浅议抑制剂基于植物提取物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶抑制剂筛选

论文导读：
摘要：萜类化合物是一类具有良好生物活性,在自然界中分布广泛、种类繁多的异戊二烯类化合物,其生物合成途径主要有两条：甲羟戊酸(MVA)合成途径和2--D-赤藓糖醇4-磷酸(MEP)合成途径。据文献报道,大多数人类致病菌及原虫所需要的萜类物质是依靠MEP途径来合成的,而动物和人类则依靠MVA途径来合成其所需的萜类物质。由此,MEP途径中的酶可以作为抗生素筛选的有效靶标。1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶(DXS)是萜类化合物MEP合成途径中的第一个酶,也是该途径的第一个调控位点,基于这一点筛选出具有DXS酶抑制活性的化合物,以而研发出抗菌谱广、低毒性的新型抗生素显得尤为重要。探讨已证实,很多中草药都具有良好的抗菌消炎以及抗病毒活性,而且细菌不易对中药产生耐药性,所以本课题对一些具有良好抗菌活性的中草药提取物抑制DXS酶的活性进行了初步探讨,以期发现DXS酶的抑制剂。首先,本论文对二十余种具有良好抗菌活性的药用植物进行提取,所得粗提物及初步分离获得的不同部位被用来检测它们对两种细菌源DXS酶的抑制活性。DXS酶催化的反应为D-甘油醛3-磷酸(D-GAP)和磷酸二羟丙酮(DHAP)之间的异构化历程,采取柱前衍生HPLC来检测底物的消耗量或产物的生成量,依此判断所加植物提取物对于该异构化反应的影响,进而筛选出DXS酶的有效抑制剂。本探讨还对检测DXS酶的活性系统进行了优化,筛选出底物的最佳浓度,反应的较适温度以及反应时间等。该策略在DXS酶的抑制剂筛选历程中,不需要大型昂贵的仪器,并且所用的底物不含同位素标记,操作步骤简单、快速、而且灵敏度高。本章对19种植物提取物以及6种植物挥发油进行DXS酶活性抑制筛选实验,结果发现核桃(Juglans regia)青皮石油醚萃取物对DXS酶的抑制活性大于20%,五味子(Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.)正丁醇萃取物,板蓝根(Isatis tinctoria L.)、艾叶(Artemisia argyi Levl. Vant.)乙酸乙酯萃取物,紫荆(Cercis chinensis Bunge)果萃余水相,沙棘(Hippophae rhamnoides Linn)挥发油对DXS酶的抑制活性均大于10%。进一步的深入探讨仍在进行中。关键词：MEP途径论文DXS酶论文论文导读：73.1实验材料与仪器27-283.1.1实验菌株273.1.2实验试剂27-283.1.3实验仪器283.2实验策略28-343.2.1DXS酶的制备28-303.2.2重组蛋白DXS的纯化30-313.2.3SDS-PAGE检测DXS酶纯度31-323.2.4Bradford法检测DXS酶浓度32-333.2.5纸色谱法检测DXS酶功能33-343.3实验结果与讨论34-363.3.1重组蛋白DXS的诱导表达结果343.3.
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Abstract4-5
目录5-8
第一章 绪论8-23

1.1 抗生素的概况8-10

1.1 抗生素的发现及运用8

1.2 抗生素的进展近况8-9

1.3 细菌的耐药性及耐药机制9-10

1.4 抗生素现今进展思路10

1.2 萜类化合物概况10-17

1.2.1 萜类化合物的定义及其分类10-11

1.2.2 萜类化合物的特点11-12

1.2.3 萜类化合物生物活性12

1.2.4 萜类化合物的生物合成途径及其相互联系12-14

1.2.5 DXS酶14-17

1.2.6 DXS酶抑制剂17

1.3 中药及其抗菌作用概况17-22

1.3.1 中药植物概述17-18

1.3.2 中药抗菌成分探讨18-20

1.3.3 中药抑菌作用机制的探讨20

1.3.4 细菌不易对中药产生耐药性20-21

1.3.5 中药有效成分的提取、分离21-22

1.4 本课题的探讨目的与作用22-23

第二章 抑菌植物提取物的提取及初步分离23-27

2.1 实验材料及主要仪器23-24

2.

1.1 实验材料23-24

2.

1.2 主要试剂24

2.

1.3 主要实验仪器24

2.2 实验策略24-25

2.1 植物的提取24-25

2.3 实验结果25-26

2.4 本章小结26-27

第三章 DXS酶的制备27-37

3.1 实验材料与仪器27-28

3.

1.1 实验菌株27

3.

1.2 实验试剂27-28

3.

1.3 实验仪器28

3.2 实验策略28-34
3.

2.1 DXS酶的制备28-30

3.

2.2 重组蛋白DXS的纯化30-31

3.

2.3 SDS-PAGE检测DXS酶纯度31-32

3.

2.4 Bradford法检测DXS酶浓度32-33

3.

2.5 纸色谱法检测DXS酶功能33-34

3.3 实验结果与讨论34-36

3.1 重组蛋白DXS的诱导表达结果34

3.2 SDS-PAGE检测DXS酶纯度结果34

3.3 DXS酶浓度测定结果34-35

3.4 DXS酶活性测定结果35-36

3.4 本章小结36-37

第四章 柱前衍生-HPLC检测DXS酶催化的D-GAP与DHAP相互异论文导读：-58参考文献58-65致谢65上一页123
构化反应37-44

4.1 实验材料与仪器37-38

4.

1.1 实验材料37

4.

1.2 主要仪器37-38

4.2 实验策略38-39
4.

2.1 D-GAP的制备38

4.

2.2 D-GAP的纯化38-39

4.3 HPLC策略检测DXS催化D-GAP的异构化39-40
4.

3.1 试剂的制备39-40

4.

3.2 具体实验历程40

4.4 实验结果与讨论40-43

4.5 本章小结43-44

第五章 DXS酶催化磷酸丙糖异构化反应最佳条件的建立44-48

5.1 实验材料与仪器44

5.

1.1 实验材料44

5.

1.2 实验仪器44

5.2 DXS酶磷酸丙糖异构化活性反应条件的建立44-46
5.

2.1 各底物浓度的确立44-46

5.

2.2 系统反应时间及温度的确立46

5.3 实验结果与讨论46-47
5.

3.1 HPLC检测底物D-GAP在不同浓度下的峰面积值结果46-47

5.

3.2 DXS酶终浓度的确立47

5.

3.3 反应时间的确立47

5.4 本章小结47-48
第六章 植物提取物对DXS酶抑制活性的筛选48-57

6.1 实验材料与仪器48

6.

1.1 实验材料48

6.

1.2 实验仪器48

6.2 实验内容48-49

6.3 实验结果与讨论49-56

6.4 本章小结56-57

结论57-58
参考文献58-65
致谢65