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探讨质粒BCMA-Fc作为潜在药物资料网

最后更新时间:2023-12-18 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:4350 浏览:12096
论文导读:我们已经将制备出的Fc片段成功的插入到了pET28a原核表达质粒中,成功的构建出了pET28a-Fc重组质粒。之后,我们将pET30a-BCMA-Fc和pET28a-Fc重组质粒转化到大肠杆菌中,分别用IPTG进行诱导,SDS-PAGE检测,蛋白A柱进行了纯化,并获得了高纯度的融合蛋白BCMA-Fc和Fc。最后,我们用酶联免疫吸附试验浅析出BCMA-Fc融合蛋白能够特异性的
摘要:B细胞刺激因子(B cell activating factor from the TNF family,BLyS),是肿瘤坏死因子家族中的一个新的成员,是在1999年发现的一种重要的免疫调节因子,它有着两种形式:一种是膜结合形式,另一种是可溶性蛋白的形式并且它能够调节B细胞的分化和生长。B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)是BLyS的一种受体,它是一种非糖基化的I整合膜蛋白,主要在成熟的B淋巴细胞中表达。本论文中我们主要鉴定了pET30a-BCMA-Fc重组质粒,重新构建一种pET28a-Fc重组质粒,并对pET30a-BCMA-Fc,pET28a-Fc两种融合蛋白进行了诱导表达,纯化和生物学活性的鉴定。本论文的主要目的是进一步阐述BLyS与其受体的相互联系,为未来自身免疫疾病和B细胞淋巴瘤的治疗提供一个实验基础。目前为止,我们已经将制备出的Fc片段成功的插入到了pET28a原核表达质粒中,成功的构建出了pET28a-Fc重组质粒。之后,我们将pET30a-BCMA-Fc和pET28a-Fc重组质粒转化到大肠杆菌中,分别用IPTG进行诱导,SDS-PAGE检测,蛋白A柱进行了纯化,并获得了高纯度的融合蛋白BCMA-Fc和Fc。最后,我们用酶联免疫吸附试验浅析出BCMA-Fc融合蛋白能够特异性的与BLyS结合,并且随着蛋白浓度的增加而呈现出一定的递增,而Fc不能与BLyS特异性的结合。此外,我们还验证了拮抗肽BC能够特异性的抑制BCMA-Fc与BLyS的结合作用,并且其抑制率随着拮抗肽BC浓度的增大而显著增大;而无关肽NRP则不能特异性的抑制BCMA-Fc与BLyS的结合,只有着少量的非特异性抑制作用。关键词:BLyS论文BCMA论文重组质粒论文蛋白表达论文功能鉴定论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要3-4
ABSTRACT4-7
第一章 文献综述7-13

1.1 BLyS的简述7-8

1.2 BLyS的受体介绍8-9

1.3 BLyS的信号通路9-10

1.4 BLyS的生物学功能10-11

1.5 BLyS与自身免疫疾病11-12

1.6 小结12-13

第二章 实验材料和实验策略13-30

2.1 实验材料13-14

2.2 实验试剂14-15

2.3 实验仪器15-16

2.4 溶液的配制16-19

2.5 实验策略19-30

2.5.1 pET30a-BCMA-Fc重组质粒的提取19-20

2.5.2 pET30a-BCMA-Fc重组质粒的双酶切鉴定20

2.5.3 pET30a-BCMA-Fc重组质粒的PCR鉴定20-21

2.5.4 融合蛋白的诱导表达21-22

2.5.5 BCMA-Fc 融合蛋白的纯化22-23

2.5.6 pET28a-Fc重组质粒的构建和蛋白的纯化23-26

2.5.7 BCMA-Fc和Fc两种融合蛋白与BLyS的结合试验26-27

2.5.8 拮抗肽的结合抑制实验27-30

第三章 结果和讨论30-40

3.1 pET30a-BCMA-Fc重组质粒的检测30-31

3.2 BCMA-Fc融合蛋白的诱导表达和纯化31-33

3.3 pET28a-Fc重组质粒的构建33-36

3.1 插入片段和载体的制备33-35

3.2 pET28a-Fc融合蛋白的表达纯化35-36

3.4 BCMA-Fc融合蛋白与BLyS的特异性结合浅析36-38

3.5 拮抗肽对于BCMA-Fc融合蛋白与BLyS的结合抑制38-40

小结40-42
参考文献42-45
发表论文和参加科研情况说明45-46
致谢46