浅议角化△Np63α表达水平与子宫颈癌细胞分化相关性
最后更新时间：2024-01-11
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论文导读：
摘要：探讨背景子宫颈癌(Cervical cancer)是严重威胁女性健康的恶性肿瘤,其病因不明确,目前认为与早婚、性生活过早及混乱、早年分娩、多产、吸烟、经济情况差、地理环境、病毒感染等因素有关,其中最主要的因素是高危型人瘤病毒(high risk-human papillomirus, HR-HPV)的慢性持续性感染,但具体分子机制尚未改善诠释清楚,一般认为与其表达的病毒癌蛋白E6、E7导致的p53、Rb蛋白的失活、端粒酶活性的异常激活密切相关。子宫颈上皮细胞癌变的重要机制之一是p53基因功能的失活,探讨证明80%子宫颈癌细胞中p53蛋白以野生型有着,由此,子宫颈癌生物治疗的一个重要对策是恢复野生型p53基因的表达,但是效果并非如预期：由于子宫颈癌细胞中HR-HPV表达的大量E6蛋白,恢复表达的野生型p53蛋白迅速被E6/E6AP大量降解。随着p53家族成员p63、p73的发现,广大学者意识到p53家族成员之一p63与上皮细胞的分化调控密切相关,可能在上皮性肿瘤(如头颈鳞癌)的发病机制中起着重要的关键性作用。作为p53家族成员,p63基因定位于3q27.29,该基因不仅功能复杂,而且亚型繁多：根据p63的不同N端、C端,主要有以下6种亚型TAp63α、TAp63β、 TAp63γ、ΔNp63α、ΔNp63β、ΔNp63γ,各种亚型的功能、相互调控机制尚不明确。目前的探讨认为p63的功能如下：①调控组织发育：探讨发现,p63与p53基因的显著不同之处是p53基因的突变诱导肿瘤形成；而p63基因的突变则导致先天性发育障碍疾病：四肢发育畸形、外胚层发育不良等。②抑制肿瘤转移：一方面,p63与Smad复合物形成复合物,抑制TGFβ诱导的肿瘤细胞转移作用,而另一方面,p63表达的丢失可以导致细胞迁移能力增强。③调控上皮细胞分化：鳞状上皮组织是由基底细胞向表层推移、分化成其他各层细胞的,主要由基底膜、基底细胞、副基底细胞、中层细胞、表层角化细胞组成,其中,基底细胞又称为储备细胞、子宫颈干细胞,兼备向鳞状细胞分化、不断增殖的潜能。而p63则是诱导基底细胞分化的重要调控基因之一。最近的探讨发现,细胞的癌变机制不仅与细胞凋亡受抑、增殖异常密切相关,还与细胞分化受阻紧密相关。与其他类型细胞的分化结局不同,鳞状细胞分化成熟后形成角化细胞(Cornification又称keratinization),而角化细胞与凋亡细胞形态特点的诸多相似性,角化又被认为是鳞状细胞的另一种凋亡形式。由此,鳞状细胞分化的任一环节受阻(如分化的关键调控基因p63表达异常)将导致细胞角化障碍而逃离死亡命运,细胞周期也将调节失控,最终可能导致细胞癌变。④其他作用：p63还在细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖、等方面起着一定的调控作用。Involucrin是上皮组织进入终末分化的早期表达的标识,基底细胞一旦进入分化,体积增大,细胞交联(cross-pnking), involucrin即开始在细胞膜、胞浆中表达。探讨还发现,Involucrin在许多上皮肿瘤中表达,且其表达水平与肿瘤细胞分化程度密切相关：在高分化的肿瘤细胞中高表达,在中低分化的肿瘤细胞中表达显著降低,可以作为癌细胞分化程度的重要标识之一。鉴于p63是上皮细胞的分化的关键性调控基因,而involucrin是上皮细胞及上皮肿瘤细胞分化程度的重要标识,本论文拟首先明确p63在子宫颈上皮组织、子宫颈癌组织中表达的亚型；其次阐明该亚型的p63在子宫颈癌组织中的表达水平及其与癌细胞分化的相关性。本探讨分为两部分：第一部分：p63在正常及癌变子宫颈组织中的表达亚型；第二部分：p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织分化程度的相关性及临床作用。第一部分：p63在正常及癌变子宫颈组织中的表达亚型目的：1.探讨p63在正常子宫颈组织中的表达部位、亚型、水平；2.探讨p63在子宫颈癌组织中的表达部位、亚型、水平；3.探讨p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型、水平。策略：选择安徽省立医院2006年4月～2010年4月收治的子宫颈癌患者134例,其中子宫颈鳞癌104例,包括Ⅰa21例、Ⅰb28例、Ⅱa55例；病理分级：G129例,G229例,G346例。子宫颈腺癌30例,包括Ⅰa6例、Ⅰb8例、Ⅱa16例；病理分级：G16例,G27例,G317例。正常子宫颈组织取自同期79例子宫肌瘤行全子宫加双附件切除患者。