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简析~(35)S-炔丙基半胱氨酸与H_2~(35)S在生物医学中示踪技巧

最后更新时间:2024-02-20 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:28071 浏览:123409
论文导读:治疗作用,但用常规的浅析策略检测SPRC在生物体内的含量,其灵敏度一般难以达到探讨的要求,所以制备35S-SPRC,以35S-SPRC为示踪剂,用以探讨SPRC在SD大鼠体内的生物学分布,以及在APP/PSN1小鼠的脑内分布,为其进一步探讨提供依据。SPRC在体内介导内源性H2S的生成,同时在SPRC的作用下超氧化物歧化酶(SuperoxideDiutase,SOD)活
摘要:目的利用35S示踪技术,对35S-炔丙基半胱氨酸(35S-propargyl-cysteine,35S-SPRC)和H235S进行体内外的示踪探讨,探讨显示S-炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine, SPRC)对心肌细胞损伤有着保护作用,同时SPRC也对老年痴呆有一定的治疗作用,但用常规的浅析策略检测SPRC在生物体内的含量,其灵敏度一般难以达到探讨的要求,所以制备35S-SPRC,以35S-SPRC为示踪剂,用以探讨SPRC在SD大鼠体内的生物学分布,以及在APP/PSN1小鼠的脑内分布,为其进一步探讨提供依据。SPRC在体内介导内源性H2S的生成,同时在SPRC的作用下超氧化物歧化酶(Superoxide Diutase, SOD)活性提升,为了探讨SOD的活性变化与H2S之间的联系,本课题运用H235S初步考察H235S与SOD在体外的结合特性。策略1.以半胱氨酸为起始原料合成非标记的SPRC,通过冷试验确定合成路线、反应条件及浅析鉴定策略。在此基础上,以35S-半胱氨酸为原料合成35S-SPRC,35S-SPRC的鉴定采取TLC法及放射自显影法。按实验要求,将35S-SPRC配制成一定比活度的放射性溶液。2.取SD大鼠18只,随机分成3组,按15mg·kg-1的剂量灌胃给药35S-SPRC在不同时相将大鼠处死,取各脏器,称重、匀浆、消化,用液体闪烁计数器测定各样本的放射性活度。3.取APP/PSN1小鼠20只(每只大约30g),分成4组,每组5只,雌雄兼顾,灌胃给药35S-SPRC。在不同时相将APP/PSN1小鼠处死,取出大脑各区域,称重、匀浆、消化,用液体闪烁计数器测定各样本的放射性活度。4.考察温度、时间以及pH值对H235S与SOD的结合影响,并探讨用螯合剂EDTA、DDTC抑制SOD活性中心后H235S与SOD的结合特性。结果TLC鉴定表明,标记物35S-SPRC与SPRC的Rf值一致,35S-SPRC的放化纯度大于95%。大鼠体内的生物学分布表明,35S-SPRC在大部分器官中的浓度在0.5h达到峰值。APP/PSN1小鼠脑内分布显示,35S-SPRC可以透过血脑屏障,并在纹状体和海马等区域有一定的富集。H235S有可能通过与SOD的活性中心的Cu、Zn作用影响其活性。结论运用35S示踪技术,能准确地对SPRC进行体内的示踪探讨,大鼠体内的生物学分布表明,35S-SPRC在大部分器官0.5h达到峰值。APP/PSN1小鼠脑内分布显示,35S-SPRC可以透过血脑屏障,并在纹状体和海马等区域有一定的富集。同时运用H235S的示踪技术,本课题得到了SOD与H2S的初步结合特性。关键词:
【学位授予单位】:论文复旦大学
【学位级别】:论文硕士
【学位授予年份】:论文2012
【分类号】:论文R318.0
【目录】:论文中文摘要5-7
Abstract7-9
前言9-11
试剂、材料、仪器和实验动物11-13
第一部分 SPRC以及类似物的合成13-19

一、SPRC以及类似物的合成13-18

三、讨论18-19

第二部分 标记物~(35)S-SPRC的制备19-22

一、~(35)S-SPRC的制备19

二、~(35)S-SPRC放化纯度的测定19-20

三、讨论20-22

第三部分 ~(35)S-SPRC的生物学探讨22-28

一、~(35)S-SPRC的大鼠的体内生物分布23-24

二、APP/PSN1小鼠的脑内生物分布24-27

三、讨论27-28

第四部分 H_2~(35)S与SOD结合特性的初步探讨28-34

一、探讨背景28

二、H_2~(35)S与SOD的结合特性28-32

1. 缓冲溶液的配制29

2. 温度与时间对H_2~(35)S与SOD结合的影响29-30

3. 竞争结合实验30-31

4. H_2~(35)S与SOD饱和结合实验31-32

三、讨论32-34

第五部分 总结34-35
参考文献35-37
致谢37-38
附录38-44
文献综述44-57
参考文献53-57