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对于应激参芪复方对GK大鼠病变血管H0-1、P38MAPK及PGC-1mRNA影响实验

最后更新时间:2024-01-28 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:7296 浏览:19447
论文导读:
摘要:目的:本课题通过检测经参芪复方作用过的糖尿病大血管病变模型大鼠血清丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O:)的含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性水平,HE染色光镜下观察腹主动脉血管组织病理形态学转变,透射电镜观察腹主动脉血管组织细胞超微结构及线粒体变化,免疫组化法检测胸主动脉血管组织血红素氧合酶-1(HO-1)和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测胸主动脉血管组织PGC-1mRNA表达水平,以整体宏观水平和组织微观结构两个角度检测参芪复方对糖尿病大血管病变模型大鼠血管组织的影响及对模型大鼠氧化/抗氧化系统的影响,探讨参芪复方防治糖尿病大血管病变的作用机制,为临床推广中医药防治糖尿病大血管并发症提供论述依据。策略:选择随机血糖11.0mmol/L的GK大鼠55只,随机分为GK空白组14只、模型组13只、西药阿托伐他汀组14只、中药参芪复方组14只,另设正常Wistar大鼠14只为正常对照组。模型组、西药组、中药组大鼠给予含Nw-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)饮用水和高脂饲料喂养进行造模,策略是按照0.1mg/ml的浓度将L-NAME加入饮用水中,由大鼠自由饮水,自由摄食高脂饲料,时间为35天。造模同时开始给予相应受试药物,Wistar组、GK空白组及GK模型组每只大鼠按5ml/kg/d计算剂量灌服生理盐水,1次/天;西药阿托伐他汀组每只大鼠按1.6mmg/kg/d(相当于体重为60kg成人20mg/d剂量的5倍)的计算灌服阿托伐他汀钙混悬液,1次/天;中药参芪复方组每只大鼠按1.44g/kg/d(相当于体重为60kg成人剂量的10倍)计算灌服中药混悬液,1次/天;灌药周期35天。实验历程中Wistar组大鼠喂饲普通全价饲料,其余各组喂饲高脂饲料,自由摄食,时间为35天。每周测量大鼠体重1次,以便及时调整给药剂量。期间每日观察并记录各组大鼠一般精神情况,饮水、摄食情况、活动情况,体毛色泽变化情况。实验结束后处死大鼠,股动脉采血,放免法检测各组大鼠血清丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O:)的含量水平和血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;摘取并剥离胸及腹主动脉段,HE染色光镜下观察腹主动脉组织病理形态学变化,透射电镜观察腹主动脉组织细胞超微结构变化,免疫组化法论文导读:量显著大于各GK组大鼠摄食量(P0.01),实验历程中,中药组大鼠摄食量增加显著,至5周末实验结束时,中药组大鼠摄食量大于模型组大鼠摄食量,差别有统计学作用(P0.01),其余各组大鼠在实验历程中摄食量无统计学差别(P0.05)。wistar组大鼠饮水量显著小于GK大鼠饮水量(P0.01),实验历程中各组大鼠饮水量均有增加,中药组和wistar组大鼠饮
检测胸主动脉组织HO-1和p38MAPK蛋白表达水平,实时荧光定量PCR技术检测胸主动脉组织PGC-1mRNA表达水平。结果:中药参芪复方组大鼠一般精神状态及活动情况显著优于模型组大鼠;正常wistar组大鼠摄食量显著大于各GK组大鼠摄食量(P0.01),实验历程中,中药组大鼠摄食量增加显著,至5周末实验结束时,中药组大鼠摄食量大于模型组大鼠摄食量,差别有统计学作用(P0.01),其余各组大鼠在实验历程中摄食量无统计学差别(P0.05)。wistar组大鼠饮水量显著小于GK大鼠饮水量(P0.01),实验历程中各组大鼠饮水量均有增加,中药组和wistar组大鼠饮水量增加缓慢,模型组与空白组饮水量增速较快,西药组饮水量增加速度较模型组缓慢,至实验结束时,中药组大鼠饮水量显著低于模型组大鼠饮水量(P0.01)。实验前,wistar大鼠体重显著大于GK大鼠体重(P0.01),实验历程中各组大鼠体重逐渐增加,wistar组大鼠体重增速最快,模型组大鼠体重增速最慢,至实验结束中药组大鼠体重显著大于模型组大鼠体重(P0.01)。实验结束时模型组大鼠血清MDA含量显著高于GK组及wistar组大鼠血清MDA含量(P0.05),中药组和西药组大鼠血清MDA含量均显著低于模型组大鼠血清MDA含量(P0.01),中药组和西药组大鼠血清MDA含量水平相比较无统计学差别(P0.05)。