浅议化生基于金纳米粒生物分子化学发光新技术

论文导读：,已经广泛运用于临床治疗、诊断与生物技术探讨。人免疫球蛋白E(IgE)是五种免疫球蛋白的一种,对过敏反应有着重要的作用。与其他免疫球蛋白不同的是人血浆中IgE的含量极低,但是过敏性哮喘病人体内的IgE含量会升高。本章进展了基于适配体识别,AuNPs放大系统用于IgE的高选择性、高灵敏CL浅析。本对策主要依赖于固定至聚苯乙烯微
摘要：金纳米(AuNPs)粒具有优良的电学、光学、热力学与催化性能,已广泛地运用于物理学、化学、生物学、医学和材料科学及其交叉学科。AuNPs毒性小、粒径小,易于被细胞摄取,经功能化修饰后,可以用于生物成像、药物与基因传递等治疗与诊断领域。另外,AuNPs具有卓越的电传导性、等离子体共振特性和高催化性,且其表面易于修饰,已经广泛运用于构建光学、电化学等生物传感器。化学发光(CL)浅析法是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的浅析策略。CL浅析技术具有浅析速度快、灵敏度高、仪器设备简单、线性范围广且适用于微量浅析等特性,已广泛运用于浅析化学的各个领域。功能化AuNPs既可用作CL底物的载体；另一方面,由于AuNPs尺寸小、表面效应显著,由此也具有CL催化剂的作用,如AuNPs可以催化银离子形成银原子沉积在AuNPs的表面,同时推动鲁米诺自由基的形成,后者可与溶液中溶解的氧反应产生CL信号。因而,AuNPs可以显著增大CL强度。Luminol-AgNO3-AuNPsCL系统已经用于CL免疫浅析、DNA以及有机小分子的含量测定。本论文将AuNPs催化的CL技术与其他技术相结合,进展了一系列具有革新作用的基于金纳米粒的人血浆蛋白、腺苷及端粒酶活性CL浅析法。整个论文由以下五个部分组成：第一章绪论金纳米粒作为一种具有独特理化性质的贵金属纳米粒子,一直是科学家探讨的热点。本章简单介绍了金纳米粒的合成策略、优良性能,并且详细综述了金纳米粒在药物与基因传递、诊断与成像、生物传感器以及CL催化等领域中的运用,着重介绍了金纳米粒作为一种高效的催化剂在鲁米诺CL系统中的重要作用。第二章基于金纳米粒的适配体系统用于IgE的浅析核酸适配体(Aptamers,适配体)是指利用指数富集配系统统进化技术(SELEX),以随机单链寡聚核苷酸库中筛选得到的能够与靶分子特异性结合的单链DNA或RNA,已经广泛运用于临床治疗、诊断与生物技术探讨。人免疫球蛋白E(IgE)是五种免疫球蛋白的一种,对过敏反应有着重要的作用。与其他免疫球蛋白不同的是人血浆中IgE的含量极低,但是过敏性哮喘病人体内的IgE含量会升高。本章进展了基于适配体识别,AuNPs放大系统用于IgE的高选择性、高灵敏CL浅析。本对策主要依赖于固定至聚苯乙烯微孔板上的捕获抗体、目标蛋白和适配体功能化金纳米粒(Apt-AuNPs)三者之间形成“三明治”结构的免疫复合物。只有在加入目标蛋白的情况下,金纳米粒才能组装于微孔板上,组装成功的AuNPs进而催化鲁米诺-硝酸银CL系统产生CL信号。为了使CL信号进一步放大,随后在金纳米粒表面进行了简单的氯金酸催化的沉积反应。该CL信号放大技术可使模型蛋白IgE的最低检测限达到50fM,优越于已报道的其他基于适配体的IgE检测技术。该检测策略专属性强,能够较为理想地分辨出IgE,而不受其它血浆蛋白的干扰,如IgG、IgA和IgM等,已成功运用于35个人血样中IgE含量的检测,与对照值相关性良好。综合而言,该检测策略具有显著的优点,如最低检测限能够达到fM级别、线性范围广(跨度达4个数量级),可以拓宽至基于适配体的其它蛋白的含量测定,有望在临床、环境以及生物防御等领域的目标蛋白高灵敏、高选择性检测中获得运用。第三章基于适配体-金纳米粒识别检测的血小板衍生化生长因子化学发光浅析新技术血小板衍生化生长因子(PDGF)可通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合推动细胞分裂繁殖。由此,PDGF在血管增生中起着重要的作用,并且与细胞转化、肿瘤生长及进展有着着密切联系。作为PDGF的重要亚型,PDGF-BB在正常细胞中的含量极低,甚至检测不到。但是在胶质瘤和肉瘤等肿瘤中,PDGF-BB水平会急剧升高。由此,作为一种肿瘤标志物,PDGF-BB的含量测定在癌症诊断与治疗中有着重要的作用。本章进展了一种新型的、基于适配体识别-金纳米标记的CL浅析技术,用于PDGF-BB的高灵敏度检测。该技术首先将PDGF-BB抗体通过氨基-羧基反应结合至表面具有活性羧基的96孔板上；而生物素标记的PDGF-BB适配体序列,预先组装于链霉亲和素金纳米粒上形成Apt-AuNPs复合物；在PDGF-BB作用下发生夹心反应,Apt-AuNPs复合物结合于96孔板上；通过羟胺(NH2OH)与氯金酸(HAuCl4)的氧化论文导读：
