探讨细胞大鼠脂肪干细胞向神经样细胞分化

论文导读：摘要9-10Abstract10-11材料和策略11-17结果17-18讨论18-19参考文献19-20附图20-25第二部分脂肪干细胞定向分化为神经样细胞25-39摘要25-26Abstract26-27材料和策略27-32结果32-33讨论33-35参考文献35-36附图36-39综述39-50参考文献47-50附录50-51致谢51-52
摘要：目的探讨并固定大鼠脂肪干细胞获得、增殖和传代的策略和操作流程，并且通过诱导脂肪干细胞分化为成脂细胞、成骨细胞而证明脂肪干细胞的多向分化能力。策略取质量约120克的SD大鼠2只，性别不限，分离其腹股沟脂肪组织，将其剪碎并用滤网过滤，然后经一系列操作而将含有脂肪干细胞的培养液平铺于25cm2培养瓶中培养，并进而增殖、传代。之后，通过细胞流式浅析检测第三代细胞表型证明其为脂肪干细胞。之后分别更换成脂诱导培养基和成骨细胞培养基，诱导脂肪干细胞定向分化为脂肪细胞和骨细胞。结果成功分离培养出脂肪干细胞，并能进行增殖和传代。利用流式细胞技术检测脂肪干细胞的CD34(+)、CD44（+）、CD45(-)、CD106（+），证明该细胞为脂肪干细胞。而向脂肪和成骨细胞诱导的细胞均发生了显著变化，最后分别通过油红O染色和碱性磷酸酶试剂盒证明脂肪干细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论脂肪组织中有着脂肪干细胞，并能够成功的分离、增殖和传代。并且拥有多向分化能力。可以成功的诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。目的：利用神经细胞诱导液将脂肪间充质干细胞定向诱导分化为神经样细胞。策略：首先是将第三代脂肪间充质干细胞在培养瓶中贴壁达到80%以上时消化，然后使其重新贴壁于六孔板中，细胞数量约为105级。然后用添加了bFGF和EGF以及B27的Neurobasal培养基培养六孔板中的细胞。每3天半量添加新的培养液，至5-7天左右就可以看到细胞增殖形成培养液中悬浮的细胞球。取诱导培养第7天的细胞球进行nestin的免疫荧光染色。最后，将培养好的细胞球吹散，离心，并将之培养在仅添加了B27的Neurobasal培养基中诱导分化10天，然后再进行NeuN、GFAP和β-tubupn荧光染色来鉴定分化成的细胞。结果：在利用了含有bFGF和EGF以及B27的Neurobasal培养基诱导了5天时就出现了悬浮的细胞球，并且通过免疫荧光染色证明为nestin阳性，证明其为神经干细胞的细胞球。而在利用了仅添加了B27的Neurobasal培养基中诱导分化10天后，打散的细胞球细胞也分化成了神经细胞，并经过了MAP2ab、NeuN、GFAP和β-tubupn荧光染色鉴定，证明分化成了神经元和星形胶质细胞。结论：经特定的诱导培养液诱导后，脂肪间充质干细胞可以被诱导分化为神经干细胞并且进一步分化为神经元和胶质细胞。关键词：脂肪干细胞论文多向分化论文成脂细胞论文成骨细胞论文细胞球论文神经干细胞论文神经元论文胶质细胞论文诱导分化论文细胞因子论文
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前言7-9
参考文献8-9
第一部分 大鼠脂肪干细胞的获取、增殖、传代以及多向分化能力的检测9-25
摘要9-10
Abstract10-11
材料和策略11-17
结果17-18
讨论18-19
参考文献19-20
附图20-25
第二部分 脂肪干细胞定向分化为神经样细胞25-39
摘要25-26
Abstract26-27
材料和策略27-32
结果32-33
讨论33-35
参考文献35-36
附图36-39
综述39-50
参考文献47-50
附录50-51
致谢51-52