谈心衰益气活血中药对心衰大鼠MMP-2/TIMP-2表达实验

论文导读：
摘要：目的：慢性心衰是一个复杂进展历程，而心室重构是这个病理历程的关键，受到多种因子的调控，其中，基质金属蛋白酶(MMP-2)及其组织抑制剂（TIMP-2）是心室重构历程中重要的调节因子之一。本次实验则是通过建立大鼠心梗后慢性心衰模型，来观察益气、活血、利水三种不同中药复方对慢性心衰大鼠心肌组织中MMP-2和TIMP-2表达的影响，并探讨三种中药复方治疗慢性心衰的最佳组合及其作用机理，为中医临床用药提供科学依据和论述指导。材料与策略：1．选择体重为200～250克，普通级12周龄健康雄性Wistar大鼠100只，适应性喂养一周后，采取结扎冠状动脉并配合饥饿减食、力竭式游泳的策略造成大鼠心梗后慢性心衰的模型。经多普勒超声心动图检测左室射血分数EF≤40%，同时大鼠的精神状态不佳者判定为造模成功并列为观察对象。2．将造模成功的大鼠随机分为益气组、活血组、益气活血组、益气活血利水组、西药组、模型组，并额外设立假手术组作为对照。各个中药组分别灌服相应的中药，西药组灌服赖诺普利，给药量均按人鼠剂量换算，模型组及假手术组灌服等容积的生理盐水，共喂养6周。3．6周后，经彩色多普勒超声机测定大鼠心功能，并对各组大鼠的左室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）进行比较。4．将大鼠处死，取出心脏称重，并与其体重进行比较。5．取其左室部分心肌组织用免疫组化法、实时荧光定量PCR法及HE染色法测定各组大鼠心肌组织中MMP-2、TIMP-2的表达及组织形态学的变化情况。结果：1.对大鼠心功能的影响：与假手术组相比，模型组大鼠的左室射血分数（LVEF%）显著降低（P0.01）；与模型组相比，各喂药组大鼠的LVEF%显著增高（P0.01）；与西药组相比，活血组、益气活血组、益气活血利水组大鼠的LVEF%差别无统计学作用（P0.05）；各中药组之间，益气活血利水组大鼠的LVEF%显著高于益气组、活血组、益气活血组，（P0.05）；其中，益气活血组又优于益气组（P0.05）。与假手术组相比，模型组大鼠的短轴缩短率（FS%）显著降低（P0.01）；与模型组相比，各喂药组大鼠的FS%显著增高（P0.01）；益气活血组大鼠的FS%与西药组相比（P0.05）；各中药组之间，益气活血利水组大鼠的FS%显著高于益气组、活血组、益气活血组，（P0.01）；其中，益气活血组又优于益气组（P0.05）。2.对大鼠心脏重量及心脏体重比值的影响与假手术组相比，模型组大鼠的心脏重量显著增大（P0.01）；与模型组相比，益气活血组、益气活血利水组、西药组大鼠的心脏重量显著降低（P0.01）；各喂药组之间，与西药组相比，益气组、益气活血组、益气活血利水组大鼠的心脏重量之间的差别无统计学作用（P0.05）；其中，益气活血利水组与益气活血组心脏重量较益气组、活血组显著降低(P0.05)。与假手术组相比，模型组大鼠的心脏体重比值显著增大（P0.01）；与模型组相比，各喂药组大鼠的心脏体重比值显著降低（P0.01）；各喂药组之间，与西药组相比，益气活血组、益气活血利水组大鼠的心脏体重比值之间的差别无统计学作用（P0.05）；其中，益气活血利水组与益气活血组心脏体重比值较益气组、活血组显著降低(P0.05)。3.用免疫组化法测定各组大鼠心肌组织中MMP-2、TIMP-2的蛋白表达与假手术组相比，模型组大鼠心肌组织中MMP-2的表达显著增高（P0.01）；各喂药组之间：以蛋白表达走势上看，益气活血利水组的MMP-2表达弱于益气活血组；益气活血组的MMP-2表达弱于活血组与益气组，益气活血利水组、益气活血组与西药组之间MMP-2表达的差别均无统计学作用（P0.05）。与假手术组相比，模型组大鼠心肌组织中TIMP-2的表达显著减低（P0.01）；各喂药组之间：以蛋白表达走势上看，益气活血利水TIMP-2的表达强于益气活血组，益气活血组TIMP-2的表达强于活血组与益气组，益气活血利水组、益气活血组与西药组之间TIMP-2表达的差别均无统计学作用（P0.05)。4.实时荧光定量PCR法测定各组大鼠心肌组织中MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA的表达与假手术组相比，模型组大鼠心肌组织中MMP-2mRNA的表达显著增高（P0.01）。