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浅谈复合物虫草素引起肿瘤细胞凋亡以及抑制增殖作用

最后更新时间:2024-02-29 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:27680 浏览:122190
论文导读:
摘要:在临床抗肿瘤药物探讨中,发现虫草素对于肿瘤患者有着多重的药理作用。由虫草素制成的治疗白血病的新药已经进入第三期临床试验。但是虫草素在体内腺苷脱氨酶(ADA)的作用下,脱氨基后变成3'-脱氧次黄嘌呤核苷,基本丧失了其生物活性,限制了虫草素在临床上的运用。为了对虫草素进行深入探讨,本论文首先建立了虫草素超高效液相色谱(UPLC)的检测策略。色谱标准方程为:y=43872x+8655.6,r=0.9945。线性相联系数线性范围精密度及稳定性实验的RSD均小于1%。利用离子沉淀的策略制取了LDH(金属双层氢氧化物)纳米材料。将虫草素插入到LDH纳米材料双分子层中,获得虫草素/LDH纳米材料的复合物。探讨这种材料对HeLa细胞的抑制作用。结果显示虫草素/LDH比虫草素单独作用对HeLa细胞有更加显著的抑制增殖的作用。而且LDH双分子层对虫草素具有一定的缓释作用,为其临床上的运用提供了实验依据。通过MTT法和WST法检测虫草素对不同肿瘤细胞(宫颈癌细胞HeLa,乳腺癌细胞MCF-7,耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7/Dox,血管上皮细胞ECV-304,小鼠肝癌细胞H22,黑色素瘤细胞B16)的体外生长抑制作用。对线粒体和溶酶体进行染色,观察自噬引起的自噬体聚集现象。利用蛋白质印迹的策略检测自噬指示蛋白LC3的二型转化以及对长周期蛋白P62的降解的影响。建立了昆明小鼠腹水肝癌H22模型和小鼠肝癌H22实体瘤模型;观察不同浓度虫草素对小鼠肝癌H22的体内抑制作用。HE染色法观察肿瘤细胞形态。结果显示:虫草素对不同肿瘤细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用,且给药组出现不同程度的凋亡特点;虫草素插入LDH双分子层形成虫草素/LDH复合物后,对HeLa细胞的增殖抑制作用得到增强;虫草素能引起HeLa细胞自噬蛋白LC3的聚集,对LC3蛋白的二型转化无显著推动作用。但是能显著推动p62蛋白的降解;虫草素对H22细胞小鼠实体瘤具有显著的抑制效果,对腹水瘤小鼠的寿命一定程度的改善。关键词:虫草素论文UPLC论文LDH论文纳米复合物论文抗肿瘤论文凋亡论文自噬论文
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Ab论文导读:.4虫草素的检测15-161.5虫草素生理活性的探讨16-181.6细胞的凋亡和自噬18-241.7虫草素探讨的近况24-251.8纳米技术在生物医药领域运用25-261.9本课题的探讨背景内容以及作用261.10实验内容设计26-28第2章虫草素的提取及检测策略的建立28-362.1试验仪器与试剂28-292.1.1主要仪器282.1.2材料与试剂28-292.2试验策略
stract3-5
中文文摘5-8
目录8-12
第1章 绪论12-28

1.1 虫草素的来源12

1.2 虫草素的提取12-14

1.3 虫草素的纯化14-15

1.4 虫草素的检测15-16

1.5 虫草素生理活性的探讨16-18

1.6 细胞的凋亡和自噬18-24

1.7 虫草素探讨的近况24-25

1.8 纳米技术在生物医药领域运用25-26

1.9 本课题的探讨背景内容以及作用26

1.10 实验内容设计26-28

第2章 虫草素的提取及检测策略的建立28-36

2.1 试验仪器与试剂28-29

2.

1.1 主要仪器28

2.

