浅谈生长激素赤鳞鱼生长激素全长cDNA克隆和结构功能

论文导读：11.1.6赤鳞鱼的地理环境-泰山11-121.1.7泰山赤鳞鱼的文化价值121.1.8泰山赤鳞鱼的保护和开发12-151.1.9赤鳞鱼的探讨近况15-201.2RACE技术20-211.3GH的结构和功能21-241.3.1GH的作用和机理21-221.3.2GH的结构和功能22-231.3.3GH的分泌231.3.4GH的基因改造技术探讨近况231.3.5GH的基因改造策略231.3.6鱼类
摘要：泰山赤鳞鱼是一种濒危珍贵小型鱼种，肉质浅析结果显示泰山赤鳞鱼具有极高的营养价值和特殊的药用价值，但生长极其缓慢，对存活环境要求苛刻。为了探讨赤鳞鱼的生长发育调控机制，进一步确定赤鳞鱼的种属分类，我们用ART RACE技术克隆了赤磷鱼的生长激素（Growth hormone，GH）的cDNA序列，并用多个生物信息学软件进行核酸和氨基酸序列的结构和功能位点浅析，为赤磷鱼的进一步保护开发奠定了基础。所获成果具体如下：（1）用ART RACE技术克隆了赤磷鱼生长激素基因的cDNA序列。（2）对所扩赤鳞鱼生长激素cDNA序列进行序列浅析。结果显示所扩赤鳞鱼生长激素cDNA序列全长为1307bp(Genbank ID：JN565026)，包括167bp的5'末端和552bp的3'末端及588bp的开放阅读框。预测此开放阅读框可编码出一条195个氨基酸的多肽链。通过基于赤鳞鱼生长激素cDNA和氨基酸序列的进化树浅析，我们发现赤鳞鱼和鲤鱼、鲫鱼的同源率非常高，表明它们有很近的亲缘联系。我们浅析了所预测的赤鳞鱼生长激素氨基酸序列的功能位点，发现和鲤科其他鱼类相比，赤鳞鱼的功能位点的种类，分布和个数无显著不同。并且通过赤鳞鱼氨基酸序列和其他鲤科鱼类进行碱基同源比对，找出赤鳞鱼氨基酸序列中与其功能高度相关的5个生长激素中普遍有着的保守结构域。我们预测了赤鳞鱼生长激素蛋白的二级和空间结构，发现其含有生长激素特有的四个反向互补螺旋。总之，我们首次对泰山赤鳞鱼的生长激素基因进行了报道，我们的工作为进一步探讨此泰山小型鱼种的生长发育机理提供了基础。关键词：赤鳞鱼论文生长激素基因论文分子克隆论文生物信息学论文信号肽论文测序论文
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Abstract8-9
1 前言9-25

1.1 赤鳞鱼概况9-20

1.1 泰山赤鳞鱼的生活习性9

1.2 泰山赤鳞鱼的营养价值9-10

1.3 泰山赤鳞鱼的种属分类10

1.4 赤鳞鱼的生长发育规律10-11

1.5 泰山赤鳞鱼的形态特点及名字由来11

1.6 赤鳞鱼的地理环境-泰山11-12

1.7 泰山赤鳞鱼的文化价值12

1.8 泰山赤鳞鱼的保护和开发12-15

1.9 赤鳞鱼的探讨近况15-20

1.2 RACE 技术20-21

1.3 GH 的结构和功能21-24

1.3.1 GH 的作用和机理21-22

1.3.2 GH 的结构和功能22-23

1.3.3 GH 的分泌23

1.3.4 GH 的基因改造技术探讨近况23

1.3.5 GH 的基因改造策略23

1.3.6 鱼类生长发育的基因相关探讨23-24

1.4 本实验的目的作用24-25

2 材料与策略25-33

2.1 实验材料25-26

2.

1.1 鱼组织材料25

2.

1.2 菌株，生化药品及试剂25

2.

1.3 主要仪器和设备25

2.

1.4 引物25-26

2.2 实验策略26-33

2.1 培养基，缓冲液和其它试剂的配置26-27

2.2 RNA 的提取和检测27-28

2.3 反转录合成 cDNA 第一链28-29

2.4 保守序列扩增29

2.5 3'RACE 扩增29-30

2.6 5'RACE 扩增30-31

2.7 PCR 产物克隆和测序31-32

2.8 赤鳞鱼 GH 基因全长的获得及其序列浅析32-33

3 结果与浅析33-48

3.1 总 RNA 的提取33

3.2 赤鳞鱼生长激素 cDNA 的克隆33-41

3.

2.1 赤鳞鱼生长激素 cDNA 的保守序列克隆33-38

3.

2.2 鱼 GH 基因 3'RACE 扩增结果38-39

3.

2.3 鱼 GH 基因 5'RACE 扩增结果39

3.

2.4 获赤鳞鱼 GH 基因 cDNA 全长39-41

3.

2.5 生长激素 mRNA 在赤鳞鱼各组织中的分布41

3.3 赤鳞鱼 GH 基因及蛋白序列生物信息学浅析41-48

3.1 GH 开放读码框和相应氨基酸结构预测41-42

3.2 构建基于 GH cDNA 和氨基酸序列的进化树42-43

3.3.3 GH 蛋白的二级结构论文导读：浅析图和具体碱基分布43-453.3.4GH蛋白的结构453.3.5赤鳞鱼GH蛋白的功能浅析45-484讨论48-515结论51-52参考文献52-56致谢56-57攻读学位期间发表论文情况57上一页12
浅析图和具体碱基分布43-45

3.4 GH 蛋白的结构45

3.5 赤鳞鱼 GH 蛋白的功能浅析45-48

4 讨论48-51
5 结论51-52
参考文献52-56
致谢56-57
攻读学位期间发表论文情况57