研究毛细管毛细管电泳技术快速筛选海洋药用生物中常见核苷类化合物策略中国

论文导读：策略，为该类化合物的快速发现和排重提供新策略。本论文探讨内容和结果如下所示：1.为了获得毛细管电泳技术同时分离多种核苷类化合物的最适缓冲液分离系统，利用未涂层石英毛细管，二极管阵列检测器（DAD），对两类缓冲盐——挥发性缓冲盐（醋酸钠、碳酸氢钠、乙酸铵和乙二胺（DEA））和不挥发性缓冲盐（四硼酸钠、磷酸氢二钠）分离系统分
摘要：核苷类化合物包括碱基、核苷、核苷酸以及上面陈述的化合物的衍生物或类似物，是构成脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的基本组成，除此之外，生物体中还有不少游离的核苷类化合物。游离核苷类化合物不仅有着于陆源药用生物体中，也广泛有着于海洋药用生物中。目前，采取天然产物化学传统策略开展药用生物活性成分探讨的历程中，经常面对对游离核苷类化合物重复提取、分离、纯化和表征等不足，其结果是不同海洋药用生物中发现相同的核苷类化合物，造成人力物力的大量消耗，并大大降低了发现新化合物的效率。由此，在海洋药用生物活性成分探讨历程中，实现对常见核苷类化合物的快速排重势在必行。本论文采取不同方式毛细管电泳技术，包括：毛细管区带电泳（CZE）、胶束电动毛细管色谱（MEKC）和毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱联用（CE-ESI-TOF/MS）等，进展海洋药用生物中15种常见核苷类化合物（包括：腺嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷、胸苷、肌苷、2’-脱氧鸟苷和虫草素）快速分离、筛选新策略，为该类化合物的快速发现和排重提供新策略。本论文探讨内容和结果如下所示：1.为了获得毛细管电泳技术同时分离多种核苷类化合物的最适缓冲液分离系统，利用未涂层石英毛细管，二极管阵列检测器（DAD），对两类缓冲盐——挥发性缓冲盐（醋酸钠、碳酸氢钠、乙酸铵和乙二胺（DEA））和不挥发性缓冲盐（四硼酸钠、磷酸氢二钠）分离系统分离15种常见核苷类化合物的不同适应性进行了考察。结果发现，在CZE方式下，四硼酸钠和磷酸氢二钠缓冲系统无法将15种核苷类化合物同时分离，较适用于浅析含核苷类化合物数量较少的样品。挥发性缓冲盐中，DEA分离效果最好，在经过一系列优化后，能够使15种目标化合物达到基线分离，且得到的色谱峰峰型良好。在大量样品的浅析筛选历程中，需要经常对其进行更换，以保证策略的重复性。MEKC方式下，除DEA外，其余5种缓冲盐系统加入SDS后色谱峰的分离度均显著提升。2.针对挥发性缓冲盐分离系统稳定性较差、不利于实际样品准确定性定量浅析的难题，本探讨选取稳定性良好的磷酸氢二钠缓冲系统，进展MEKC方式同步分离筛选海洋药用生物中15种常见核苷类化合物的新策略。首先通过对进样量、分离电压、pH值、SDS浓度等条件的系统优化，获得最佳分离条件，即为：以含有70mmol/L SDS论文导读：
的25mmol/L的磷酸氢二钠溶液为背景电解质溶液，分离电压25kV，进样时间3sec（50mbar），pH值8.7（无需调节），检测波长260nm。在最佳实验条件下得到的电泳图中，核苷类化合物分离度高，峰型尖锐、对称，并保持较快的分离速度。然后，进行了策略学考察，结果表明，仪器精密度RSD值在1.4%-7.6%之间，日内重复性在8.2%以内和日间重复性在1.2%-10.8%之间，回收率在80.2%-112.9%之间，样品在24h内保持稳定。此外，将本策略用于海洋药用生物实际样品（以黄海葵为例）中常见核苷类化合物的快速筛选，通过与标准品的比较，以中发现了12种核苷类化合物。说明该策略快速、稳定、可靠，适合海洋药用生物复杂基质中15种常见核苷类化合物的快速筛选。3.建立了毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱(CE-ESI-TOF/MS)快速筛选海洋药用生物中多种核苷类化合物的新策略。通过对毛细管电泳分离条件和质谱检测条件的系统优化，获得了最佳仪器条件；利用未涂层石英毛细管柱，以含有5%甲醇的30mmol/L乙酸铵溶液（氨水调pH9.9）作为运转缓冲液，50%甲醇水溶液（含有0.25%甲酸）为鞘液（3μL/min），电喷雾质谱正离子方式检测。在最佳仪器条件下，各核苷类化合物精确质量数测定偏差均小于百万分之四，说明通过精确分子量信息进行核苷类化合物快速鉴别结果可靠；15种常见核苷类化合物CE-ESI-TOF/MS浅析回归方程的相联系数均优于0.9933，线性范围均超过了一个数量级，检出限在0.03–1.0μg/mL之间，峰面积日间重复性RSD值在9.38-24.34%之间，能满足实际样品筛选的需要。此外，本策略成功用于海马、海龙等海洋药用生物中核苷类化合物的筛选，表明本策略是海洋药用生物复杂系统中多种核苷类化合物快速同步浅析筛选的有效策略。关键词：海洋药用生物论文核苷类化合物论文排重论文毛细管区带电泳论文胶束电动毛细管色谱法论文毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱论文
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Abstract6-9
缩略语注释9-14
第一章 绪论14-35
1 海洋药用生物活性成分探讨论文导读：
简况14-17

1.1 海洋药用生物的种类和生物活性14-15

1.1 海洋药用生物的种类14

1.2 海洋药用生物成分的生物活性14-15

1.2 海洋药用生物活性成分探讨进展和有着的不足15-16

1.2.1 海洋药用生物活性成分探讨进展15-16

1.2.2 海洋药用生物活性成分探讨有着的不足16

1.3 海洋药用生物活性成分化学探讨传统策略与现代探讨手段16-17

2 海洋药用生物中核苷类化合物探讨概述17-24

2.1 核苷类化合物的概述17-20

2.

