浅论马齿苋天然马齿苋多糖制备及其抗糖尿病机理学位

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摘要：目前全世界糖尿病患者已经超过2亿,预计到2030年超过3.66亿人。尽管目前临床上有大量的西药能在短期内有效地制约高血糖,但因其毒副作用大,且不能防止糖尿病慢性并发症的发生及进展。由此,具有毒副作用小、疗效稳定等特点的天然抗糖尿病药物已引起人们的高度关注。马齿苋(Portulaca oleracea L.)多糖是传统的中草药马齿苋的主要活性成分之一,具有抗菌消炎、抑脂、抗氧化和抗糖尿病等生物活性。目前,国内外学者关于马齿苋多糖降血糖作用的探讨大多停留在马齿苋粗提取液或不同部位对糖尿病动物模型阶段,探讨不够系统和深入。为此,本探讨以天然马齿苋多糖的分离纯化、结构特点、生物活性稳定性和抗糖尿病作用机理等方面进行了探讨。采取水提法提取马齿苋多糖,并用响应曲面法对其提取工艺进行优化,得到最佳工艺条件：提取温度100℃,提取时间1.5h,水料比为20：1,提取次数3次,多糖的提取率达24.25%。用大孔树脂AB-8和响应曲面法对马齿苋多糖脱色工艺进行优化,得到最佳工艺条件：AB-8树脂用量60g/L,脱色时间为3.5h,脱色温度为50-C,马齿苋多糖的脱色率为74.25%。利用高效液相色谱法、红外色谱法和气相色谱法等仪器法,结合水解法、高碘酸氧化法和Smith降解法等化学策略初步探讨了POP Ⅰ、POP Ⅱ和POP Ⅲ的一级化学结构。POP Ⅰ的分子量为9.36kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成摩尔比为1：1.073：1.29：1.89：2.39：3.38。主要通过1→2和1→6糖苷键连接,并含有硫酸根。POP Ⅱ的分子量为9.25kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成摩尔比为1：1.42：1.73：1.44：1.58：1.59,主要由1→3糖苷键键接而成,同时有着1→2、1→4和1→6糖苷键键接方式。POP Ⅲ的分子量为8.03kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成比例为1：1.16：1.39：2.23：3.19。主要由1→2和1→6键型键接而成,并含有硫酸根。采取比色法探讨了马齿苋多糖体外抗氧化活性。马齿苋多糖具有清除羟基自由基和DPPH、抑制Fe2+诱发的脂质过氧化的作用。其抗氧化能力依次为：POP IPOPⅡ和POPⅢ。以胰岛β细胞(HIT-T15cells)为探讨对象,建立allo论文导读：指标,探讨马齿苋多糖抗糖尿病的机理。结果显示,马齿苋多糖能够推动胰岛细胞的增殖、增加细胞内ATP含量、推动胰岛素的分泌、提升SOD活性,并可以抑制四氧嘧啶诱导的细胞内Ca2+水平升高和线粒体膜电位的下降。由此推理,马齿苋多糖抗糖尿病的作用机理与其清除氧自由基,抗氧化活性和修复胰岛p细胞损伤有关。探讨了保存时间和保存
xan诱导氧化损伤胰岛p细胞模型,通过测定细胞增殖能力,胰岛素分泌水平、SOD活性、细胞内ATP含量、细胞内游离Ca2+水平及线粒体膜电位变化等指标,探讨马齿苋多糖抗糖尿病的机理。结果显示,马齿苋多糖能够推动胰岛细胞的增殖、增加细胞内ATP含量、推动胰岛素的分泌、提升SOD活性,并可以抑制四氧嘧啶诱导的细胞内Ca2+水平升高和线粒体膜电位的下降。由此推理,马齿苋多糖抗糖尿病的作用机理与其清除氧自由基,抗氧化活性和修复胰岛p细胞损伤有关。探讨了保存时间和保存温度对马齿苋多糖清除羟自由基能力影响。结果表明随着保存时间的延长和温度升高,马齿苋多糖抗氧化能力下降。本探讨以马齿苋多糖的提取、分离、纯化、结构剖析、抗氧化和抗糖尿病作用机理等方面进行了较为系统地探讨,为进一步深入开展马齿苋作为天然抗糖尿病药物或功能性食品的探讨提供了科学的论述依据。关键词：马齿苋多糖论文分离纯化论文结构剖析论文抗糖尿病论文抗氧化论文
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Abstract6-12
第1章 绪论12-21

1.1 糖尿病与降糖药物的概述12-13

1.2 马齿苋概述13-16

1.2.1 马齿苋的形态特点及分布13-14

1.2.2 马齿苋化学组成14-16

1.3 马齿苋多糖的探讨进展16-19

1.3.1 马齿苋多糖的生物活性16-18

1.3.2 马齿苋多糖结构的探讨18-19

1.4 本课题的选题背景、探讨作用及探讨内容19-21

1.4.1 选题背景与探讨作用19-20

1.4.2 本论文的主要探讨内容20-21

第2章 马齿苋多糖的提取及纯化21-42

2.1 引言21

2.2 试验材料、试剂及仪器21-22

2.1 试验原料21

2.2 试验试剂21

2.3 试验仪器21-22

2.3 试验策略22-26

2.3.1 马齿苋水溶性总多糖含量测定策略的建立22-23

2.3.2 马齿苋多糖提取工艺的优化23-25

2.3.3 马齿苋多糖脱色工艺的优化25-26

2.4 结果与讨论26-41

2.4.1 测定马齿苋水溶性总多糖含量的策略26-28

2.4.2 马齿苋多糖提取工艺的最佳条件28-37

2.4.3 马齿苋多糖脱色工论文导读：

艺的最佳条件37-41

2.5 本章小结41-42

第3章 马齿苋多糖的分级及理化性质的测定42-52

3.1 引言42

3.2 试验材料、试剂及试验仪器42-43

3.

