简析失重模拟失重比较目鱼肌凋亡影响及药物干预

论文导读：62.1实验分组152.2实验策略15-252.2.1尾吊大鼠模拟失重模型及药物制备152.2.2标本制备15-162.2.3组织切片制备162.2.4组织切片化学染色16-172.2.5Westernblot检测17-192.2.6RT-PCR检测19-232.2.7Caspase3活性检测23-242.2.8TUNEL检测24-252.312下一页
摘要：背景与目的：失重条件下为适应环境,人和动物生理状态会发生一系列的变化,其中以骨骼肌萎缩最为显著。目前其发生的机制仍不明确且缺少特效的干预措施。由此,探讨肌肉萎缩的发生机制对肌萎缩的防治具有重要的作用。PI3K/T通路和MAPK通路是膜受体感受外界刺激后向胞内传导信号的主要途径,也是调节细胞分化、增殖、衰老和凋亡的关键信号途径。探讨表明上面陈述的信号途径可能参与失重状态下骨骼肌萎缩的发生机制。本探讨选用血府逐瘀胶囊和丁苯酞两种药物,以尾部悬吊为模拟失重模型,对模拟失重状态下骨骼肌的形态学及PI3K/T通路和MAPK通路相关蛋白和基因转录水平变化进行探讨,以期寻找有效的失重状态下骨骼肌萎缩的干预药物。实验策略：建立尾部悬吊大鼠模拟失重模型,40只同源雌性SD大鼠(10周龄,200-250g)随机分为对照组(CON),尾吊组(SUS),尾吊+血府逐瘀胶囊组(XFZY),尾吊+丁苯酞组(NBP)。尾吊30天,对照组及尾吊组单纯给予溶媒,血府逐瘀胶囊组剂量为25mg/kg.d,丁苯酞组剂量为20mg/kg.d,各组均每日上午八点灌胃一次。(1)通过测量比目鱼肌湿重体质量比,横截面积,mATP酶染色,观察形态学变化。(2)运用Western-blot及RT-PCR检测技术浅析PI3K/T及MAPK通路中ERK. JNK通路相关蛋白及下游分子BAX、Cyto-c蛋白及转录水平变化。(3)分别利用紫外分光光度计和TUNEL策略检测caspase-3活性和比目鱼肌纤维细胞凋亡程度。实验结果：40只大鼠全部进入结果浅析,无脱失。(1)与对照组相比,尾吊组比目鱼肌湿重体质量比下降了56.39%。血府逐瘀组和丁苯酞组平均湿重体质量比分别较单纯尾吊组增加了14.49%和13.85%。血府逐瘀胶囊组与尾吊组差别达统计学显著差别。尾吊30天后,与对照组相比,其余三组Ⅰ型纤维比例显著减少,而药物干预后并未改善Ⅰ型纤维向Ⅱ纤维的转换。(2)尾吊30天显著抑制了PI3K/T信号通路中PI3K、P-T、GRP78蛋白及转录水平表达,增强了磷酸化GSK-3β蛋白表达。血府逐瘀胶囊组干预后提升了PI3K、P-T、GRP78蛋白及转录水平表达,降低了磷酸化GSK-3β蛋白表达,其中对关键分子P-T的表达影响最大,与单纯尾吊组相比有统计学显著差别。丁苯酞组干预后,也提升了P-T、GRP78蛋白及转录水平表达,降低了磷酸化GSK-3β蛋白表达,但丁苯酞对GRP78的蛋白及转录水平影响最大。(3)尾吊30天,抑制了ERK细胞保护通路中P-ERK的蛋白表达,同时增强了促凋亡的JNK通路中P-JNK蛋白表达,两种药物干预后可以两方面检测到保护作用,并且血府逐瘀胶囊保护作用优于丁苯酞组。(4)尾吊30天比目鱼肌caspase3酶活性显著增强,肌纤维细胞凋亡增加,药物干预后caspase3酶活性较尾吊组显著降低,凋亡细胞减少,但仍高于对照组。结论：(1)尾吊模拟失重可通过抑制PI3K/T、ERK信号通路及推动JNK通路相关分子表达水平,增强caspase-3活性,推动肌纤维细胞凋亡,导致比目鱼肌萎缩。(2)血府逐瘀胶囊和丁苯酞两种药物,可能通过PI3K/T通路和MAPK通路对失重性肌萎缩起到保护作用。关键词：失重论文肌萎缩论文血府逐瘀胶囊论文丁苯酞论文PI3K/T论文MAPK论文
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中文摘要7-9
Abstract9-11
前言11-12

一、实验材料12-15

1.1 实验动物12-13

1.2 主要试剂和药物13

1.3 仪器设备13-15

二、实验策略15-26

2.1 实验分组15

2.2 实验策略15-25

2.1 尾吊大鼠模拟失重模型及药物制备15

2.2 标本制备15-16

2.3 组织切片制备16

2.4 组织切片化学染色16-17

2.5 Western blot检测17-19

2.6 RT-PCR检测19-23

2.7 Caspase 3活性检测23-24

2.8 TUNEL检测24-25

2.3论文导读：学结果26-291、模拟失重对大鼠比目鱼肌湿重影响及药物干预效果26-272、模拟失重对大鼠比目鱼肌组织横截面积的影响及药物干预效果27-283、模拟失重对大鼠比目鱼肌纤维类型的影响及药物干预效果28-29(二)Westernblot检测结果29-381、模拟失重对大鼠比目鱼肌PI3K/T信号通路的影响及药物干预效果29-312、尾吊模拟失重对ERK/
统计浅析25-26

三、实验结果26-43

(一) 形态学结果26-29

1、模拟失重对大鼠比目鱼肌湿重影响及药物干预效果26-27

2、模拟失重对大鼠比目鱼肌组织横截面积的影响及药物干预效果27-28

3、模拟失重对大鼠比目鱼肌纤维类型的影响及药物干预效果28-29

(二) Western blot检测结果29-38

1、模拟失重对大鼠比目鱼肌PI3K/T信号通路的影响及药物干预效果29-31

2、尾吊模拟失重对ERK/P-ERK及JNK/P-JNK信号通路的影响及药物干预作用31-33

3、尾吊模拟失重对GRP78、GSK-3β的影响及药物干预作用33-35

4、尾吊模拟失重对凋亡通路BAX的影响及药物干预作用35-36

5、尾吊模拟失重对胞浆细胞色素C的影响及药物干预作用36-38

(三) mRNA水平RT-PCR结果38-41

(四) caspase-3活性检测结果41-42

(五) TUNEL检测结果42-43

四、讨论43-54

4.1 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌形态学变化的影响43-46

4.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌凋亡历程的影响及药物干预作用46-48

4.

2.1 尾吊模拟失重下大鼠比目鱼肌TUNEL检测结果及药物干预46-47

4.

2.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌caspase-3活性的影响47-48

4.3 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌凋亡机制的影响及药物干预作用48-53
4.3.1 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌PI3K/T通路的影响及药物干预作用48-51
4.

3.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌MAPK通路的影响及药物干预作用51-53

4.4 小结与展望53-54
参考文献54-59
文献综述59-69
参考文献66-69
致谢69-70
个人介绍70