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简论黄花黄花石蒜与花葶差别片段克隆及其生物信息学设计

最后更新时间:2024-03-14 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:6239 浏览:15721
论文导读:
摘要:黄花石蒜(Lycoris aurea Herb.)内含生物碱、黄酮、多糖、氨基酸及凝集素等化学成分,其中加兰他敏含量比其他石蒜属植物高。加兰他敏具有选择性和可逆性调节烟碱型乙酰胆碱受体及抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)的双重作用,是治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer' s Disease, AD)的首选药物之一。我们通过相关文献探讨发现:七月份黄花石蒜花中加兰他敏的含量花中含量最高,茎(花葶)含量最少,另有文献表明花中部分加兰他敏含量最高,提示黄花石蒜不同部位中生物活性物质加兰他敏合成相关酶基因及加兰他敏生物合成代谢途径有着差别。本课题以此为立题依据,借助mRNA差别显示技术探讨黄花石蒜的与花葶中差别片段,并对其克隆进行生物信息学浅析。本课题主要探讨内容与结果如下:1.以湖南衡山采集的黄花石蒜,经中药鉴定教研室潘清平教授鉴定,所采集的药材为Lycoris aurea Herb.。利用试剂盒、CTAB法及SDS法分别黄花石蒜和花葶中总RNA,筛选出最适提取策略为试剂盒法。2.进行PCR条件优化,确定最佳PCR条件。筛选78对引物,找出和花葶中的差别片段,将差别片段DNA纯化后进行克隆。3.将克隆菌进行阳性检测及测序,所得的44个测序片段进行BLASTX比对,浅析差别片段所编码的蛋白的主要功能,进一步浅析其是否为加兰他敏合成的相关酶。关键词:黄花石蒜论文加兰他敏论文RNA论文克隆论文生物信息学论文
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Abstract8-11
引言11-14
1 材料与试剂14-19

1.1 实验材料14

1.2 试剂及配制14-18

1.3 实验仪器18-19

2 实验策略19-26

2.1 黄花石蒜和花葶总RNA提取19-21

2.

1.1 总RNA提取的预备工作19

2.

1.2 总RNA提取策略的筛选19-20

2.

1.3 黄花石蒜和花葶总RNA的浓度及纯度测定20-21

2.

1.4 总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测21

2.2 cDNA合成21-22

2.3 差别显示PCR扩增22-25

2.3.1 PCR条件的优化22

2.3.2 PCR扩增及引物筛选22-2论文导读:转化子鉴定31-323.5序列比对结果与浅析32-354讨论35-404.1黄花石蒜与花葶总RNA的提取35-364.2黄花石蒜和花葶DD-PCR364.3序列比对结果浅析36-405结论406展望40-41致谢41-42参考文献42-44附录A:版图与说明44-54附录B:综述54-68参考文献65-68攻读学位期间主要探讨成果及发表论文68上一页12
3

2.3.3 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳23-24

2.3.4 二次PCR及差别片段的回收24-25

2.4 回收片段的克隆25-26

2.4.1 感受态细胞的制备25

2.4.2 纯化产物的连接反应25

2.4.3 转化反应25-26

2.4.4 阳性菌落的歸选26

2.4.5 制作甘油管26

2.5 测序26

2.6 克隆片段序列比对浅析26

3 结果与浅析26-35

3.1 黄花石蒜总RNA的提取26-28

3.

1.1 SDS法提取不同部位的总RNA的完整性检验26-27

3.

1.2 不同策略提取的总RNA的完整性检测27-28

3.

1.3 总RNA的纯度和产率28

3.2 黄花石蒜花葶和cDNA合成及PCR检测28-29

3.3 黄花石蒜和花葶差别条带的分离纯化29-31

3.1 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳29-30

3.2 二次PCR产物电泳30

3.3 二次PCR扩增产物凝胶回收电泳30-31

3.4 差别片段的克隆31-32

3.4.1 蓝白斑筛选31

3.4.2 转化子鉴定31-32

3.5 序列比对结果与浅析32-35

4 讨论35-40

4.1 黄花石蒜与花葶总RNA的提取35-36

4.2 黄花石蒜和花葶DD-PCR36

4.3 序列比对结果浅析36-40

5 结论40
6 展望40-41
致谢41-42
参考文献42-44
附录A:版图与说明44-54
附录B:综述54-68
参考文献65-68
攻读学位期间主要探讨成果及发表论文68