2.1 试验材料42

3.

2.2 试验试剂42-43

3.

2.3 试验仪器43

3.3 试验策略43-45

3.1 精制马齿苋多糖的工艺流程43

3.2 多糖的分级43-44

3.3 多糖的凝胶柱层析44

3.4 马齿苋多糖的纯度鉴定44

3.5 多糖分子量的测定44-45

3.6 基本理化性质的测定45

3.7 马齿苋多糖的组成浅析45

3.4 结果与讨论45-51

3.4.1 马齿苋多糖的纤维素柱层析结果45-47

3.4.2 马齿苋多糖凝胶柱层析结果47

3.4.3 马齿苋多糖的纯度47-49

3.4.4 多糖POPⅠ、POPⅡ和POPⅢ分子量49

3.4.5 基本理化性质49-50

3.4.6 马齿苋多糖的组成浅析50-51

3.5 本章小结51-52

第4章 马齿苋多糖的一级结构表征52-62

4.1 引言52

4.2 试验材料、试剂及仪器52-53

4.

2.1 试验材料52

4.

2.2 试验试剂52-53

4.

2.3 试验仪器53

4.3 试验策略53-55
4.

3.1 多糖的水解53

4.

3.2 衍生物的制备(糖腈乙酸酯衍生化)53-54

4.

3.3 红外光谱浅析54

4.

3.4 高碘酸氧化反应54

4.

3.5 Smith降解反应54-55

4.4 结果与讨论55-61

4.1 红外色谱浅析结果55-56

4.2 POPⅠ、POPⅡ和POPⅢ的单糖组成56-58

4.3 高碘酸氧化结果浅析58-59

4.4 Smith降解结果浅析59-61

4.5 本章小结61-62

第5章 马齿苋多糖的体外抗氧化活性探讨62-68

5.1 引言62

5.2 试验材料、试剂与仪器62-63

5.

2.1 试验材料62-63

5.

2.2 试验试剂63

5.

2.3 试验仪器63

5.3 试验策略63-64
5.

3.1 对·OH的清除作用(H_2O_2/Fe~(2+)系统法)63

5.

3.2 对DPPH自由基的清除作用63-64

5.

3.3 多糖对Fe~(2+)诱发的脂质过氧化的抑制作用64

5.

3.4 还原能力的测定64

5.4 结果及浅析64-67
5.

4.1 马齿苋多糖对·OH自由基的清除作用浅析64-65

5.

4.2 马齿苋多糖对DPPH自由基的清除作用浅析65

5.论文导读：89第8章结论与展望89-918.1结论89-908.2展望90-91参考文献91-97攻读探讨生学位探讨成果97-98致谢98上一页1234

4.3 马齿苋多糖对对Fe~(2+)诱导的脂质过氧化的抑制作用浅析65-66

5.

4.4 马齿苋多糖的还原能力66-67

5.5 本章小结67-68
第6章 马齿苋多糖抗氧化活性的稳定性探讨68-74

6.1 引言68

6.2 试验材料、试剂与仪器68-69

6.

2.1 试验材料68

6.

2.2 试验试剂68

6.

2.3 试验仪器68-69

6.3 试验策略69
6.

3.1 贮存时间和贮存温度对马齿苋多糖体外清除·OH的影响69

6.

3.2 统计学处理69

6.4 结果与讨论69-73
6.

4.2 保存时间对马齿苋多糖体外抗氧化作用的影响69-71

6.

4.3 保存温度对马齿苋多糖体外抗氧化的影响71-73

6.5 本章小结73-74
第7章 马齿苋多糖抗糖尿病作用机理的探讨74-89

7.1 引言74

7.2 材料、试剂及仪器74-75

7.

2.1 试验材料74-75

7.

2.2 试验试剂75

7.

2.3 试验仪器75

7.3 细胞培养试剂的配制75-76
7.

3.1 培养液75

7.

3.2 胎牛血清75-76

7.

3.3 青链霉素76

7.

3.4 PBS缓冲液76

7.

3.5 MTT溶液76

7.

3.6 胰蛋白酶消化液76

7.4 试验策略76-79
7.

4.1 HIT-T15细胞的培养76

7.

4.2 alloxan毒性试验76-77

7.

4.3 马齿苋多糖对HI-T15细胞的影响77

7.

4.4 马齿苋多糖对alloxan诱导氧化损伤的HIT-T15细胞的影响77-79

7.5 结果与讨论79-88
7.

5.1 alloxan对HIT-T15细胞的影响79

7.

5.2 马齿苋多糖对HIG-T15细胞的影响79-81

7.

5.3 马齿苋多糖对alloxan诱导氧化损伤的HIT-T15细胞的影响81-88

7.6 本章小结88-89
第8章 结论与展望89-91
8.1 结论89-90
8.2 展望90-91
参考文献91-97
攻读探讨生学位探讨成果97-98
致谢98