还原反应,将96孔板上结合的AuNPs进一步催化放大形成具有更大表面积的粒子,最后采取luminol-AgNO3系统测定其CL信号强度。最优条件下,PDGF-BB的线性范围为0.1～1000pM(LgI=0.9524LgC+1.4995,R2=0.9883),检测限为10fM。此外,专属性实验表明：相同浓度的PDGF-AA、PDGF-AB、干扰素a2b及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)对PDGF-BB的测定无显著干扰。综合而言,本章建立的CL策略能够简单、灵敏、高效地检测PDGF-BB,并有望扩展到其他蛋白的浅析。第四章基于核酸外切酶辅助循环放大的高灵敏化学发光传感器腺苷作为一种嘌呤核苷,在生物化学上扮演重要角色,包括以腺苷三磷酸或腺苷双磷酸形式转移能量,或是以环状腺苷单磷酸进行信号传递等,此外腺苷也是一种抑制性神经传导物,可能会推动睡眠。由此,监测生理条件下的腺苷水平有着重大的作用。核酸外切酶Ⅲ(Exo Ⅲ)对双链DNA具有高度特异性,能降解平滑末端、3’凹陷末端及有切口的双链DNA,但是不能降解单链DNA与3’-突出末端双链DNA。本章我们利用Exo Ⅲ辅助循环信号放大技术,构建了新型的AuNPs催化CL适配体传感器用于腺苷的高灵敏检测浅析。腺苷适配体通过与96孔板上的捕获探针杂交固定于96孔板上；同时合成报告探针功能化的金纳米粒,此AuNPs表面的报告探针与上面陈述的腺苷适配体末端部分碱基互补。在腺苷有着的情况下,腺苷适配感受折叠形成双链DNA将腺苷包裹起来,加入Exo Ⅲ,双链DNA以3’-OH端开始逐渐降解直到腺苷释放出来,释放出来的腺苷再次与96孔板上的腺苷适配体结合,降解得到的单链DNA由于3’-端降解失去四个碱基,不能够再与AuNPs表面的DNA碱基形成稳定配对,以而影响AuNPs在96孔板上的结合,进而降低所测得的CL信号强度。CL信号减弱强度与腺苷浓度线性相关良好,此法测得腺苷的最低检测限为0.5nM,低于文献报道的其他基于适配体的腺苷检测策略。该新型CL检测策略为大量目标物提供了新的检测策略,为临床诊断、环境监测、药物浅析以及生物医学探讨等提供了一个高效多能的平台。第五章基于分子信标-金纳米粒的端粒酶活性化学发光放大检测技术端粒酶是一种与许多肿瘤相关的敏感性和特异性的肿瘤标志物。由此,端粒酶活性的快速、灵敏浅析对于肿瘤的检测以及治疗案例功效的评价显得至关重要。本章我们将基于分子信标功能化金纳米粒(MB-AuNPs)的CL放大技术运用到人非小细胞肺癌A549细胞中端粒酶活性的检测。端粒引物在端粒酶与脱氧三磷酸核苷的作用下复制得到靶向DNA。将一端可与96孔板上捕获DNA发生碱基配对、另一端生物素修饰的分子信标偶联至链霉亲和素标记的金纳米粒上得到MB-AuNPs,此MB-AuNPs上的MB在上面陈述的靶向DNA的作用下产生开环现象,以而将AuNPs连接至96孔板上。连接到96孔板的AuNPs经NH2OH-HAuCl4氧化还原反应沉积放大后采取luminol-AgNO3CL系统测定CL强度,以而间接检测端粒酶的活性。本法可检测出200个A549细胞中的端粒酶活性,以合成的靶向DNA浓度或人肿瘤细胞数目与CL强度作标准曲线,获得了良好的线性,证明此策略可用于肿瘤细胞中端粒酶活性的简单、灵敏、直观检测浅析。关键词：化学发光论文金纳米粒论文适配体论文核酸外切酶论文分子信标论文人免疫球蛋白E论文血小板衍生化生长因子论文腺苷论文端粒酶活性论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。目录4-6
摘要6-10
ABSTRACT10-15
英文缩写词表15-17
第一章 绪论17-46

