试谈血凝素H5N1亚型高致病性禽流感病毒血凝素糖链谱在如何

论文导读：ycomplex-type和Sia2-6Galβ1-4Glc(NAc),而参与识别、结合SAa2-6Gal结构受体的糖链结构有BisectingGlcNAcandbiantennaryN-glycans,Fucosea-l,3GlcNAc(corefucose),Sia-LexandLex,β-gal,branchedandterminalmannose,terminalGlcNAc,GlcNAc,Galβ1-3GalNAca-Ser/Thr(Tn),Terminala-1,3mannose和Sia2-6Ga
摘要：探讨背景：血凝素是流感病毒囊膜表而重要的蛋白之一,在病毒侵染宿主的历程中,通过与宿主受体的识别、结合以及病毒囊膜与细胞膜的融合发挥重要的生物学功能。它既是糖结合蛋白又是糖蛋白,其寡糖链对病毒的宿主特异性、宿主范围以及病毒的毒力都有重要的影响。本探讨主要浅析与不同受体(SAa2-3Gal和SAa2-6Gal)结合的H5N1亚型禽流感病毒血凝素上寡糖链的结构及其差别。策略：通过对环氧化磁粒的修饰得到羟基化的磁性微粒,再与两种结构的寡糖(SAa2-3Gal和SAa2-6Gal)偶联,最终得到两种糖链磁性微粒复合物(SAa2-3Gal糖链磁性微粒复合物和SAa2-6Gal糖链磁性微粒复合物)。利用两种糖链磁性微粒复合物对粗提过的H5N1禽流感病毒病毒液中的血凝素分离纯化,SDS-PAGE对得到的蛋白质进行鉴定,通过凝集素芯片对血凝素上的糖链谱进行剖析；然后用PNGase F释放血凝素上的寡糖链、用sepharose CL-4B亲水树脂对其进行分离纯化,最后运用MALDI-TOF/TOF-MS对血凝素上寡糖链的精细结构进行剖析。结果：对糖链磁性微粒复合物分离纯化的血凝素进行SDS-PAGE鉴定,其分子量与文献报道的一致。通过凝集素芯片浅析血凝素上糖链的结构,结果显示SAa2-3Gal磁性微粒复合物分离纯化的H5N1亚型禽流感病毒血凝素与PHA-E、RCA120、DSA、ACA和SNA五种凝集素呈阳性信号,而SAa2-6Gal磁性微粒复合物分离纯化的H5N1亚型禽流感病毒血凝素与PHA-E、LTL、RCA120、ConA、DSA、ACA、PWM、GNA和SNA九种凝集素呈阳性信号。这表明在H5N1(DK/GD/17/08)亚型禽流感病毒血凝素上参与识别、结合SAa2-3Gal结构受体的糖链结构有Bisecting GlcNAc and biantennary N-glycans, Fucose，β-gal,GlcNAc,Galβ1-3GalNAcα-Ser/Thr(Tn), Galβ1-3GalNAc, biantennary N-glycans and tetraantennwry complex-type和Sia2-6Galβ1-4Glc(NAc),而参与识别、结合SAa2-6Gal结构受体的糖链结构有Bisecting GlcNAc and biantennary N-glycans, Fucosea-l,3GlcNAc(core fucose), Sia-Lex and Lex, β-gal, branched and terminal mannose, terminal GlcNAc, GlcNAc, Galβ1-3GalNAca-Ser/Thr(Tn), Terminala-1,3mannose和Sia2-6Galβ1-4Glc(NAc)。另外,对两种糖链磁性微粒复合物分离纯化的血凝素进行PNGsaeF酶解,得到的寡糖链利用MALDI-TOF/TOF-MS技术对其结构进行剖析,利用Bruker flexAanlysisi3.3质谱浅析软件对得到的质谱图进行浅析,结果显示两种糖链磁性微粒复合物分离纯化的血凝素上共同有着11个相同的高丰度糖链峰,且SAα2-3Gal糖链磁性微粒复合物得到的寡糖链其峰强度远高刁SAα2-6Gal糖链磁性微粒复合物得到的寡糖链,此外,除这11个相同的糖链峰以外,SAα2-3Gal糖链磁性微粒复合物分离纯化的血凝素上还有着有5个特有的低丰度糖链,在SAα2-6Gal糖链磁性微粒复合物分离纯化的血凝素上有着2个特有的低丰度糖链。结论：运用凝集素芯片与质谱技术联用的策略,对H5N1亚型禽流感病毒血凝素上寡糖链的结构进行剖析,结果显示在H5N1亚型高致病性禽流感病毒血凝素的表面,有着有两套糖链系统,这两套糖链系统在识别不同结构的受体时发挥不同的作用。本探讨为流感的预防与治疗提供了一种新的论述依据。关键词：禽流感病毒论文血凝素论文凝集素芯片论文MALDI-TOF/TOF-MS论文糖链结构论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文论文导读：51.4.3糖生物学探讨的近况25-261.5本课题探讨的目的及作用26-28第二章凝集素芯片技术浅析H5N1亚型禽流感病毒血凝素糖链谱28-442.1前言28-292.2本章实验的技术路线292.3实验器材29-322.3.1实验试剂29-302.3.2实验仪器302.3.3实验所用试剂的配制30-322.3.4实验材料322.4试验策略32-392.4.1禽流感病毒血凝素的粗提
摘要3-5
Abstract5-10
第一章 绪论10-28