模型组大鼠血清SOD水平低于GK组大鼠血清SOD水平,但差别无统计学作用(P0.05),模型组大鼠血清SOD水平低于wistar组大鼠血清SOD水平,差别有统计学作用(P0.01),中药组大鼠血清SOD水平显著高于模型组大鼠血清SOD水平,差别有统计学作用(P0.01),西药组大鼠血清SOD水平显著高于模型组大鼠血清SOD水平,差别有统计学作用(P0.05),中药组与西药组大鼠血清SOD水平相比较无统计学差别(P0.05)。模型组大鼠血清CAT活性显著低于GK组、Wistar组大鼠血清CAT水平,差别有统计学作用(P0.01),中药组大鼠与西药组大鼠血清CAT水平显著高于模型组大鼠血清CAT水平,差别有统计学作用(P0.01),中药组大鼠血清CAT水平显著高于西药组大鼠血清CAT水平,差别有统计学作用(PO.05)。模型组大鼠血清H2O含量水平高于GK组及Wistar组大鼠血清H2O:水平含量,但差别无统计学作论文导读:饮症状。参芪复方可以提升糖尿病大血管病变模型大鼠清除氧自由基能力,抑制氧化应激损伤,可以纠正氧化/抗氧化失衡状态。参芪复方可以增加糖尿病大血管病变模型大上一页123456下一页
用(P0.05),中药组大鼠血清H20:水平含量显著低于模型组大鼠血清H2O:水平,差别有统计学作用(P0.05),西药组大鼠血清H2O2水平含量低于模型组大鼠血清H2O2水平含量,但差别无统计学作用。模型组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平显著低于GK组及Wistar组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平,差别有统计学作用(P0.01),中药组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平显著高于模型组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平,差别有统计学作用(P0.01),西药组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平与模型组大鼠动脉组织HO-1蛋白表达水平无统计学差别(P0.05)。模型组大鼠动脉组织p38MAPK蛋白表达水平显著高于GK组、Wistar组大鼠动脉组织p38MAPK蛋白表达水平,差别有统计学作用(P0.05),中药组与西药组大鼠动脉组织p38MAPK蛋白表达水平显著低于模型组大鼠动脉组织p38MAPK蛋白表达水平,差别有统计学作用(P0.05),中药组与西药组大鼠动脉p38MAPK蛋白表达水平相比较无统计学差别(P0.05)。模型组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平显著低于GK组、Wistar组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平,差别有统计学作用(P0.01),中药组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平显著高于模型组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平,差别有统计学作用(P0.01],西药组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平与模型组大鼠动脉组织PGC-1mRNA水平比较,无统计学差别(P0.05)。模型组大鼠动脉病理形态学光镜下显示内膜增厚,腔内有大量泡沫细胞及纤维组织增生,有显著动脉粥样硬化转变,表明造模成功,中药组与西药组大鼠动脉组织病理转变较模型组动脉转变轻微。大鼠动脉组织透射电镜下观察,模型组大鼠血管细胞微结构与GK大鼠比较,内皮细胞结构不清晰或质膜破裂,内皮下层增厚,平滑肌细胞空泡变性,中膜胶原纤维增加,线粒体数量减少,中药组与西药组大鼠动脉内皮细胞超微结构病变较模型组轻微,线粒体结构较清晰。结论:L-NAME配合高脂饲料喂养能复制GK大鼠为糖尿病大血管病变动物模型。参芪复方能显著改善糖尿病大血管病变模型大鼠精神状态,减轻多饮症状。参芪复方可以提升糖尿病大血管病变模型大鼠清除氧自由基能力,抑制氧化应激损伤,可以纠正氧化/抗氧化失衡状态。参芪复方可以增加糖尿病大血管病变模型大论文导读:关键词:参芪复方论文糖尿病大血管病变论文氧化应激论文动脉粥样硬化论文中医药论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要6-9ABSTRACT9-12英文缩略12-15前言15-19实验探讨19-471实验材料19-21

