阐释胃癌miR—124抑制胃癌MKN—45细胞侵袭与转移网

论文导读：实验的平均值，并进行统计学分析。2　结果细胞划痕实验检测miR-124对胃癌MKN-45细胞运动侵袭能力影响见图1。在6孔板通过转染miR-124　mimics及其对照胃癌MKN-45细胞，过夜细胞贴壁后进行细胞划痕实验，通过测算0　h，24　h与48　h的伤口愈合率，其愈合率=（0　h伤口宽度-实验时间伤口宽度）/（0　h伤口宽度）。结果显示，转染
[摘要]　目的　探讨miR-124对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。　方法　使用脂质体将miR-124　mimics转染MKN-45细胞，以无关序列（ｓｃｒａｍｂｌｅ　ｍｉｍｉｃｓ）作为阴性对照。采用细胞划痕实验观察miR-124过表达对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。　结果　细胞划痕实验显示，转染miR-124　mimics　24　h、48　h后伤口愈合率分别为（０．３１３±０．００５）、（０．３６９±０．０３１），与各自对照组（０．４１３±０．０３５）、（０．８５２±０．０２４）比较能明显减缓MKN-45细胞划痕伤口的愈合，差异有统计学意义（Ｐ　＜　０．０５）。　结论　miR-124能抑制胃癌细胞侵袭能力，它可能在胃癌的发生和进展中发挥重要作用。
[关键词]　胃癌；miR-124；侵袭与转移
[]　Ａ [文章编号]　1673-9701（2012）36-0001-02
miRNA　发挥癌基因和抑癌基因的功能参与细胞增殖、凋亡和分化的调控，在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的生物学功能。目前有关miR-124的研究报道不多，研究发现miR-124在肝癌和宫颈癌组织或细胞中表达下调[2-3]，miR-124在胃癌组织中表达下调，且与胃癌的临床分期、分化程度以及淋巴结转移相关[4]。miR-124可通过靶向CDK6抑制髓母细胞瘤细胞的生长与浸润[5]，但目前miR-124在胃癌等肿瘤中的确切生物学功能并不清楚。本研究通过在胃癌细胞中转染miR-124　mimics使miR-124高表达，探讨miR-124对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响，从而初步揭示miR-124在胃癌中生物学功能。
1　材料与方法

1.1　主要材料

胃癌细胞系MKN-45为本院临床研究所保存。Lipofectamine　2000转染试剂购自美国Invitrogen公司。Trizol试剂从Invitrogen公司购买。miR-124　mimics为上海吉玛公司产品。RPMI1640培养基购自Hyclone公司。MTS细胞增殖/毒性检测试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2　细胞转染

转染前1　d将MKN-45细胞接种于6孔板中，待贴壁细胞融合度达40%～60%时准备转染，转染时去掉原培养基，用RPMI1640培养液（无血清）洗2遍。取4　μL　lipofectamine2000脂质体加入500　μL无血清RPMI1640培养液中，同时取10　μL　miR-124　mimics储存源于：硕士论文www.7ctime.com
液加入500　μL无血清RPMI1640培养基中，室温静置5　min，然后将两者混合室温静置20　min后。将此混合液加入细胞中，mimics的最终浓度为80　nmol/L，6　h后更换含10%胎牛血清DMEM培养基，继续扩大培养以用于后续实验。

1.3　细胞划痕实验

将瞬时转染miR-124　mimics和无关序列的细胞接种于6孔板待之长至临近饱和；用10　μL　Eppendorf　Tip消毒后在细胞板上划痕，并将细胞洗涤2～3遍；加5％小牛血清的RPMI1640培基，倒置显微镜观察0　h，　24　h，　48　h各组细胞的变化，并于倒置显微镜摄像；软件测量转染细胞任意三个部位的不同伤口的宽度，计算各处理组伤口愈合率，测量各组细胞任意三个部位的不同伤口的宽度，通过测算0　h，24　h与48　h的伤口愈合率，即用0　h伤口宽度与24　h，48　h时间伤口宽度的差值与0　h伤口宽度的比值。计数三组实验的平均值，并进行统计学分析。
2　结果
细胞划痕实验检测miR-124对胃癌MKN-45细胞运动侵袭能力影响见图1。在6孔板通过转染miR-124　mimics及其对照胃癌MKN-45细胞，过夜细胞贴壁后进行细胞划痕实验，通过测算0　h，24　h与48　h的伤口愈合率，其愈合率=（0　h伤口宽度-实验时间伤口宽度）/（0　h伤口宽度）。结果显示，转染ｍｉＲ－１２４　ｍｉｍｉｃｓ　２４　ｈ、４８　ｈ后伤口愈合率分别为（０．３１３±０．００５）、（０．３６９±０．０３１），与各自对照组（０．４１３±０．０３５）、（０．８５２±０．０２４）比能明显减缓ＭＫＮ－４５细胞划痕伤口论文导读：
的愈合，差异有统计学意义（Ｐ　＜　０．０５）（图１），结果提示，高表达ｍｉＲ－１２４对ＭＫＮ－４５细胞运动能力有抑制作用。
3　讨论
近年来，通过高通量的miRNA芯片筛选等方法已发现大量miRNA与胃癌相关，但是迄今为止对这些miRNA在胃癌发生发展的确切功能及其机制知之甚少。miRNA的表达失调或功能异常可能导致包括肿瘤在内的多种疾病的发生。越来越多的研究显示在人类肿瘤中存在miRNA表达的失调，miRNA　发挥癌基因和抑癌基因的功能参与细胞增殖、凋亡和分化的调控，在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的生物学功能。Ghanta等[6]通过自己建立的人类miRNA疾病数据库整理出几十个致瘤miRNA和抑瘤miRNA，并对其功能、表达、进化、基因组分布、靶基因及转录因子等进行了全面的系统生物学分析，发现在功能上致癌miRNA更倾向于促进细胞增殖、抑制凋亡、抑制免疫细胞发育、控制细胞周期等，而抑癌miRNA更倾向于抑制细胞生长、促进凋亡等。关于miRNA可作为瘤基因或抑瘤基因参与肿瘤的发生发展的报道越来越多。本研究通过细胞划痕实验检测发现高表达miR-124对MKN-45细胞增殖的影响。结果发现，与scramble　mimics细胞相比，转染miR-124　mimics的MKN-45细胞从24　h起运动侵袭速度明显减慢，差异有统计学意义（P　<　0.05），表明miR-124能抑制胃癌细胞运动侵袭，它可能在胃癌发生、发展中起着重要的作用。源于：毕业论文致谢格式www.7ctime.com