1.1 糖蛋白概况10-12

1.1 糖蛋白介绍10-11

1.2 糖肽连键的类型11-12

1.2 流感病毒概述12-22

1.2.1 流感的起源及进展12-13

1.2.2 流感病毒的分类与命名13-14

1.2.3 流感病毒的形态特点和组成14-19

1.2.4 流感病毒宿主的特异性19

1.2.5 流感病毒的变异19-20

1.2.6 血凝素上寡糖链对病毒的影响20-22

1.3 凝集素芯片概述22-24

1.3.1 凝集素介绍22-23

1.3.2 凝集素芯片的进展23-24

1.4 糖生物学概况24-26

1.4.1 糖生物学的介绍24-25

1.4.2 糖生物学探讨的对象25

1.4.3 糖生物学探讨的近况25-26

1.5 本课题探讨的目的及作用26-28

第二章 凝集素芯片技术浅析H5N1亚型禽流感病毒血凝素糖链谱28-44

2.1 前言28-29

2.2 本章实验的技术路线29

2.3 实验器材29-32

2.3.1 实验试剂29-30

2.3.2 实验仪器30

2.3.3 实验所用试剂的配制30-32

2.3.4 实验材料32

2.4 试验策略32-39

2.4.1 禽流感病毒血凝素的粗提32

2.4.2 糖链磁性微粒复合物分离纯化血凝素32

2.4.3 纯化血凝素的SDS-PAGE鉴定32-34

2.4.4 玻片的环氧化修饰34

2.4.5 凝集素芯片的制备34-38

2.4.6 纯化HA蛋白的浓缩38

2.4.7 浓缩HA的Cy3荧光标记38

2.4.8 凝集素芯片的封闭38

2.4.9 凝集素芯片孵育38-39

2.4.10 数据的扫描与浅析39

2.5 实验结果与讨论39-42

2.5.1 糖链磁性微粒复合物纯化HA的SDS-PAGE结果39

2.5.2 对血凝素的初步分离39

2.5.3 糖磁粒复合物对血凝素的分离纯化39-40

2.5.4 不同糖链结构的糖磁粒复合物与血凝素的结合40

2.5.5 凝集素芯片荧光扫描结果40-41

2.5.6 数据浅析41-42

2.6 本章小结42-44

第三章 质谱技术探讨H5N1亚型禽流感病毒血凝素糖链结构44-52

3.1 引言44-45

3.2 实验器材45

3.

2.1 实验材料45

3.

2.2 实验仪器45

3.3 试验策略45-48

3.3 禽流感病毒血凝素的分离纯化45

3.4 HA蛋白溶液的除盐45-46

3.5 HA蛋白的定量46

3.6 HA上糖链的释放46

3.7 亲水树脂sepharose CL-4B纯化糖链46-47

3.8 HA上糖链的质谱剖析47-48

3.4 实验结果与讨论48-51

3.4.1 HA溶液蛋白定量48

3.4.2 H5N1禽流感病毒HA上糖链的质谱结果48-51

3.4.3 不同糖链磁性微粒复合物分离纯化的HA上糖链的差别51

3.5 本章小结51-52

全文总结52-54
英文缩略表54-55
参考文献55-60
致谢60