虎纹捕鸟蛛毒素HWTX-XVIIb1空间结构核磁共振探讨

论文片段—HWTX-XVIIb1结构与功能的关系,利用二维1H核磁共振(NMR)技术研究了它的空间结构,分析水和重水中的DQF-COSY、TOCSY和NOESY谱,识别出HWTX-XVIIb1全部31个氨基酸残基自旋体系;并利用NOESY谱中的dαN、dβN、dNN和dαδ完成了序列专一的谱峰归属,从而确认了HWTX-XVIIb1的主链质子和几乎侧链质子的化学位移。分析序列中的NOE、3JN虎纹捕鸟蛛毒素-XVIIb1论文,钙离子通道论文,溶液结构论文,核磁共振论文,
摘要：蜘蛛毒素是蜘蛛用来防御和捕食猎物的最基本武器。蜘蛛毒素中富含各种可不同电压门控离子通道的毒素,这些毒素对不同离子通道的选择性和高亲和性为人们研究离子通道的结构与功能了很好的研究手段怎么写论文。对这类毒素结构与功能的研究不仅有助于人们了解毒素与离子通道作用机制,也有助于人们了解离子通道本身的结构基础,并在此基础上从蜘蛛毒素中寻找和开发的药用分子和工具试剂论文参考文献格式。虎纹捕鸟蛛[ Selenocoia huwena Wang = Ornithoctonus huwena(Wang)]是近年在我国广西宁明发现的蜘蛛新种,属捕鸟蛛科(Theraphosidae)大学生论文查重。因该种蜘蛛体型大,产毒量高且易于饲养,因此一种很好的系统研究蜘蛛毒素的。虎纹捕鸟蛛毒素-XVIIb1 (HWTX-XVIIb1)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中提取、表达、分离纯化的一种新型多肽,它由31个氨基酸残基组成,含8个半胱氨酸。对该毒素了全面的电生理检测,发现HWTX-XVIIb1对大鼠DRG细胞的钠离子和钾离子通道影响,而对钙离子通道有较强的抑制活性。为了了解HWTX-XVIIb1结构与功能的关系,利用二维1H核磁共振(NMR)技术研究了它的空间结构,分析水和重水中的DQF-COSY、TOCSY和NOESY谱,识别出HWTX-XVIIb1全部31个氨基酸残基自旋体系;并利用NOESY谱中的dαN、dβN、dNN和dαδ完成了序列专一的谱峰归属,从而确认了HWTX-XVIIb1的主链质子和几乎侧链质子的化学位移毕业论文格式要求。分析序列中的NOE、3JNH-CαH偶合常数以及H/D质子交换等了一系列约束条件,用CNS软件中的模拟退火方法计算,一组收敛性较好的结构,从中挑选了NOE约束违反小于0.2 ?,二面角约束违反小于2°的20个结构代表HWTX-XVIIb1的空间结构毕业论文的格式。空间结构研究,HWTX-XVIIb1结构中包含一段三链反平行的β-折叠(Met8-Cys9,Cys19-Cys21和Cys28-Cys30)及4个β-转角(Lys4-Glu7,Cys9-Ile12,Cys14-Gly17和Gly24-Arg27),这些与已经探明结构的其它蜘蛛毒素的结构特点基本相同,为研究钙离子通道与毒素的作用奠定了较为坚实的基础毕业论文摘要。关键词：虎纹捕鸟蛛毒素-XVIIb1论文钙离子通道论文溶液结构论文核磁共振论文
中文摘要4-5
Abstract5-10
章 虎纹捕鸟蛛毒素研究综述10-19

1.1 虎纹捕鸟蛛毒素的组成11-12

1.2 虎纹捕鸟蛛多肽类毒素的结构12-15

1.3 虎纹捕鸟蛛毒素的药理学研究15-17

1.3.1 作用于电压门控钙，钠离子通道的虎纹捕鸟蛛毒素16-17

1.3.1 作用于电压门控Ca~(2+)离子通道的虎纹捕鸟蛛毒素16

1.3.2 作用于电压门控Na~+离子通道的虎纹捕鸟蛛毒素16-17

1.3.2 具有其它生物学活性的虎纹捕鸟蛛毒素17

1.4 虎纹捕鸟蛛多肽类毒素分子结构和功能的关系17-19

章核磁共振技术研究蛋白质结构综述19-42

2.1 蛋白质结构研究方法概述20-22

2.