子宫颈癌细胞株包括MS751、ME-180、 CaSki、HeLa、SiHa、C33-A。通过p63各种亚型的特异检测抗体进行以下探讨：①免疫组化检测p63在正常子宫颈组织及子宫颈癌组织中的表达部位、亚型、水平；②通过Western Blot检测p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型及水平；③通过RT-PCR检测p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型及水平。结果：1.p63在正常子宫颈上皮组织中的表达及主要亚型通过可以检测p63所有亚型的4A4抗体浅析,发现79例正常子宫颈组织均表达p63,其表达部位在正常子宫颈鳞状上皮的基底细胞、副基底细胞中,而腺上皮、结缔组织、鳞状上皮组织的中层细胞、表层细胞中均未见p63的表达(Fig1.1)。选择79例中的10例标本进一步浅析发现,特异识别△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型的p63抗体中,仅△N亚型及α亚型抗体可以检测到p63的表达,其部位均特异表达在正常子宫颈上皮的基底细胞、副基底细胞中；而TA亚型、γ亚型的抗体检测不到p63的表达。由此,子宫颈组织中表达的p63亚型为△Np63α。2.p63在子宫颈鳞癌及腺癌组织中的表达及主要亚型分别对134例子宫颈癌组织进行浅析,发现p63在子宫颈鳞癌组织中35例表达、39例低表达、30例不表达；而p63在30例腺癌组织中均不表达。进一步浅析104例鳞癌组织中表达p63的10例标本,经特异识别△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型及所有亚型(4A4)的p63抗体检测,发现△N亚型及α亚型抗体可以检测到p63在子宫颈鳞癌组织中的表达,表明子宫颈癌组织论文导读：
中主要表达的p63亚型也是△Np63α。3.p63在在子宫颈癌细胞株中的表达通过RT-PCT检测发现6种子宫颈癌细胞株中可以检测到TA、△N亚型p63mRN段,也可以检测到α亚型、γ亚型的p63mRN段。其中以△N、α亚型p63mRNA表达为主。通过Western Blot检测发现4A4抗体可以检测到p63蛋白在MS751、ME-180、CaSki细胞中表达,而在SiHa细胞中低表达、HeLa、C33-A细胞不表达,进一步通过△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型的p63抗体检测,发现△N、α亚型p63蛋白是子宫颈癌细胞株MS751、ME-180、CaSki的主要表达亚型,进一步验证了p63在子宫颈癌细胞中的主要表达亚型是△Np63α。结论：1.p63蛋白在正常子宫颈鳞状上皮组织、子宫颈鳞癌组织、子宫颈癌细胞株中的主要表达亚型是△Np63α。2.p63蛋白在正常子宫颈腺上皮组织、子宫颈腺癌组织中不表达。第二部分p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织分化程度的相关性及临床作用目的：1.探讨p63在子宫颈鳞癌组织中的表达水平、及其与临床分期、分化程度的相关性。2.以鳞状上皮细胞分化标识involucrin为对照,探讨p63与子宫颈鳞癌组织分化程度的正相关性。策略：选择安徽省立医院2006年4月～2010年4月收治的子宫颈癌患者134例,其中子宫颈鳞癌104例,包括Ⅰa21例、Ⅰb28例、Ⅱa55例；病理分级：G129例,G229例,G346例。子宫颈腺癌30例,包括Ⅰa6例、Ⅰb8例、Ⅱa16例；病理分级：G16例,G27例,G317例。正常子宫颈组织取自同期79例子宫肌瘤行全子宫加双附件切除患者。子宫颈癌细胞株包括MS75、ME-180、 CaSki、HeLa、SiHa、C33-A。通过检测p63所有亚型的4A4抗体进行以下探讨：①通过免疫组化检测p63在高、中、低级别子宫颈鳞癌组织中的表达水平,并通过SPSS13.0浅析p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织的分化、临床分期的相关性。②免疫组化检测p63、involucrin在高、中、低级别子宫颈鳞癌组织中的表达水平；③通过Western Blot检测p63及involucrin在子宫颈癌细胞株中的表达水平；④通过免疫组化检测p63、involucrin在同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织的病理连续切片中的表达水平。