1.1实验动物192实验药品及试剂1

鼠血管内皮细胞线粒体合成,具有延缓和防治糖尿病大血管病变的作用。提升糖尿病大血管病变模型大鼠抗氧化酶,减少氧自由基,增加动脉组织HO-1蛋白表达水平,抑制p38MAPK蛋白激活,升高血管PGC-1mRNA水平,调控血管细胞线粒体合成和氧化应激水平,减少氧化应激损伤,可能是参芪复方防治糖尿病血管病变的作用机制。关键词:参芪复方论文糖尿病大血管病变论文氧化应激论文动脉粥样硬化论文中医药论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要6-9
ABSTRACT9-12
英文缩略12-15
前言15-19
实验探讨19-47
1 实验材料19-21

1.1 实验动物19

1.2 实验药品及试剂19-21

1.3 主要仪器设备21

2 实验策略21-23

2.1 实验分组与建立模型21-23

2.

1.1 分组21-22

2.

1.2 建立模型22

2.

1.3 动物喂养22-23

2.2 给药策略23

2.1 实验动物给药剂量的计算23

2.2 实验用药的制备23

2.3 给药策略23

3 观察指标及检测策略23-29

3.1 标本采集及处理23-24

3.2 一般状态的观察24

3.3 血糖的检测24

3.4 主动脉显微结构观察24-25

3.4.1 病理切片的制备24-25

3.4.2 病理切片的显微结构观察25

3.4.3 主动脉超微结构的透射电镜观察25

3.5 血清MDA、H_2O_

2、SOD、CAT水平检测25

3.6 大鼠主动脉组织HO-1蛋白表达的测定25-26

3.7 大鼠主动脉组织p38MAPK蛋白表达的测定26-27

3.8 大鼠主动脉组织PGC-1mRNA表达的测定27-29

3.8.1 实验准备27

3.8.2 细胞总核糖核酸(RNA)提取27-28

3.8.3 定量PCR检测28-29

3.8.4 实时定量PCR扩增产物的鉴定29

4 数据统计策略29-30
5 结果与浅析30-45

5.1 一般状态观察30-33

5.

1.1 各组大鼠一般情况变化30-31

5.

1.2 各组大鼠实验历程中饮水量变化情况31-32

5.

1.3 各组大鼠实验历程中摄食量变化情况32-33

5.2 对大鼠实验前后体重和血糖水平变化的影响33-35
5.2.1 各组大论文导读:35.7.2主动脉PGCmRNART-PCR扩增曲线及熔解曲线情况43-445.7.3各组大鼠动脉PGC-ImRNA表达水平的比较44-456小结45-47讨论47-821中医对糖尿病及其并发症的认识48-581.1消渴病(糖尿病)的历史沿革48-511.2历代医籍对消渴病病因病机的记载51-531.2.1元气不足,肾精亏虚51-521.2.2饮食不节,积热伤津521.2.3情志失调,郁火伤
鼠实验历程中体重变化情况33-34
5.

2.2 各组大鼠实验历程中血糖变化情况34-35

5.3 对大鼠血清氧化应激系统部分指标变化的影响35-38

5.4 对大鼠主动脉显微结构及超微结构的影响38-40

5.

4.1 光镜下观察主动脉组织病理学变化情况38-39

5.