1.1 X-射线晶体衍射方法20

2.

1.2 多维核磁共振技术20-22

2.

1.3 电子显微学方法22

2.2 核磁共振技术研究蛋白质结构的方法22-40

2.1 核磁共振研究蛋白质结构的主要特性参数23-29

2.2.

1.1 化学位移23-25

2.2.

1.2 J-偶合常数25-26

2.2.

1.3 弛豫时间26-27

2.2.

1.4 核Overhauser 效应27-29

2.2.2 生物大分子研究中的多维核磁实验29-31

2.3 基本的二维核磁共振实验31-35

2.3.1 同核二维谱实验脉冲序列32-34

2.3.2 异核二维谱实验脉冲序列34-35

2.4 共振峰指认策略35-37

2.5 由核磁共振数据构建蛋白质溶液三维结构模型37-40

2.3 核磁共振技术研究蛋白质溶液结构的进展与前景40-42

章虎纹捕鸟蛛毒素HWTX-XVIIb1的结构与功能研究42-79

3.1 前言42

3.2 与方法42-47

3.

2.1 、试剂和仪器42-43

3.

2.2 引物设计及PCR 扩增编码成熟肽的基因43-44

3.

2.3 基因的克隆44

3.

2.4 多肽的表达、纯化、脱盐和质谱鉴定44

3.2.5 HWTX-XVIIb1 对大鼠背根神经节神经元电压门控钙离子通道的影响44-46
3.

2.6 HWTX-XVIIb1的空间结构研究46-47

3.

2.6.1 NMR 实验样品的准备46

3.

2.6.2 NMR 实验数据的采集和处理46-47

3.3 结果47-75

3.1 HWTX-XVIIb1 cDNA 序列及编码的氨基酸序列47

3.2 PCR、表达及分离纯化47-49

3.3 HWTX-XVIIb1 的质谱鉴定49-50

3.4 HWTX-XVIIb1 的生物学活性50-51

3.5 HWTX-XVIIb1 的空间结构51-68

3.5.1 HWTX-XVIIb1 的氢谱谱峰的完全归属51-53

3.5.2 HWTX-XVIIb1 自旋体系的识别53-55

3.5.3 HWTX-XVIIb1 序列专一性归属55-56

3.5.4 结构确定前的二级结构单元分析56-60

3.5.5 结构计算约束条件60-63

3.5.5.1 距离约束60-61

3.5.5.2 二硫键约束61-62

3.5.5.3 二面角约束62-63

3.5.6 结构计算63-64

3.5.7 结构分析与评价64-68

3.6 结构描述68-75

3.6.1 主链折叠和二级结构68-72

3.6.2 氢键网络72-73

3.6.3 二硫键73

3.6.4 HWTX-XVIIb1 的空间表面结构73-75

3.4 讨论75-78

3.4.1 HWTX-X论文片段—VIIb1空间结构的计算753.4.2HWTX-XVIIb1结构与功能的关系75-773.4.3NMR研究HWTX-XVIIb1溶液结构中的问题77-783.5及研究设想78-79结语79-80参考文献80-89附录89-99缩写表99-100致谢100-102上一页12虎纹捕鸟蛛毒素-XVIIb1论文,钙离子通道论文,溶液结构论文,核磁共振论文,
VIIb1 空间结构的计算75

3.4.2 HWTX-XVIIb1 结构与功能的关系75-77

3.4.3 NMR 研究HWTX-XVIIb1 溶液结构中的问题77-78

3.5 及研究设想78-79

结语79-80
参考文献80-89
附录89-99
缩写表99-100
致谢100-102