1.1 核苷类化合物的生物来源19

2.

1.2 核苷类化合物的生物活性19-20

2.2 核苷类化合物现代浅析筛选、检测技术20-23

2.1 薄层色谱技术20

2.2 气相色谱技术20-21

2.3 液相色谱及液质联用技术21-22

2.4 毛细管电泳及与质谱联用技术22-23

2.4.1 毛细管区带电泳22

2.4.2 胶束电动毛细管色谱22-23

2.4.3 毛细管电泳-质谱23

2.3 海洋药用生物活性成分筛选探讨中对核苷类化合物进行快速排重势在必行23-24

3 本论文的探讨目的、内容及探讨作用24

3.1 探讨目的与内容24

3.2 科学作用24

参考文献24-35
第二章 毛细管电泳不同缓冲液系统分离核苷类化合物的适应性35-47
1 实验部分35-36

1.1 仪器与试剂35-36

1.2 仪器条件36

1.2.1 区带毛细管电泳法条件36

1.2.2 胶束电动毛细管色谱法条件36

1.3 标准溶液的配制36

2 结果与讨论36-44

2.2 CZE 缓冲盐分离系统37-42

2.1 CZE 不挥发性缓冲盐分离系统37

2.2 CZE 挥发性缓冲盐分离系统37-39

2.3 DEA 缓冲液分离条件优化39-42

2.3.1 DEA 缓冲液 pH 条件优化39-40

2.3.2 DEA 缓冲液浓度条件优化40

2.3.3 缓冲液中有机改性剂的优化40-41

2.3.4 其他条件的优化41-42

2.3 MEKC 不同缓冲盐分离系统42-44

2.3.1 MEKC 方式下挥发性缓冲盐系统43-44

2.3.2 MEKC 方式下不挥发性缓冲盐系统44

3 结论44-45
参考文献45-47
第三章 胶束电动毛细管色谱法快速筛选海洋药用生物中的15种常见核苷类化合物47-63
1 实验部分48-49

1.1 仪器与试剂48

1.2论文导读：0-522.2.3不同pH值条件的优化52-532.2.4不同有机改性剂的优化532.2.5仪器条件的优化532.3核苷类化合物的快速筛选鉴别53-562.4策略学考察56-592.4.1标准曲线的绘制、检出限和定量限56-572.4.2精密度572.4.3重现性57-582.4.4样品稳定性582.4.5样品回收率58-592.5海洋药用生物样品的浅析59-613本章小结61参考文献
仪器条件48

1.3 标准溶液的配制48

1.4 海洋生物黄海葵样品的处理48-49

2 结果与讨论49-61

2.1 背景电解液（BGE）的选择49

2.2 MEKC 分离条件优化49-53

2.1 不同 SDS 浓度的优化49-50

2.2 不同缓冲液浓度的优化50-52

2.3 不同 pH 值条件的优化52-53

2.4 不同有机改性剂的优化53

2.5 仪器条件的优化53

2.3 核苷类化合物的快速筛选鉴别53-56

2.4 策略学考察56-59

2.4.1 标准曲线的绘制、检出限和定量限56-57

2.4.2 精密度57

2.4.3 重现性57-58

2.4.4 样品稳定性58

2.4.5 样品回收率58-59

2.5 海洋药用生物样品的浅析59-61

3 本章小结61
参考文献61-63
第四章 毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱联用技术快速筛选海洋药用生物中的常见核苷类化合物63-82
1 实验部分63-65

1.1 仪器与试剂63-64

1.2 仪器条件64

1.2.1 毛细管电泳分离条件64

1.2.2 电喷雾飞行时间质谱条件64

1.3 标准溶液的配制64

1.4 海洋药用生物样品的处理64-65

2 结果与讨论65-80

2.1 DEA 为缓冲盐对核苷化合物的质谱浅析65-66

2.2 乙酸铵为缓冲盐对核苷化合物的质谱浅析66-71

2.1 毛细管电泳分离条件的优化66-70

2.2 质谱条件的优化70-71

2.1 鞘液的组成和流速70-71

2.2 干燥气流速和温度、雾化气压力的优化71

2.3 毛细管电压、破碎电压和八级杆电压的优化71

2.4 微通道板电压和光电倍增管电压的优化71

2.3 核苷类化合物的快速筛选鉴别71-77

2.4 策略学考察77-79

2.4.1 标准曲线的绘制、检出限和定量限77-78

2.4.2 精密度78

2.4.3 重现性78-79

2.4.4 稳定性和回收率79

2.5 海洋生物中核苷类化合物含量的测定79-80

3 本章小结80
参考文献80-82
第五章 结论82-84
在学期间发表论文84-87
致谢87-88