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阐述荧光功能化聚合物微球制备及其在转基因检测中运用

最后更新时间:2024-01-05 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:25314 浏览:110153
论文导读:试剂、材料与仪器19-222.1.1实验试剂19-202.1.2实验材料20-212.1.3实验仪器21-222.2包埋式聚合物磁性微球的制备及运用22-282.2.1包埋式聚合物微球的制备及表征22-242.2.2磁性微球提取法在马铃薯类食品的转基因检测中的运用24-262.2.3磁性微球提取法与常用DNA提取策略、试剂盒的比较262.2.4磁性微球在基于探针捕获
摘要:尽管转基因作物具备抗虫害、抗除草剂、高产等优良的特性,但人们一直没有对它的安全性达成共识,许多国家都要求食品具有表明转基因成分与含量的标签。目前,最常见的转基因检测策略包括聚合酶链式反应(PCR)和荧光实时定量PCR(FQ-PCR)。PCR技术通过扩增标记基因、启动子基因和终止子基因可实现快速有效的转基因成分定性、定量检测。另一方面,随着科学技术的不断进步,出现了流式细胞仪、液相芯片等一系列具有更高通量的转基因检测新手段。转基因的检测离不开两大关键步骤,即核酸提取和核酸检测。而现今的常规技术有着一些难以克服的困难。第一,提取植物基因组的经典策略通常需要利用有机溶剂多次抽提和离心,不仅污染环境,费时费力,不易实现自动化,而且易造成有机溶剂残留,以而限制后续生物检测。第二,作为检测载体的功能化微球,制备步骤繁琐,常需要多步反应得到。针对以上的不足,本论文首先采取无皂乳液聚合法制备了一种粒径小,分散性较好,磁性强的包埋式磁性聚合物微球。将其用于马铃薯类深加工食品的DNA提取中,对深加工食品这一类核酸丰度较低的样品的DNA提取策略进行了探讨,并通过常规PCR和FQ-PCR考察了该策略获得的基因组核酸的纯度与产率。通过将制备的磁性微球以及提取策略与CTAB法、商品化试剂盒相比较,进一步探讨了该策略的有效性,探讨了各种深加工食品的DNA提取策略的优点与缺点,针对性与普适性。随后,将这种磁性微球表面偶联寡核苷酸探针,通过探针捕获实现了目标片段有效而特异性地检测。本论文通过三聚氰胺与甲醛的共缩聚反应,制备了一种单分散、亲水性、表面富含氨基的包埋式荧光聚合物微球。将这种荧光微球表面结合特异性核酸探针,通过编码荧光微球的探针捕获可在同一时间实现转基因成分的定性、定量测定,为液相芯片的快速、高通量转基因检测打下了坚实的基础。最后,本论文通过改善无皂乳液聚合法,制备了一种包埋式磁性荧光双功能化的聚合物微球,通过将其运用于转基因片段的探针捕获检测中,对编码磁性荧光微球的制备及运用进行了初步探讨。综上所述,本论文制备的磁性微球、荧光微球、荧光磁性微球,不仅可以作为基因组DNA的固相吸附载体,更可在DNA的探讨和检测中实现快速分离和高通量浅析,对转基因检测工作具有重要的作用。关键词:转基因检测论文DNA固相提取论文DNA探针捕获论文磁性微球论文荧光微球论文磁性荧光微球论文
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ABSTRACT4-8
第一章 文献综述8-19

1.1 转基因技术概述8-9

1.1 转基因技术及转基因作物的进展近况8

1.2 转基因技术的潜在风险8-9

1.2 转基因食品检测的探讨进展9-12

1.2.1 传统检测策略9-11

1.2.2 新型转基因检测法11-12

1.3 功能化聚合物微球的探讨进展12-17

1.3.1 磁性聚合物微球的制备策略12-15

1.3.2 荧光聚合物微球的制备策略15-16

1.3.3 磁性荧光双功能化微球的制备策略16-17

1.4 立题依据、探讨目标与内容17-19

第二章 实验部分19-31

2.1 实验试剂、材料与仪器19-22

2.

1.1 实验试剂19-20

2.

1.2 实验材料20-21

2.

1.3 实验仪器21-22

2.2 包埋式聚合物磁性微球的制备及运用22-28

2.1 包埋式聚合物微球的制备及表征22-24

2.2 磁性微球提取法在马铃薯类食品的转基因检测中的运用24-26

2.3 磁性微球提取法与常用 DNA 提取策略、试剂盒的比较26

2.4 磁性微球在基于探针捕获的转基因检测中的运用26-28

2.3 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备及运用28-29

2.3.1 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备及表征28-29

2.3.2 荧光微球在基于探针捕获的转基因检测中的运用29

2.4 荧光磁性双功能化聚合物微球的制备及运用29-31

2.4.1 荧光磁性聚合物微球的制备及表征29-30

2.4.2 荧光磁性聚合物微球在转基因检测中的运用30-31

第三章 磁性聚合物微球的制备及运用31-50
引言31

3.1 磁性物微球的制备及表征31-35

3.1论文导读:

.1 磁流体的形貌表征31-33
3.

1.2 磁性微球的制备与表征33-34

3.

1.3 磁性微球制备的条件实验34-35

3.2 马铃薯类深加工食品的 DNA 提取与转基因检测35-40
3.

2.1 基于磁性微球的小牛胸腺 DNA 纯化35-36

3.

2.2 马铃薯类深加工食品的 DNA 提取36-37

3.

2.3 马铃薯类深加工食品的转基因检测37-40

3.3 磁性微球 DNA 提取法与 CTAB 法及三种试剂盒的比较40-45

3.1 基于紫外与凝胶电泳的策略评价40-41

3.2 基于 PCR 的策略评价41-45

3.4 磁性微球在探针捕获转基因检测中的运用45-49

3.4.1 磁性微球的 idin 包覆45-46

3.4.2 基于紫外检测的磁性微球探针捕获46-47

3.4.3 基于荧光检测的磁性微球探针捕获47-49

3.5 本章小结49-50

第四章 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备及运用50-58
引言50

4.1 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备50-56

4.

1.1 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备及表征50-52

4.

1.2 三聚氰胺甲醛编码荧光微球的制备及表征52-53

4.

1.3 三聚氰胺甲醛荧光微球的制备条件考察53-56

4.2 三聚氰胺甲醛荧光微球的运用56-57
4.

2.1 荧光微球的表面 idin 包覆56

4.

2.2 荧光微球探针捕获转基因检测56-57

4.3 本章小结57-58
第五章 磁性荧光聚合物微球的制备及运用58-62
引言58

5.1 磁性荧光微球的制备及表征58-59

5.2 磁性荧光微球的初步运用59-60

5.

2.1 定性浅析59-60

5.

2.2 定量浅析60

5.3 本章小结60-62
第六章 结论及展望62-64

6.1 结论62

6.2 展望62-64

参考文献64-70
发表论文和参加科研情况说明70-71
致谢71