 心肌细胞 ROS 的检测97

3.

2.7 细胞核DAPI 染色97

3.

2.8 统计学分析97

3.3 结果97-110

3.1 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞生存率的影响97-100

3.3.2 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 LDH 释放量的影响100-101
3.3.3 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 Ca2+-ATPase 活性的影响101-103
3.3.4 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 MDA 含量的影响103-105
3.3.5 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 SOD 活性的影响105-107
3.3.6 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 ROS 的影响107-110
3.3.7 DhHP-6 对缺氧再给氧损伤 H9c2 心肌细胞凋亡形态的影响（DAPI 染色结果）110

3.4 讨论110-114

3.5 小结114-116

第4章 DHHP-6 对缺氧/再给氧损伤引起 H9C2 心肌细胞凋亡的影响及机制探讨116-170

4.1 实验材料116-117

4.

1.1 心肌细胞116

4.

1.2 主要试剂及来源116

4.

1.论文导读：

3 主要抗体及来源116-117
4.

1.4 主要实验试剂配制117

4.

1.5 Western Blot 实验试剂配制117

4.

1.6 主要仪器117

4.2 实验办法117-120
4.

2.1 心肌细胞培养117

4.

2.2 心肌细胞损伤模型的建立及鉴定117

4.

2.3 心肌细胞生存率的检测117

4.

2.4 细胞活力的检测（MTT 比色法）117

4.

2.5 细胞 LDH 漏出量的检测117-118

4.

2.6 体外培养心肌细胞 Ca2+-ATP 酶的测定118

4.

2.7 Hoechst 33342 荧光染色法检测细胞凋亡118

4.

2.8 细胞内 ROS 的检测118

4.

2.9 蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测蛋白表达118-120

4.3 结果与讨论120-154
4.3.1 DhHP-6 对缺氧/再给氧（H/R）损伤H9c2 心肌细胞SIRT1 蛋白表达的影响120-121
4.3.2 DhHP-6 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞总 p53 蛋白（T-p53）及乙酰化 p53 蛋白（A-p53）表达的影响121-123
4.3.3 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、SIRT1 激活剂Resveratrol 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 SIRT1 蛋白质表达的影响123-125
4.3.4 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide 、 SIRT1 激活剂Resveratrol对缺氧/再给氧损伤H9c2心肌细胞T-p53 及A-p53 蛋白质表达的影响125-127
4.3.5 DhHP-6 与 SIRT1 激活剂 Resveratrol、与 SIRT1 抑制剂Nicotinamide 相互意义对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 p21 蛋白质表达的影响127-129
4.3.6 DHhP-6 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 MAPK 信号通路中 p-ERK 蛋白、p-P38 蛋白、 p-JNK 蛋白表达的影响129-133
4.3.7 DHhP-6 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 PI3K/T 通路p-T 蛋白表达水平的影响133-134
4.3.8 DHhP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、ERK 抑制剂 PD98059对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 p-ERK 蛋白表达水平的影响134-136
4.3.9 DHhP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、P38 抑制剂 SB203580 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 MAPK 信号通路中 p-P38 蛋白表达水平的影响136-138
4.3.10 DHhP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、JNK 抑制剂SP600125 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 MAPK 信号通路 p-JNK 蛋白表达的影响138-139
4.3.11 SIRT1 激活剂 Resveratrol 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 JNK 信号通路中 p-JNK 蛋白表达的影响。139-140
4.3.12 JNK 抑制剂 SP600125 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞SITR1 蛋白表达的影响140-141
4.3.13 DHhP-6，SIRT1 抑制剂 Nicotinamide，PI3K/T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 MAPK 信号通路中 p-T 蛋白表达的影响141-143
4.3.14 SIRT1 激活剂 Resveratrol 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 PI3K/T 信号通路中 p-T 蛋白表达的影响143-144
4.3.15 PI3K/T 抑制剂 LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 SITR1 蛋白表达的影响144-145
4.3.16 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞生存率的影响145-146
4.3.17 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤心肌细胞凋亡率的影响。146-148
4.3论文导读：de、T抑制剂LY294002对缺氧/再给氧损伤H9c2心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响148-1504.3.19DhHP-6、SIRT1抑制剂Nicotinamide、T抑制剂LY294002对缺氧/再给氧损伤H9c2心肌细胞Caspase-3蛋白表达的影响150-1524.3.20DhHP-6、SIRT1抑制剂Nicotinamide、T抑制剂LY294002对缺氧/再给氧损伤H9c2心肌细
.18 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 Bcl-

2、Bax 蛋白表达的影响148-150

4.3.19 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 Caspase-3 蛋白表达的影响150-152
4.3.20 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤 H9c2 心肌细胞 LDH 释放量 的影响152-153
4.3.21 DhHP-6、SIRT1 抑制剂 Nicotinamide、T 抑制剂LY294002 对缺氧/再给氧损伤心肌细胞 ROS 产生的影响153-154

4.4 讨论154-168

4.5 小结168-170

结论170-172
参考文献172-204
攻读博士学位期间发表的主要学术论文及科研成果204-206
致谢206