简论补体大鼠骨髓干细胞种植于豚鼠脱细胞动脉构建组织工程血管免疫原性

论文导读：
摘要：背景：临床治疗中,良好的血管移植材料一直是影响血管移植手术治疗效果的重要因素,亦是相关探讨的热点内容。组织工程血管(tissue-engineering blood vessels)的构建策略是选择合适的种子细胞如骨髓干细胞(bone marrow stem cell, BMSC)种植于管型支架上,以而构建成具有细胞生长的人工血管,运用于血管移植,具有较大进展潜力。但组织工程血管因选择的血管来源或种子细胞不同,其免疫原性亦有较大差别,影响手术治疗效果。目的：将大鼠骨髓干细胞种植于脱细胞处理后的豚鼠血管上,构建简单的组织工程血管,包埋入大鼠皮下。术后定期抽取大鼠血液并取出大鼠皮下移植物,检测抗豚鼠血管IgG、补体C3血清浓度和移植物表面沉积情况,探讨大鼠骨髓干细胞种植于豚鼠脱细胞动脉支架策略构建组织工程血管的免疫原性。策略：利用密度梯度离心法结合贴壁筛选法获取大鼠骨髓干细胞,进行体外培养。鉴定为骨髓干细胞后,种植于酶-去污剂与辐照结合策略进行脱细胞处理的豚鼠血管上,构建简单的组织工程血管。选取健康纯系雄性SD大鼠200只,体重约200-250g,随机分为4组,皮下包埋不同移植物：骨髓干细胞种植组(A组,种植大鼠骨髓干细胞的脱细胞豚鼠动脉,n=50)、单纯脱细胞组(B组,单纯脱细胞的豚鼠动脉,n=50)、新鲜异种血管组(C组,新鲜豚鼠动脉,n=50)、假手术组(D组,不包埋任何标本,n=50)。术后第3d、7d、15d、30d、60d每组处死10只大鼠,获取大鼠血清并取出移植物。HE染色观察豚鼠血管脱细胞处理效果及移植物表面炎症反应强度,ELISA策略检测各组大鼠血清中抗豚鼠血管IgG和补体C3浓度,免疫组化策略检测移植物表面抗豚鼠血管IgG和补体C3沉积情况,探讨其免疫原性。结果：1、HE染色：HE染色显示脱细胞处理的豚鼠血管为白色半透明,质地柔软,未见细胞及细胞碎片成分,纤维网结构基本完整。新鲜豚鼠血管中可见许多蓝色深染的细胞核及正常豚鼠血管结构,未见显著空白区域。每组移植物中均可见显著炎症细胞浸润,A组及B组的炎症浸润程度显著低于C组。C组中的正常豚鼠细胞逐渐较少,至术后15d完全消失。2、ELISA法检测血清中抗豚鼠血管IgG：A组、B组、C组大鼠血清中抗豚鼠血管IgG浓度升高。术后3d各组之间无统计学差别(A组102.59±8.87,B组100.04±8.48,C组103.49±12.8,D组101.09±13.79)μg/ml(P0.05)。术后7d、15d、30d A组(116.63±9.72,123.79±9.12,110.76±12.44)μg/ml、B组(112.77±9.63,122.54±17.15,116.23±16.49)μg/ml高于D组(98.41±16.49,102.54±10.61,97.73±9.71)μg/ml(P0.05),术后60dA组(108.47±12.70)μg/ml、B组(105.44±11.59)μg/ml与D组(100.55±16.10)μg/ml无统计学差别(P0.05)。C组于术后7d、15d、30d、60d(121.14±6.75,138.03±17.'70,141.09±18.93,133.28±16.13)uμg/ml高于D组(P0.05),于术后15d、30d、60d高于A组、B组(P0.05)。术后各时间点A组与B组无统计学差别(P0.05)。3、ELISA法检测血清中补体C3：A组、B组、C组大鼠血清中补体C3浓度减低。术后3d各组无统计学差别(A组158.57±21.98,B组154.47±18.27,C组156.88±16.67, D组157.89±13.57)(P0.05)。术后7d、15d、30d、60d C组(130.38±16.85,106.58±11.62,105.25±10.71,113.84±11.05)μ g/ml低于A组(152.61±21.84,130.94±16.55,127.71±15.10,134.79±16.20)μ g/ml、B组(153.10±15.81,135.24±24.56,125.18±11.88,137.25±21.17)μg/ml、D组(154.45±19.69,161.74±23.78,153.33±24.41,论文导读：.0579,0.2545±0.0466)高于A组(0.1633±0.0388,0.1787±0.0532,0.1692±0.0406,0.1633±0.0282)、B组(0.1555±0.0348,0.1740±0.0364,0.1698±0.0330,0.1621±0.0349)(P0.05)。术后各时间点A组较B组均无统计学差别(P0.05)。5、免疫组化法检测移植物表面补体C3沉积：结果显示移植物表面有显著的大鼠补体C3沉积。术后3d、7d、15d各组平均
156.90±22.20)u g/ml(P0.05)。术后15d、30d、60dA组、B组低于D组(P0.05)。术后各时间点A组与B组无统计学差别(P0.05)。4、免疫组化法检测移植物表面抗豚鼠血管IgG沉积：各组移植物表面有显著的抗豚鼠血管IgG沉积。术后3d各组平均光密度(erage optical, AO)无统计学差别(A组0.1506±0.0394,B组0.1632±0.0340,C组0.1668±0.0510)(P0.05)。术后7d、15d、30d、60d C组平均光密度(0.2157±0.0452,0.2563±0.0442,0.2752±0.0579,0.2545±0.0466)高于A组(0.1633±0.0388,0.1787±0.0532,0.1692±0.0406,0.1633±0.0282)、B组(0.1555±0.0348,0.1740±0.0364,0.1698±0.0330,0.1621±0.0349)(P0.05)。术后各时间点A组较B组均无统计学差别(P0.05)。5、免疫组化法检测移植物表面补体C3沉积：结果显示移植物表面有显著的大鼠补体C3沉积。术后3d、7d、15d各组平均光密度无统计学差别(A组0.1304±0.0313,0.1552±0.0425,0.1612±0.0358；B组0.1316±0.0254,0.1535±0.0396,0.1603±0.0591；C组0.1671±0.0422,0.1766±0.0493,0.2401±0.0706)(P0.05)。术后30d、60d C组平均光密度(0.2674±0.0788,0.2044±0.0494)高于A组(0.1597±0.0439,0.1382±0.0299)、B组(0.1517±0.0404,0.1407±0.0288)(P0.05)。术后各时间点A组较B组无统计学差别∽0.05)。结论：1、实验组大鼠在进行皮下包埋手术之后,血清中抗豚鼠血管IgG浓度及补钵C3浓度均有显著变化,且在移植物表面有显著的抗豚鼠血管IgG和补体C3沉积。2、骨髓干细胞种植组及单纯脱细胞组标本的免疫排斥反应强度显著低于新鲜异种血管组。3、同种骨髓干细胞种植于异种脱细胞血管支架策略构建的组织工程血管,具有较低的免疫原性,可作为较好的血管移植材料构建策略。关键词：骨髓干细胞论文组织工程血管论文免疫原性论文IgG论文补体C3论文
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Abstract9-13
前言13-15