1.1 引言17

1.2 金纳米粒在药物与基因传递中的运用17-19

1.3 金纳米粒在诊断与成像中的运用19-20

1.4 金纳米粒在生物传感器中的运用20-26

1.4.1 光学生物传感器20-21

1.4.2 电化学生物传感器21-22

1.4.3 压电生物传感器22

1.4.4 适配体传感器22-26

1.5 金纳米粒在化学发光浅析中的运用26-36

1.5.1 鲁米诺化学发光论文导读：713.2实验部分71-733.2.1仪器设备713.2.2试剂与材料71-723.2.3制备适配体金纳米粒复合物723.2.4CL检测的一般步骤72-733.3实验结果与讨论73-793.3.1实验原理733.3.2实验条件的优化73-773.3.3含量测定77-783.3.4专属性试验78-793.4结论79-803.5参考文献80-83第四章基于核酸外切酶辅助循环放大的高灵敏化学发光传
系统26-28

1.5.2 金纳米粒作为放大标记物的化学发光浅析28-31

1.5.3 金纳米粒催化的鲁米诺化学发光浅析31-36

1.6 本课题的主要探讨内容及革新点36

1.7 参考文献36-46

第二章 基于金纳米粒的适配体系统用于IgE的浅析46-69
摘要46

2.1 引言46-48

2.2 实验部分48-51

2.1 仪器设备48-49

2.2 试剂与材料49-50

2.3 Apt-AuNPs复合物的制备50

2.4 CL检测步骤50-51

2.3 结果与讨论51-62

2.3.1 实验原理51-53

2.3.2 反应参数优化53-57

2.3.3 含量测定57-60

2.3.4 专属性浅析60-61

2.3.5 与免疫比浊法比较61-62

2.4 结论62-63

2.5 参考文献63-69

第三章 基于适配体-金纳米粒识别检测的血小板衍生化生长因子化学发光浅析新技术69-83
摘要69

3.1 引言69-71

3.2 实验部分71-73

3.

2.1 仪器设备71

3.

2.2 试剂与材料71-72

3.

2.3 制备适配体金纳米粒复合物72

3.

2.4 CL检测的一般步骤72-73

3.3 实验结果与讨论73-79

3.1 实验原理73

3.2 实验条件的优化73-77

3.3 含量测定77-78

3.4 专属性试验78-79

3.4 结论79-80

3.5 参考文献80-83

第四章 基于核酸外切酶辅助循环放大的高灵敏化学发光传感器83-101
摘要83

4.1 引言83-85

4.2 实验部分85-87

4.

2.1 仪器设备85

4.

2.2 试剂与材料85-86

4.

2.3 金纳米探针的制备86-87

4.

2.4 CL检测操作步骤87

4.3 结果与讨论87-95
4.

3.1 实验原理87-89

4.

3.2 反应参数优化89-92

4.

3.3 腺苷的含量测定92-95

4.

3.4 专属性试验95

4.4 结论95-96

4.5 参考文献96-101

第五章 基于分子信标-金纳米粒的端粒酶活性化学发光放大检测技术101-120
摘要101

5.1 引言101-103

5.2 实验部分103-106

5.

2.

1. 仪器设备103

5.2 试剂与材料103-105 5.

2.3 细胞培养与端粒酶提取液制备105-106

5.

2.4 基于MB-AuNPs的端粒酶活性CL检测106

5.3 结果与讨论106-115
5.

3.1 实验原理106-107

5.

3.2 影响CL信号强度的因素探讨107-112

5.

3.3 含量测定112-115

5.

3.1 基于MB-AuNPs的目标DNA序列CL测定112-113

5.

3.2 基于MB-AuNPs的端粒酶活性CL测定113-115

5.4 结论115

5.5 参考文献115-120

总结与展望120-122
科研成果122-123
致谢123-124