4.2 透射电镜观察如下39-40

5.5 对大鼠主动脉HO-1蛋白表达的影响40-41

5.6 对大鼠主动脉p38MAPK蛋白表达的影响41-42

5.7 对各组大鼠动脉组织PGC-1mRNA表达的影响42-45

5.7.1 内参β-actin扩增曲线及熔解曲线情况42-43

5.7.2 主动脉PGCmRNA RT-PCR扩增曲线及熔解曲线情况43-44

5.7.3 各组大鼠动脉PGC-ImRNA表达水平的比较44-45

6 小结45-47
讨论47-82
1 中医对糖尿病及其并发症的认识48-58

1.1 消渴病(糖尿病)的历史沿革48-51

1.2 历代医籍对消渴病病因病机的记载51-53

1.2.1 元气不足,肾精亏虚51-52

1.2.2 饮食不节,积热伤津52

1.2.3 情志失调,郁火伤阴52

1.2.4 房劳过度,肾精受损52-53

1.2.5 久服温燥,阴津亏损53

1.2.6 大病之后,阴虚53

1.3 近现代医家对消渴病因病机的认识53-55

1.3.1 阴虚为消渴之本53-54

1.3.2 消渴源于气虚54

1.3.3 气阴两虚54

1.3.4 肝郁化火54

1.3.5 瘀血与消渴54-55

1.3.6 毒邪学说55

1.4 消渴及其变证的主要病机特点55-58

1.4.1 气阴两虚为其本56

1.4.2 脉络瘀阻为其标56-57

1.4.3 消渴及其变证辨证论治特点57-58

2 现代医学对糖尿病血管并发症的认识58-64

2.1 糖尿病血管并发症与机体胰岛素抵抗状态58-59

2.2 糖尿病血管并发症与机体高血糖状态59

2.3 糖尿病血管并发症与血管内皮细胞功能障碍59-60

2.4 糖尿病血管并发症与炎症因子60-61

2.5 糖尿病血管并发症与血液动力学转变61

2.6 糖尿病血管并发症与氧化应激61-62

2.7 糖尿病血管并发症防治近况62-64

3 中医“治未病”论述64-65
4 本课题参芪复方的选用依据65-69

4.1 参芪复方的相关论述探讨65-68

4.2 参芪复方的相关探讨基础68-69

5 本课题动物模型的选择依据69-70
6 本课论文导读:
题阳性对照药物(阿托伐他汀)的选择依据70-72

6.1 降脂71

6.2 抗炎症反应71

6.3 抑制动脉平滑肌细胞(C)增殖71

6.4 改善血流动力学状态71-72

6.5 抗氧化应激72

7 参芪复方对GK大鼠病变血管保护机制的探讨72-82

7.1 参芪复方对GK大鼠一般状态的影响72-73

7.2 参芪复方对GK大鼠血糖的影响73-74

7.3 参芪复方对GK大鼠腹主动脉微结构及超微结构的影响74-75

7.

3.1 光镜下观察主动脉病理学变化情况74-75

7.

3.2 透射电镜下观察动脉组织超微结构情况75

7.4 参芪复方对GK大鼠血清MDA、SOD、CAT和H_2O_2的影响75-77

7.5 参芪复方对GK大鼠腹主动脉HO-1蛋白表达的影响77-79

7.6 参芪复方对GK大鼠腹主动脉p38MAPK蛋白表达的影响79-80

7.7 参芪复方对GK大鼠腹主动脉PGC-1mRNA表达的影响80-82

结论82-83
不足与展望83-84
参考文献84-94
附图

一、大鼠主动脉组织病理图谱(HE×100倍)94-95

附图

二、大鼠主动脉组织P38MAPK(免疫组化,DAB显色×400倍)95-96

附图

三、大鼠主动脉组织HO-1(免疫组化,DAB显色×200倍)96-97

附图

四、大鼠主动脉电镜图谱97-99

附:综述99-107
参考文献104-107
致谢107-108
在校期间公开发表论文及科研成果108-109