1. 材料与策略15-25

1.1 探讨对象15

1.1 动物选择15

1.2 分组15

1.2 实验模型建立15-18

1.2.1 大鼠骨髓干细胞获取15

1.2.2 大鼠骨髓干细胞培养15-16

1.2.3 大鼠骨髓干细胞鉴定16-17

1.2.4 豚鼠血管处理及抗原制备17

1.2.5 骨髓干细胞种植17-18

1.2.6 模型制作与标本采集18

1.3 主要仪器及试剂18-20

1.3.1 主要仪器设备18-19

1.3.2 主要试剂19-20

1.3.3 主要缓冲液与工作液20

1.4 探讨策略20-24

1.4.1 石蜡切片制作20

1.4.2 观察病理学变化20-21

1.4.3 ELISA法检测血清抗豚鼠血管IgG、补体C3浓度21-23

1.4.4 免疫组织化学检测及图像浅析23-24

1.5 统计学浅析24-25

2. 结果25-30

2.1 HE染色镜下观察25

2.2 ELISA法检测血清中抗豚鼠血管IgG浓度25-26

2.3 ELISA法检测血清中大鼠补体C3浓度26-27

2.4 移植物表面抗豚鼠血管IgG沉积的免疫组化检测及图像浅析27-28

2.5 移植物表面大鼠补体C3沉积的免疫组化检测及图像浅析28-30

3. 讨论30-41

3.1 组织工程血管种子细胞的选择和培养30

3.2 组织工程血管支架材料的选择30-32

3.3 脱细胞策略32-33

3.4 细胞种植策略33

3.5 动物模型建立策略33-35

3.6 自制抗原进行ELISA检测35-36

3.7 免疫组化结果的图像浅析策略3论文导读：63.8IgG在免疫原性探讨中的评价36-383.9补体C3在免疫原性探讨中的评价38-414.结论41-42附图42-49参考文献49-52综述52-61参考文献58-61附录61-62攻读学位期间发表文章情况62-63致谢63-64个人简历64上一页123
6

3.8 IgG在免疫原性探讨中的评价36-38

3.9 补体C3在免疫原性探讨中的评价38-41

4. 结论41-42

附图42-49
参考文献49-52
综述52-61
参考文献58-61
附录61-62
攻读学位期间发表文章情况62-63
致谢63-64
个人简历64