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分析支气管哮喘STAT1基因沉默对哮喘小鼠IFN-γ、IL-5、ICAM-1表达影响

最后更新时间:2024-03-23 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:6792 浏览:16755
论文导读:
摘要:目的:转导子与转录活化子1(signal transducer and activator oftranscription1STAT1)是连接各种细胞膜受体和效应器之间的信号转导的主要蛋白质[1],在哮喘细胞因子网络与免疫调节中起着至关重要的作用~([2])。RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)是近年来进展起来的基因敲除探讨中的一种新技术,已广泛运用于基因功能探讨、疾病治疗及药物开发等领域。本实验运用RNA干扰技术沉默STAT1基因,探讨其对支气管哮喘小鼠STAT1蛋白与INF-γ、IL-5、ICAM-1表达的影响。为哮喘的基因治疗提供新思路。策略:32只4周龄BALB/c雌性小鼠随机分为4组;分别为正常组、PBS组、空质粒组(随机片段RNA)和siRNA组(pG-2)。PBS组、空质粒组和siRNA组分别于第1天和第14天腹腔注射新鲜配制的OVA/Al(OH)_3混悬液(100ugOVA+1mg Al(OH)_3干粉加入1mlPBS液配制而成),使BALB/c小鼠致敏;而正常组用1mL的生理盐水腹腔注射。在第26-29天siRNA组用浓缩的siRNA40ul(pG-2,100ug)滴鼻;PBS组用40ulPBS液滴鼻;空质粒组用随机片段RNA40ul(pG-HK,100ug)滴鼻;正常组用生理盐水40ul滴鼻。在第28-30天正常组用生理盐水50ul滴鼻;PBS组、空质粒组及siRNA组用OVA溶液50ul(50ug)滴鼻激发哮喘,在末次滴鼻后12小时引颈处死小鼠。留取肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数;留取BALF上清液,运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA),检测其中的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素5(IL-5)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达水平。肺组织切片行HE染色及免疫组织化学染色观察STAT1蛋白的表达水平。采取SPSS17.0软件进行单因素方差浅析和随机区组设计的方差浅析,多个样本均数之间的多重比较用LSD法,以P<0.05表示有统计学作用。同时浅析BALF中嗜酸性粒细胞(Eos)与IFN-γ,IL-5,ICAM-1的相关性。结果:(1)正常组小鼠肺组织切片HE染色可见:支气管内壁光滑,肺泡间隔菲薄,肺泡腔内未见炎性渗出物。空质粒组及PBS组哮喘小鼠肺组织病理切片HE染色可观察到:支气管粘膜水肿,支气管及血管周围有大量以Eos为主的炎症细胞的浸润;肺间质及肺泡腔内亦可见Eos的浸润;细、小支气管内可见黏液栓。而siRNA组炎症细胞的浸润及黏液的分泌较空质粒组与PBS组比较显著减轻。(2)STAT1蛋白主要表达于哮喘小鼠的气道上皮细胞。(3)siRNA组STAT1蛋白表达水平显著低于PBS组及空质粒组,但高于正常组;IL-5、ICAM-1的表达水平亦呈类似转变,而IFN-γ则呈相反的转变。(4) siRNA组肺泡灌洗液中白细胞数,嗜酸性粒细胞(EOS)以及淋巴细胞(LC)数量较PBS组及空质粒组减少;而siRNA组与正常组比较白细胞数,嗜酸性粒细胞(Eos)以及淋巴细胞(LC)数量增高。它们之间的差别都有统计学作用(P<0.01)。结论:1.哮喘小鼠的动物模型的构建成功。2.siRNA通过滴鼻的方式转染到哮喘小鼠的气道上皮细胞。3.siRNA沉默STAT1基因抑制哮喘小鼠气道上皮细胞STAT1蛋白的表达。4.siRNA沉默STAT1基因,抑制白细胞介素5(IL-5)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达,而γ干扰素(IFN-γ)表达水平增高。5. siRNA沉默STAT1,抑制哮喘小鼠的气道炎症。关键词:支气管哮喘论文STAT1论文RNA干扰(RNAi)论文
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Abstract7-10
前言10-14
材料与策略14-23
结果23-30
讨论30-38
结论38-39
参考文献39-44
英汉缩略词对照表44-46
致谢46-47
RNA 干扰技术在支气管哮喘探讨中的运用及进展(综述)47-58
参考文献55-58