阐述淹溺丹参酮ⅡA大鼠海水淹溺性肺损伤作用及其机制

论文导读：较空白对照组凋亡相关因子Caspase-3增加显著,而凋亡抑制因子Bcl-2则显著降低,并且海水注入导致Akt和ERK1/2的活性降低。相比较海水组,丹参酮IIA处理组凋亡细胞的数量显著减少,增加了抗凋亡因子Bcl-2的含量、抑制了肺组织中Caspase-3蛋白含量的上升,同时上调了Akt和ERK1/2的活性。4结论细胞凋亡在海水淹123下一页
摘要：海水淹溺是事故意外死亡的一个重要理由。除了因窒息死亡外,其致死的理由主要为急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合症(Acute respiratory distress syndrome,ARDS),是各种理由导致肺部炎症加重和肺部通透性增加的结果。近年来许多探讨显示细胞凋亡与肺损伤的发生之间有着密切的联系,肺上皮细胞和微血管内皮细胞凋亡的增加导致了肺泡血管-上皮屏障通透性转变,直接引起了肺损伤的发生。丹参酮IIA(Tanshinone IIA,TIIA)是中药丹参的一种主要活性成分,目前探讨表明丹参酮IIA具有抗炎和抗氧化等作用,在抗感染、抗动脉粥样硬化、改善微循环等方面有着较好的疗效和广泛的运用。1目的本实验探讨了细胞凋亡在海水淹溺性急性肺损伤发病机制中的作用,探讨丹参酮IIA对于海水淹溺大鼠模型中肺损伤的治疗作用以及对于肺组织细胞凋亡的影响,探讨丹参酮IIA是否通过调控Akt和ERK路径来抑制细胞凋亡以而达到减轻肺损伤的作用。2策略实验动物分为三组:(1)空白对照组:不给于海水注入及丹参酮IIA干预,余处理同其他组;(2)海水组:动物麻醉后,行颈正中切口,暴露气管,用注射器刺入气管,匀速在4分钟内注入对应量海水(4 mL/kg);(3)丹参酮IIA干预组:各组实验动物注入海水10分钟后,于腹腔内注入丹参酮IIA (50 mg/kg)。各组动物在各实验截点放血处死,取右中肺组织行肺血管伊文思蓝通透性检测,右下肺组织切片行组织病理学和TUNEL检测,左肺组织行干湿比检测,右上肺组织匀浆行ERK1/2、Akt、Caspase-3、Bcl-2的Western blotting检测。3结果丹参酮IIA可以显著改善海水淹溺后导致的大鼠肺病理学转变,减轻PaO2的下降,缓解肺水肿、肺血管的渗漏以及BALF中细胞的渗出程度。如TUNEL结果所示,气管内注入海水可导致大鼠肺组织凋亡细胞数量的增加,同时,海水组较空白对照组凋亡相关因子Caspase-3增加显著,而凋亡抑制因子Bcl-2则显著降低,并且海水注入导致Akt和ERK1/2的活性降低。相比较海水组,丹参酮IIA处理组凋亡细胞的数量显著减少,增加了抗凋亡因子Bcl-2的含量、抑制了肺组织中Caspase-3蛋白含量的上升,同时上调了Akt和ERK1/2的活性。4结论细胞凋亡在海水淹论文导读：,事故现场因大量海水快速进入肺内、阻塞呼吸道引起喉头、气管痉挛可导致急性窒息死亡,后期病程进展中肺水肿为一个突出的临床体现,并可进一步引起ALI和ARDS,因而,在吸收肺内海水的同时减少肺内液体的形成、及时有效的缓解肺水肿的发生显得尤为重要。AQPs(Aquaporins)是一类可调节进出细胞膜水分子的蛋白质通道,其中在肺部表达
