研究蛛丝RGD-蛛丝蛋白/聚己内酯/壳聚糖小直径血管支架细胞相容性及运用于血管缺损修复学位

论文导读：方面对其进行探讨。1、考察小直径血管支架的细胞毒性。运用组织块法,可获得高纯度的SDRAECs.MTT法检测结果显示PCL、pNSR32/PCL及pNSR32/PCL/CS三种血管支架浸提液均不显示细胞毒性,符合组织工程支架材料的运用要求。细胞相对增殖度的大小为pNSR32/PCL/CS组pNSR32/PCL组PCL组,表明pNSR32和CS对PCL支架的细胞相容性具有良好的
摘要：血管移植是治疗动脉硬化等疾病的主要手段,通常选用自体大隐静脉或内乳动脉作为材料,但可供移植的自体血管数量有限,且一些患者不适合进行自体血管移植。人工合成血管如聚四氟乙烯和涤纶在大中直径(内径6mm)血管移植中已获成功,但在小直径(内径6rmm)血管移植中因其低血流量和高剪切力,易导致血栓形成及内膜增生,远期通畅率不够理想,且由于缺乏降解性及促组织再生能力,长期移植有着生物相容性差等不足。近年来,组织工程学的进展为探讨可降解、生物相容性良好的小直径血管支架提供了新途径。本室前期将RGD-蛛丝蛋白(命名为pNSR32)与力学性能优良的聚已内酯(PCL)、血液相容性良好的壳聚糖(CS)共混,运用静电纺丝技术制备pNSR32/PCL/CS小直径血管支架。实验结果观察到该血管支架具有良好的血液相容性,恰当的力学性能,其三维多孔网状结构模拟了细胞外基质的结构。本探讨在此基础上,探讨该血管支架的生物降解性；以SD大鼠胸主动脉内皮细胞(SDRAECs)为种子细胞,以细胞的粘附、增殖、细胞周期、骨架蛋白发育、表型表达、活性物质分泌等方面对支架的细胞相容性进行较为全面的评价；构建SD大鼠腹主动脉缺损模型,运用“双袖套法”,以血管支架桥接缺损,观察小直径血管支架运用于体内的稳定及通畅情况。实验结果如下：一、探讨小直径血管支架的生物降解性能。随着降解时间的延长,pNSR32/PCL/CS复合支架材料各组的失重率均不断升高,降解程度依次为体内降解组体外酶解组体外水解组。将pNSR32、CS与PCL共混在一定程度上能够推动PCL的降解,缓解因PCL降解而引起的周围环境酸性过大的现象。证明pNSR32/PCL/CS复合血管支架具有生物可降解性。二、探讨小直径血管支架的细胞相容性。分别以细胞毒性、粘附增殖以及功能发挥三个方面对其进行探讨。1、考察小直径血管支架的细胞毒性。运用组织块法,可获得高纯度的SDRAECs.MTT法检测结果显示PCL、pNSR32/PCL及pNSR32/PCL/CS三种血管支架浸提液均不显示细胞毒性,符合组织工程支架材料的运用要求。细胞相对增殖度的大小为pNSR32/PCL/CS组pNSR32/PCL组PCL组,表明pNSR32和CS对PCL支架的细胞相容性具有良好的改善效果。单细胞凝胶电泳实验结果显示,培养于pNSR32/PCL/CS小直径血管支架浸提液中的细胞未见DNA损伤,提示pNSR32/PCL/CS无显著遗传毒性,为进一步开展动物体内探讨奠定了基础。2、浅析小直径血管支架对内皮细胞粘附和增殖的影响。SDRAECs与三种支架复合培养,实验结果显示pNSR32和CS的添加能够改善支架的细胞相容性。具体结果如下：细胞粘附实验说明与pNSR32/PCL/CS支架复合培养的SDRAECs粘附能力最强,细胞骨架蛋白发育最好。扫描电镜观察结果显示pNSR32/PCL/CS上生长的细胞能够保持良好的生长形态,并分泌基质。细胞增殖实验表明pNSR32/PCL/CS能够推动SDRAECs的生长,细胞数量多于pNSR32/PCL和PCL组。流式细胞术结果表明pNSR32/PCL/CS小直径血管支架推动细胞DNA合成及增殖是通过促使细胞以Go/G1期向S期转化实现的。同时,细胞DI值在1.0±0.1范围内,表明pNSR32/PCL/CS支架无致癌性,可运用于体内。3、尝试以细胞功能发挥方面对小直径血管支架的细胞相容性进行探讨。硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)分泌实验表明,pNSR32/PCL/CS小直径血管支架能推动SDRAECs释放血管活性物质NO,分泌量大于pNSR32/PCL组和PCL组,与TCP对照组相比差别具有统计学作用(3、5、7d,P0.05)。细胞免疫荧光结果显示pNSR32/PCL/CS小直径血管支架支持SDRAECs强烈表达内皮细胞标志物——vWF. PECAM-1,其细胞生物学特性未受影响。可见,pNSR32/PCL/CS小直径血管支架能够初步形成具有“生理功能”的组织工程化血管。三、探讨pNSR32/PCL/CS小直径血管支架在临床运用上的可行性。构建SD大鼠腹主动脉缺损模型,运用“双袖套法”,以pNSR32/PCL/CS小直径血管支架桥接缺损。在移植手术期间,pNSR32/PCL/CS小直径血管支架显示出良好的可操作性,术后论文导读：
动物恢复良好,活动以及进食等行为均保持正常。血液生理生化结果显示该支架对机体肝肾功能无显著影响。支架在体内正常血流环境下能够支持细胞生长,并至少能够维持8周结构完整和通畅,但移植支架的长期稳定及通畅性并不清楚。关键词：小直径血管支架论文RGD-蛛丝蛋白论文生物降解性论文细胞相容性论文腹主动脉缺损修复论文
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Abstract4-7
中文文摘7-11
目录11-13
绪论13-25

一、心血管疾病探讨概述13

二、实验所选材料及策略的探讨概况13-17

三、组织工程支架的生物降解17-18

四、组织工程血管支架的生物相容性18-21

五、本探讨的背景、内容和作用21-25

第一章 小直径血管支架的生物降解25-33
第一节 材料与策略25-27
第二节 结果27-28
第三节 讨论28-29
第四节 结论29-30
附图30-33
第二章 小直径血管支架的细胞毒性33-45
第一节 材料与策略33-37
第二节 结果37-39
第三节 讨论39-41
第四节 结论41-43
附图43-45
第三章 内皮细胞在支架上的粘附及增殖45-61
第一节 材料与策略45-48
第二节 结果48-51
第三节 讨论51-56
第四节 结论56-57
附图57-61
第四章 内皮细胞在支架上的生理功能61-67
第一节 材料与策略61-63
第二节 结果63
第三节 讨论63-64
第四节 结论64-65
附图65-67
第五章 小直径血管支架桥接鼠腹主动脉缺损67-75
第一节 材料与策略67-69
第二节 结果69-70
第三节 讨论70-72
第四节 结论72-73
附图73-75
第六章 结论75-77
附录77-79
参考文献79-95
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果95-97
致谢97-99
个人简历99-100