各喂药组之间：益气活血利水组的MMP-2mRNA的表达弱于益气组、活血组、益气活血组（P0.01）。与假手术组相比，模型组大鼠心肌组织中TIMP-2mRNA的表达显著减低（P0.01）。各喂药组之间：益气活血利水组TIMP-2mRNA的表达强于益气组、活血组、益气活血组（P0.01）。5. HE染色法观察各组大鼠心肌组织形态学的变化假手术组：心肌细胞排列紧凑规整，闰盘、横纹清晰，横纵切面观察，形态结构一致，心肌细胞核位于心肌细胞边缘，形态、大小均正常，肌原纤维（或纤维）排列论文导读：色质呈现团块状，相邻细胞闰盘间隙增宽。西药组：心肌细胞排列较规整，可见到横纹，大部分心肌细胞核形态、大小、基本正常，位于心肌细胞边缘，肌原纤维排列较有序，仍可见有断裂及缺损及空白区着色不均匀。益气活血利水组：心肌细胞排列较规整，可见横纹，闰盘清晰，心肌细胞核仍固缩呈圆形，位于心肌细胞边缘，肌原纤维排列较有序，仍可
有序，无断裂及缺损、空白区。模型组：心肌细胞交织成网，看不到横纹，心肌细胞核、心肌纤维排列紊乱，断裂及缺失，心肌细胞核固缩，出现空白区，异染色质呈现团块状，相邻细胞闰盘间隙增宽。西药组：心肌细胞排列较规整，可见到横纹，大部分心肌细胞核形态、大小、基本正常，位于心肌细胞边缘，肌原纤维排列较有序，仍可见有断裂及缺损及空白区着色不均匀。益气活血利水组：心肌细胞排列较规整，可见横纹，闰盘清晰，心肌细胞核仍固缩呈圆形，位于心肌细胞边缘，肌原纤维排列较有序，仍可见有断裂及缺损及空白区。益气活血组：心肌细胞排列较规整，可见横纹，可见心肌细胞核较为固缩呈圆形，位于心肌细胞边缘，肌原纤维排列较有序，仍可见有断裂及缺损及空白区。活血组：心肌细胞与模型组比较有所改善，看不到横纹，心肌细胞核、心肌纤维排列紊乱，断裂及缺失，心肌细胞核固缩，仍有空白区，仍可见异染色质呈团块状，可见有断裂及缺损及空白区着色不均匀。益气组：与模型组比较有所改善，看不到横纹，心肌细胞核、心肌纤维排列较规整，有断裂及缺失，心肌细胞核固缩，仍有空白区，仍可见异染色质呈团块状，及相邻细胞闰盘间隙增宽。结论：1.采取结扎冠状动脉并配合饥饿减食、力竭式游泳的策略，经心脏彩超检测和大鼠精神状态的评定，证明本法造成大鼠心梗后慢性心衰的模型可行。2.经6周药物治疗后，通过测定大鼠的心脏重量、心脏与体重比值及心功能，并经免疫组化、实时荧光定量PCR法及HE染色法测定大鼠心肌组织发现，各给药组能显著改善慢性心衰大鼠的心室重构，降低心肌组织中MMP-2的表达，提升TIMP-2的表达，改善心肌组织形态，对心功能的改善起到推动作用，对其表达影响的走势以高往低分别为：益气活血利水组、益气活血组、活血组、益气组。3.通过上面陈述的数据，说明了益气、活血、利水中药相互配合治疗慢性心衰是行之有效的策略，中药对心室重构及心功能的改善可能通过影响MMP-2/TIMP-2的平衡而起作用，其中以益气活血组、益气活血利水组的疗效较单用益气药或活血药的益气组、活血组显著，并且疗效不亚于西药赖诺普利。关键词：慢性心衰论文益气活血论文MMP-2/TIMP-2论文
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摘要6-10
Abstract10-17
前言17-19
文献综述19-29

1.肾素-血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）通路19-21

2.肾上腺素能受体（β-AR）信号相关通路21-22

3.Ca2+相关的信号通路22-23

4.磷脂酰肌醇途径（PI3K 信号转导通路）23-24

5.NRG-1/ErbB 信号通路24

6．RhoA/Rho 激酶信号通路24
7．内皮素（ET）信号通路24-25
8．一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）通路25
9．生长激素（GF）/胰岛素样生长因子（IGF）通路25
10. 其它相关因子25-27
1

1. 中医药相关探讨27-28

1

2. 结语28-29

1 实验材料29-30
2 实验策略30-35

3.结果35-45

浅析讨论45-51
结论51-52
参考文献52-57
致谢57-58
个人简历58