浅析微生物酱香型白酒发酵过程中微生物群落结构如何

论文导读：依次为：发酵底泥上层酒醅中层酒醅下层酒醅(CFU)；各醅层微生物群落的霉菌、酵母、细菌组成情况也各异。通过Biolog微平板培养法我们看到白酒发酵阶段样品微生物活性随培养时间的延长而提升。用磷脂脂肪酸(PLFAs)探讨白酒发酵阶段样品微生物群落结构,实验以样品检测到以C14-C22之间的30种PLFAs.其中16：00、16：1w7c、18：00在
摘要：本论文选用参与酱香型白酒发酵历程各阶段发酵原料为实验对象,主要包括酒曲、发酵酒醅(上、中、下三层)、窖泥和堆积酒醅。通过传统微生物培养法、微生物群落水平生理学指纹策略中的Biolog法、脂肪酸(PLFAs)图谱法和现代分子生物学中的PCR-DGGE技术共四种现代生物技术手段探讨和浅析各种样品中微生物群落结构。以传统培养策略的结果我们可以看白酒发酵各个阶段微生物数量差别显著。微生物总量大小依次为：酒曲堆积酒醅发酵酒醅。发酵酒醅各阶层微生物总量也有差别,依次为：发酵底泥上层酒醅中层酒醅下层酒醅(CFU)；各醅层微生物群落的霉菌、酵母、细菌组成情况也各异。通过Biolog微平板培养法我们看到白酒发酵阶段样品微生物活性随培养时间的延长而提升。用磷脂脂肪酸(PLFAs)探讨白酒发酵阶段样品微生物群落结构,实验以样品检测到以C14-C22之间的30种PLFAs.其中16：00、16：1w7c、18：00在各样品中均检测到,即为发酵优势菌种。PCR-DGGE探讨细菌微生物群落结构发现：发酵阶段各样品的微生物群落结构差别较显著。经过条带测定,样品中还有着着较多尚未被认识的微生物,这也说明利用基于非培养手段的分子生物学技术直接对酒曲样品总DNA浅析有助于发现新的微生物种类。实验所浅析的14种酒醅细菌群落中除了不可培养细菌未被归类外,其他主要属于厚壁菌门Firmicutes,包括乳杆菌目Lactobacillales的乳杆菌科Lactobacillaceae、芽孢杆菌目Bacillales的芽孢杆菌科Bacillaceae等类群,其中乳杆菌目占绝对优势。关键词：酒曲论文酒醅论文微生物群落浅析论文传统微生物培养法论文Biolog论文PLFAs论文PCR-DGGE论文
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ABSTRACT4-7
1 引言7-19

1. 探讨的目的及作用7-8

1.2. 白酒发酵微生物探讨进展8-10

1.2. 白酒酒曲介绍8

1.2.2. 酒醅及窖泥介绍8-9

1.2.3. 酒曲的探讨进展9-10

1.2.4. 酒醅及窖泥的探讨进展10

1.2.5. 白酒发酵微生物探讨方向10

1.3. 微生物生态学基本的探讨策略10-15

1.3. 微生物生态学探讨的传统培养法11

1.3.2. 群落水平生理学指纹策略11-12

1.3.3. 生物标记法12-13

1.3.4. 以PCR为基础的DNA指纹图谱技术13-15

1.3.4. 变性梯度凝胶电泳技术和温度梯度凝胶电泳技术13

1.3.4.2. 荧光PCR技术13-14

1.3.4.3. 单链构象多态性浅析技术14

1.3.4.4. 末端限制性片段长度浅析型技术14

1.3.4.5. 实时定量PCR技术14-15

1.3.4.6. 小结15

1.4. 酱香型白酒介绍15-17

1.4. 酱香型白酒工艺15-17

1.4.2. 酱香型白酒探讨近况17

1.5. 课题探讨内容和策略17-19

2. 传统培养策略在酱香型白酒发酵微生物群落浅析中的运用19-25
2.

1. 材料与策略19-21

2.

1. 原材料的选择与采集19

2.

1.2. 其他实验材料19

2.

1.3. 酒曲可培养微生物数量及测定19-21

2.

1.3. 培养基及配方19-20

2.

1.3.2. 实验策略20-21

2.2. 结果与浅析21-22

2.3. 小结及讨论22-25

3. CLPP法对酱香型白酒发酵微生物群落浅析中的运用25-35
3.

1. 材料与策略25-28

3.

1. 实验材料25

3.

1.2. 实验主要仪器及设备25

3.

1.3. 实验策略25-28

3.2. 结果与浅析28-32
3.2.

1. 不同样品中的微生物平均颜色变化率28-29

3.2.2. 同一样品中的微生物对不同碳源利用能力浅析29-30
3.

2.3. 不同样品对相同碳源利用能力浅析30-32

3.3. 小结及讨论32-35

4. PLFA法对酱香型白酒发酵微生物群落浅析中的运用35-43

4.

1. 材料与策略35

4.

1. 实验材料35

4.

1.2. 实验主要仪器及设备35

4.

1.

3. 实验主要试剂35

4.2. 实验策略35-36 4.

3. 数据处理36-37

4.3.

1. 磷脂脂肪酸命名原则36-37

4.3.

2. 数据浅析及处理37

4.4. 实验结果37-40

4.5. 小结及讨论40-43

5. PCR-DGGE法在酱香型白酒发酵微生物群落浅析中的运用43-53
5.

1. 材料与策略44

5.

1. 实验材料44

5.

1.2. 实验试剂及酶类44

5.

1.

3. 实验仪器和设备44

5.2. 实验策略44-47 5.2.

1. 总基因组DNA的提取44

5.2.2. 全长的16s rDNA V3区片段扩增44-45
5.

2.3. 酒醅微生物的PCR-DGGE45

5.

2.4. 电泳条带回收及克隆45-47

5.

2.4.

1. 条带回收45

5.4. 模板连接技术45-46 5.

2.4.3. 目的片段的克隆技术46-47

5.3. 数据处理47-51
5.3.

1. 样品基因组DNA提取47

5.3.

2. 样品基因组DNA的16s rDNA V3区扩增47

5.3.3. DGGE图谱浅析47-49
5.

3.

4. 优势菌种系统发育树建立49-51

5. 小结及讨论51-53 5.4.

1. 酒醅中微生物种类51-52

5.4.

2. 酒醅中微生物群落结构受发酵周期的影响52-53

6. 结论与展望53-57

6.

1. 传统浅析策略53

6.

2. Biolog法53

6.

3. PLFA法53-54

6.

4. PCR-DGGE法54

6.

5. 各种策略结果浅析比较54-55

6.6. 展望55-57
参考文献57-63
个人介绍63-64
导师介绍64-65
获得成果目录65-66
致谢66-67
附录67-70