黄瓜花叶病毒基因时序表达及其对寄主miRNAs和靶标mRNAs表达影响

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摘要：病毒侵染通常会破坏寄主植物正常的生理活动,导致植物异常症状产生,从叶片黄化到植株发育异常整株死亡论文的格式。黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是世界上发生最广泛、对农作物危害最严重的植物病毒毕业论文摘要。卫星RNA(satelpte RNA,satRNA)对CMV引起的寄主症状具有减弱作用,也有一些satRNAs对CMV的致病性影响,或具有的加重作用毕业论文致谢范文。近年来,越来越多的研究,在病毒侵染寄主诱导症状产生的中,植物体内的小RNA分子起着作用,其中主要是microRNAs(miRNAs)和all interfering RNAs(siRNAs)。miRNAs是非编码的小RNA,广泛存在植物组织中,它们基于与靶标mRNA的序列互补,可以对靶标mRNA的表达调控论文查重。与其他环境胁迫因子,病毒侵染导致寄主植物症状的产生是由基因表达调控因子和信号通路交互作用的结果,而miRNAs在此中的机理尚未完全清楚毕业论文提纲格式。这一对miRNA的检测有困难,仍有miRNAs尚未被认识到;另一不同的病毒致病决定因子对寄主抗病毒RNA沉默途径的干扰机制不同。本研究应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)技术,研究了CMV国际标准株系CMV-Fny、基因突变体CMV-FnyΔ2b、添加致弱卫星的CMV-Fny-satYn12、添加非致弱卫星的CMV-Fny-satT1以及番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,T)侵染番茄后,寄主miRNA及其靶标mRNA表达量的特异性变化,CMV-Fny基因表达量的差异变化情况,探讨CMV致病决定子2b蛋白以及其寄生因子satRNAs干扰寄主miRNA沉默途径的作用,从病毒基因表达量和寄主miRNA及其靶标mRNA表达量来分析病毒侵染导致寄主症状产生的原因论文网。研究结果,添加两种卫星后,辅助病毒的病毒基因都降低了;相比于非致弱卫星T1,致弱卫星Yn12对辅助病毒CMV-Fny的病毒基因表达量有更大的降低大学毕业论文。所检测的番茄叶片组织中的11条miRNAs和10条靶标mRNAs的表达量在CMV-Fny和T-Bj侵染后都有了不同的上升。添加satYn12后地抑制了辅助病毒对miRNAs表达量的上调,而添加satT1并未改变辅助病毒对寄主miRNAs的影响学年论文范文。缺失2b基因的CMV- FnyΔ2b侵染后番茄叶片中的病毒基因表达量,与Mock,其对寄主miRNA及靶基因的表达量也几乎影响,出CMV 2b基因在致病中的性毕业论文任务书。这些结果为揭示卫星对CMV致病性影响的关系、植物miRNAs及其靶标mRNAs与病毒侵染的关系进而阐明病毒-寄主互作的分子机制了一些理论依据毕业论文致谢词。关键词：黄瓜花叶病毒论文卫星RNA论文病害症状论文番茄miRNA论文基因表达论文
略语表8-9
摘要9-11
Abstract11-15
章 文献综述15-26

1.1 黄瓜花叶病毒15-18

1.1 CMV 概述15

1.2 CMV 基因组结构及其功能15-16

1.3 CMV 卫星RNA16-18

1.2 miRNAs 概述18-22

1.2.1 RNA 沉默与miRNA 的发现18-19

1.2.2 miRNA 在植物中的分布19-20

1.2.3 植物miRNA 的形成与调控20-21

1.2.4 植物miRNA 的功能21-22

1.2.4.1 miRNA 参与植物的生长发育21

1.2.4.2 miRNA 参与叶和根的发育21-22

1.2.4.3 miRNA 参与花的发育及性别决定22

1.2.4.4 miRNA 参与植物的信号转导22

1.2.4.5 miRNA 在其他的功能22

1.3 番茄及侵染番茄植株的主要病毒22-23

1.4 病毒-寄主互作与miRNA 调控途径的关系23-24

1.5 实时荧光定量PCR 技术24-25

1.6 本论文的研究内容与目的25-26

1.6.1 本论文的研究内容25

1.6.2 本论文的研究目的及25-26

章 黄瓜花叶病毒基因时序表达差异与致病性研究26-41

2.1 与方法27-33

2.

1.1 寄主植物27

2.

1.2 病毒接种27

2.

1.3 酶与试剂27-28

2.

1.4 T1-satRNA 和Yn12-satRNA 的体外转录28-29

2.

1.5 大量抽取植物中黄瓜花叶病毒双链RNA29

2.

1.6 植物总RNA 提取29-31

2.

1.7 引物的筛选31

2.

1.8 RT-PCR 扩增31-32

2.

1.9 荧光定量PCR32

2.

1.10 数据处理32-33

2.2 结果与分析33-39

2.1 致弱卫星Yn12 和非致弱卫星T1 的体外转录33-34

2.2 病毒侵染后在番茄上引起的症状34

2.3 病毒侵染番茄35 天后抽dsRNA 结果34-35

2.4 荧光定量PCR 扩增引物的验证35-37

2.5 荧光定量PCR 分析不同CMV-Fny 基因时序表达差异37-39

2.3 小结与讨论39-41

章 病毒侵染引起番茄miRNA 差异表达的研究41-53

3.1 方法42-45

3.

1.1 寄主和毒源42

3.

1.2 酶与试剂42

3.

1.3 总RNA 提取42

3.

1.4 miRNA 引物设计42-44

3.

1.5 cDNA 链的合成44

3.

1.6 荧光定量PCR 44-45

3.

1.7 荧光定量PCR 结果的处理45

3.2 实验结果45-50
3.

2.1 侵染病毒后番茄症状45-46

3.

2.2 引物扩增特异性的验证46-48

3.

2.3 miRNAs 的real-time RT-PCR 检测结果48-49

3.

2.4 miRNA 检测结果分析49-50

3.3 小结与讨论50-53
章 番茄miRNA 的靶标m RNA 对病毒侵染的响应53-63

4.1 与方法54-56

4.

1.1 寄主和毒源54

4.

1.2 酶与试剂54

4.1.3 总RNA 提取论文片段—实验结果56-604.2.1侵染病毒番茄症状564.2.2引物扩增特异性的验证56-584.2.3靶基因的real-timeRT-PCR检测结果58-594.2.4靶基因检测结果分析59-604.3小结与讨论60-63总结63-65参考文献65-70附录：溶液的配制70-71致谢71-72攻读硕士学位期间的研究成果72上一页12黄瓜花叶病毒论文,卫星RNA论文,病害症状论文,番茄miRNA论文,基因表达论文,
54
4.

1.4 引物设计54

4.

1.5 cDNA 链的合成54-55

4.

1.6 荧光定量PCR 55-56

4.

1.7 荧光定量PCR 结果的处理56

4.2 实验结果56-60
4.

2.1 侵染病毒番茄症状56

4.

2.2 引物扩增特异性的验证56-58

4.

2.3 靶基因的real-time RT-PCR 检测结果58-59

4.

2.4 靶基因检测结果分析59-60

4.3 小结与讨论60-63
总结63-65
参考文献65-70
附录：溶液的配制70-71
致谢71-72
攻读硕士学位期间的研究成果72