试述膜片甲苯噻嗪对超极化激活环腺苷酸门控阳离子通道影响实验学术

论文导读：取细胞表面光滑,贴壁良好,圆形的细胞进行电生理实验。首先按预先设定的刺激案例来干预细胞,诱导出Ih电流,然后分别给予12.5um/L甲苯噻嗪,25um/L甲苯噻嗪,50um/L甲苯噻嗪,100um/L甲苯噻嗪,记录甲苯噻嗪对HCN1和HCN2离子通道动力学的影响,得到I-V曲线,通道的激活曲线,统计甲苯噻嗪对HCN1离子通道和HCN2离子通道电流抑制幅度；并
摘要：目的：建立膜片嵌实验中适于记录超极化激活环核苷酸门控(hyperpolarization-activat ed cycpc nucleotide-gated, HCN)阳离子通道产生的超极化激活电流(hyperpolarizatio n-activated currents,Ih)的策略,重组HCN1基因PCE-HCN1质粒DNA,重组HCN2基因PCE-HCN2质粒DNA经瞬时转染经培养的HEK293细胞,HEK293细胞表达HCN离子通道,探讨甲苯噻嗪对HCN1离子通道,HCN2离子通道的影响。策略：重组HCNl质粒DNA或重组的HCN2质粒DNA经脂质体瞬时转染哺乳动物细胞构建稳定表达HCN1或HCN2离子通道的细胞模型,选取细胞表面光滑,贴壁良好,圆形的细胞进行电生理实验。首先按预先设定的刺激案例来干预细胞,诱导出Ih电流,然后分别给予12.5um/L甲苯噻嗪,25um/L甲苯噻嗪,50um/L甲苯噻嗪,100um/L甲苯噻嗪,记录甲苯噻嗪对HCN1和HCN2离子通道动力学的影响,得到I-V曲线,通道的激活曲线,统计甲苯噻嗪对HCN1离子通道和HCN2离子通道电流抑制幅度；并计算出甲苯噻嗪对HCN1V1/2和HCN2V1/2(V1/2是离子通道激活50%时的膜电位)电压的偏移；计算出不同溶度的甲苯噻嗪在生理电压下(-90mv)对HCN1和HCN2通道电流的抑制率,同时比较相同浓度下甲苯噻嗪对HCN离子通道不同亚型HCN1与HCN2离子通道的敏感性。结果：经瞬时转染HEK293细胞能产生稳定表达HCN1或HCN2离子通道的细胞模型,细胞质量好,形态结构规则,有60个细胞成功的记录到Ih电流并最终完成全部实验。甲苯噻嗪在不同的浓度下减小了HCN1的电流,使得HCN1的I-V曲线上移,甲苯噻嗪在12.5um/1到100um/L的临床浓度范围内,使得HCN1V1/2以-83.31±2.74mv向-99.83±5.08mv偏移(n=6,p0.05),我们发现在正常生理条件电压下(-90mv),甲苯噻嗪在12.5um/1到100um/L的临床浓度范围内抑制了HCN1电流幅度分别为9%±0.06到42%±0.16(n=6,p0.05)。有趣的是,甲苯噻嗪不但抑制了HCN1通道而且对HCN2离子通道也很敏感,使得HCN2的I-V曲线上移,使得HCN2vl/2以-98.55±3.93mv向-110.65±3.78mv偏移(n=6,p0.05),同时甲苯噻嗪在正常生理条件电压下(-90mv)12.5um/1到100um/L的临床浓度范围内也抑制了HCN2电流幅度分别为27%±0.05到70%±0.11(n=6,p0.05)。甲苯噻嗪在正常生理条件电压下(-90mv)与相同的浓度范围内分别作用HCN离子通道不同亚基HCN1与HCN2离子通道,发现甲苯噻嗪对HCN2离子通道的作用更敏感。结论：瞬时转染的HEK293细胞能构建稳定表达的HCN离子通道,转染后的细胞存活率高,细胞膜完整,细胞表面光滑,能够用于记录HCN1离子通道与HCN2离子通道产生的Ih电流。甲苯噻嗪能显著的抑制HCN1离子通道和HCN2离子通道,提示其可能是甲苯噻嗪的麻醉作用机制之一。随着甲苯噻嗪的浓度增加,其对HCN离子通道产生的Ih电流抑制逐渐增大,由此甲苯噻嗪对HCN离子通道的抑制作用呈现剂量依赖性。关键词：HCN论文甲苯噻嗪论文膜片嵌论文I_h电流论文
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中文摘要6-8
Abstract8-10
前言10-12
材料与策略12-15
结果15-24
讨论24-26
结论26-27
参考文献27-29
综述：超极化激活的环腺苷酸门控阳离子通道分子机制与临床探讨进展29-41
参考文献37-41
致谢41-42
作者介绍42