1.2 材料与试剂28-29

2.2 试验策略29-30

2.1 虫草素UPLC检测条件的探讨29-30

2.2 虫草素的提取30

2.3 UPLC和HPLC对自制虫草素结晶的检测效果的比较30

2.3 实验结果30-34

2.3.1 虫草素UPLC检测条件30-32

2.3.2 UPLC和HPLC策略对自制虫草素晶体样品检测效果的比较32-34

2.4 讨论34-36

第3章 虫草素对不同肿瘤细胞的抑制增殖的探讨36-44

3.1 试验仪器36

3.2 材料和试剂36-37

3.3 培养液与主要溶液的配制37-38

3.4 试验策略38-39

3.4.1 细胞培养和冻存38-39

3.4.2 不同虫草素浓度对不同肿瘤细胞增殖抑制作用39

3.4.3 不同Dox浓度对不同肿瘤细胞的抑制增殖作用39

3.4.4 Dox与虫草素联合作用对不同肿瘤细胞的抑制增殖作用39

3.5 实验结果39-43

3.5.1 虫草素对不同肿瘤细胞的增殖抑制作用39-40

3.5.2 不同Dox浓度对不同肿瘤细胞的抑制增殖作用40-41

3.5.3 Dox和虫草素联合作用下对不同肿瘤细胞的抑制增殖作用41-43

3.6 结论43-44

第4章 虫草素/LDH纳米复合物的制备以及对HeLa细胞增殖作用44-52

4.1 试验仪器44

4.2 材料和试剂44-45

4.3 培养液与主要溶液的配制45

4.4 实验策略45-47

4.1 虫草素/LDH纳米复合物的制备45-46

4.2 虫草素/LDH纳米复合物体外释放试验46

4.3 虫草素/LDH复合物对HeLa细胞增殖的抑制试验46

4.4 虫草素和虫草素/LDH复合物腹腔给药的药代动力学探讨46-47

4.5 实验结果47-50

4.5.1 X-射线衍射浅析LDH和虫草素/LD论文导读:

H纳米复合物(XRD)结果47

4.5.2 虫草素/LDH的体外释放47-48

4.5.3 虫草素和虫草素/LDH复合物对HeLa细胞形态学观察48-49

4.5.4 虫草素和虫草素/LDH纳米复合物对HeLa细胞生长的抑制作用49

4.5.5 虫草素和虫草素/LDH纳米复合物SD大鼠腹腔给药的药代动力学实验49-50

4.6 讨论50-52

第5章 虫草素引起HeLa细胞凋亡和自噬的探讨52-64

5.1 材料与策略52-54

5.

1.1 实验材料52

5.

1.2 试验策略52-54

5.2 实验结果54-60
5.

2.1 细胞形态观察54

5.

2.2 细胞凋亡特点观察54-55

5.

2.3 HeLa细胞DNA的琼脂糖电泳浅析55-56

5.

2.4 EGFP-LC3荧光点状聚集浅析56-57

5.

2.5 线粒体和溶酶体与自噬泡的共定位57-59

5.

2.6 虫草素对HeLa细胞的LC3二型蛋白表达的影响59

5.

2.7 虫草素对HeLa细胞的P62蛋白表达的影响59

5.

2.8 虫草素和自噬抑制剂3-MA联合作用下对p62蛋白降解的影响59-60

5.3 讨论60-64
第6章 虫草素对肝癌H22的小鼠体外和体内抑制作用探讨64-74

6.1 材料与试剂64

6.2 实验仪器64-65

6.3 实验策略65-66

6.

3.1 WST法测定虫草素对H22细胞体外的生长抑制作用65

6.

3.2 虫草素对小鼠肝癌实体瘤生长的影响65

6.

3.3 免疫器官指数(脾指数)65

6.

3.4 肿瘤组织细胞形态学观察65-66

6.

3.5 虫草素对腹水型肝癌H22小鼠生命延长率的影响66

6.

3.6 肿瘤组织细胞形态学观察66

6.

3.7 统计学处理66

6.4 试验结果66-71
6.

4.1 WST法检测虫草素对H22肿瘤细胞体外的增殖抑制作用66-67

6.

4.2 虫草素对小鼠肝癌H22实体瘤生长的抑制作用67-68

6.

4.3 虫草素对肝癌H22小鼠免疫器官生长影响68

6.

4.4 虫草素对H22实体瘤作用的组织切片观察68-69

6.

4.5 虫草素对腹水型肝癌H22小鼠体重及存活寿命的影响69-71

6.5 讨论71-74
总结与展望74-76
参考文献76-84
致谢84-86
个人简历86-87