溺性肺损伤的发病机制中有着重要的作用,而丹参酮IIA可以改善肺损伤的病理生理损害以及减轻肺损伤大鼠肺组织水肿和细胞凋亡程度,这种作用可能部分是通过调节Akt和ERK1/2信号传导通路以而减少肺组织细胞凋亡来实现的。海水淹溺后,事故现场因大量海水快速进入肺内、阻塞呼吸道引起喉头、气管痉挛可导致急性窒息死亡,后期病程进展中肺水肿为一个突出的临床体现,并可进一步引起ALI和ARDS,因而,在吸收肺内海水的同时减少肺内液体的形成、及时有效的缓解肺水肿的发生显得尤为重要。AQPs(Aquaporins)是一类可调节进出细胞膜水分子的蛋白质通道,其中在肺部表达的AQP1、AQP5在肺泡毛细血管间水转运中发挥着重要作用。丹参酮IIA作为中药丹参的一种含量最高的有效成分,可以通过下调生长因子和血管活性物质、抑制血小板聚集、抑制交感神经节细胞等机制发挥松弛平滑肌、改善微循环等作用。1目的本实验通过建立大鼠海水淹溺性肺损伤的模型,探讨AQP1、AQP5在气管内注入海水后肺组织内含量的转变,同时探讨丹参酮IIA对于海水淹溺型肺损伤和对AQP1、AQP5的作用,了解其是否通过调控AQP1、AQP5的表达来减轻海水淹溺性肺水肿以而达到缓解肺损伤的发生。2实验策略2.1动物实验:动物实验分组及处理同实验一。各组动物均在实验截点放血处死,取右中肺组织行肺血管伊文思蓝通透性检测,右下肺组织切片行组织病理学及AQP1、AQP5蛋白免疫组化检测,左肺组织行干湿比检测,右上肺组织匀浆行AQP1、AQP5 Western blotting及RT-PCR分子生物学检测。2.2细胞试验:A549细胞经胰酶消化并计数后接种于培养皿中,孵育24小时待所有细胞贴壁后进行实验分组:空白对照组,海水组(海水浓度25%),25ug/ml TIIA组+海水组,丹参酮IIA处理组在加入海水的同时加入对应剂量的丹参酮IIA,用培养液补足液体总量为8ml。3实验结果大体实验中,通过改善血气的指标和肺组织病理学、缓解肺水肿和肺血管渗漏,丹参酮IIA可以减轻海水淹溺性肺损伤。肺组织蛋白的免疫组化、RT-PCR和Western blotting的数据显示海水注入肺部导致了肺组织中AQP1、AQP5的mRNA和蛋白水平的上调,mRNA的转变在4 h达到顶峰,AQP1、AQP5蛋白的转变在4-6h达到顶峰。而丹参酮IIA处理组AQP1、A论文导读：52实验策略55-603结果60-674讨论67-69全文小结69-71参考文献71-79个人简历和探讨成果79-80致谢80上一页123
QP5的表达较海水组显著降低,但仍高于空白对照组。在细胞实验中,同样显示海水浸泡后的A549细胞AQP1、AQP5蛋白表达显著增加,而丹参酮IIA可以调节AQP1和AQP5蛋白的过度表达,以而保护A549细胞正常形态及活性。4结论AQP1、AQP5在大鼠海水淹溺性肺损伤的发生机制中有着重要的作用,两者的过度表达可能参与引起海水淹溺性肺水肿的发生和进展,而丹参酮IIA可以改善海水淹溺性肺损伤以及减轻肺水肿的程度,下调AQP1、AQP5的蛋白和mRNA水平可能是其作用机制之一。关键词：海水淹溺论文丹参酮ⅡA论文肺损伤论文凋亡论文Akt论文ERK1/2论文肺损伤论文海水淹溺论文AQP1论文AQP5论文
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中文摘要7-12
英文摘要12-17
前言17-19
文献回顾19-35

一、海水淹溺性急性肺损伤（SWD-ALI）19-24

二、水通道蛋白与肺损伤24-29

三、细胞凋亡和肺损伤29-32

四、丹参酮 ⅡA 药理作用的探讨进展32-35

实验一 丹参酮ⅡA 对大鼠海水淹溺性肺损伤以及肺组织细胞凋亡的作用及其机制的探讨35-52
1 材料35-37
2 实验策略37-42
3 结果42-49
4 讨论49-52
实验二 丹参酮ⅡA 对海水淹溺性肺损伤大鼠肺组织中AQP1 和 AQP5 表达的作用及其机制52-69
1 材料52-55
2 实验策略55-60
3 结果60-67
4 讨论67-69
全文小结69-71
参考文献71-79
个人简历和探讨成果79-80
致谢80