结果：1.p63的表达水平与患者的临床特点、组织分化级别的相关性通过可以检测p63所有亚型的4A4抗体检测,发现p63在79例正常子宫颈组织中100%(79/79)表达阳性；104例子宫颈鳞癌组织中33.65%(35/104)的标本p63表达阳性,两者之间差别显著(p0.001)。浅析104例子宫颈鳞癌组织,发现p63在高分化、中分化、低分化组织中的表达情况分别为29/29(100%)、5/29(17.24%)、1/46(2.17%);p63在Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa期中的表达情况分别为13/21(61.90%)、10/28(35.71%)、12/55(21.82%)。2. p63、involucrin在正常及癌变子宫颈组织、宫颈癌细胞株中的表达79例正常子宫颈鳞状上皮中,Involucrin均表达在分化成熟的中层、表层鳞状上皮细胞中；而p63均表达在基底层、副基底细胞层中。对104例子宫颈鳞癌组织进行浅析,involucrin、p63在29例高分化标本中100%表达,在29例中分化标本中表达均下降,而在46例低分化标本中45例组织阴性表达。通过细胞株检测发现,involucrin与p63均在ME-180、MS751、CaSki中表达,并表达水平依次降低。3. p63、involucrin在同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织中的表达结合病理切片可以观察到疾病演变历程的优势,我们通过同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织的连续病理切片探讨,发现,10例标本中均观察到,随着子宫颈鳞癌组织的侵袭、细胞分化程度的依次降低,p63、involucrin的表达水平相应降低,并具有正相关性。结论；1.p63在子宫颈鳞癌组织中的表达显著降低,其表达水平与临床分期、分化程度密切相关。2.p63与子宫颈鳞癌组织的分化程度呈正相关性,是子宫颈鳞癌组织分化级别的另外一个分子标识。关键词：子宫颈癌论文p63论文分化论文角化论文involucrin论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要6-12
ABSTRACT12-21
符号说明21-22
第一部分22-56
前言22-26
材料与策略26-35
结果34-35
讨论35-41
结论41-42
附图表42-46
参考文献46-56
第二部分56-82
前言56-57
材料与策略57-64
结果64-65
讨论65-68
结论68-69
附图表69-74
参考文献74-82
致谢82-84
攻读学位期间发表论文及科研成果84-86
外文论文目录86-109
学位论文评阅及答辩情况表109
摘要：探讨背景子宫颈癌(Cervical cancer)是严重威胁女性健康的恶性肿瘤,其病因不明确,目前认为与早婚、性生活过早及混乱、早年分娩、多产、吸烟、经济情况差、地理环境、病毒感染等因素有关,其中最主要的因素是高危型人瘤病毒(high risk-human papillomirus, HR-HPV)的慢性持续性感染,但具体分子机制尚未改善诠释清楚,一般认为与其表达的病毒癌蛋白E6、E7导致的p53、Rb蛋白的失活、端粒酶活性的异常激活密切相关。子宫颈上皮细胞癌变的重要机制之一是p53基因功能的失活,探讨证明80%子宫颈癌细胞中p53蛋白以野生型有着,由此,子宫颈癌生物治疗的一个重要对策是恢复野生型p53基因的表达,但是效果并非如预期：由于子宫颈癌细胞中HR-HPV表达的大量E6蛋白,恢复表达的野生型p53蛋白迅速被E6/E6AP大量降解。随着p53家族成员p63、p73的发现,广大学者意识到p53家族成员之一p63与上皮细胞的分化调控密切相关,可能在上皮性肿瘤(如头颈鳞癌)的发病机制中起着重要的关键性作用。作为p53家族成员,p63基因定位于3q27.29,该基因不仅功能复杂,而且亚型繁多：根据p63的不同N端、C端,主要有以下6种亚型TAp63α、TAp63β、 TAp63γ、ΔNp63α、ΔNp63β、ΔNp63γ,各种亚型的功能、相互调控机制尚不明确。目前的探讨认为p63的功能如下：①调控组织发育：探讨发现,p63与p53基因的显著不同之处是p53基因的突变诱导肿瘤形成；而p63基因的突变则导致先天性发育障碍疾病：四肢发育畸形、外胚层发育不良等。②抑制肿瘤转移：一方面,p63与Smad复合物形成复合物,抑制TGFβ诱导的肿瘤细胞转移作用,而另一方面,p63表达的丢失可以导致细胞迁移能力增强。③调控上皮细胞分化：鳞状上皮组织是由基底细胞向表层推移、分化成其他各层细胞的,主要由基底膜、基底细胞、副基底细胞、中层细胞、表层角化细胞组成,其中,基底细胞又称为储备细胞、子宫颈干细胞,兼备向鳞状细胞分化、不断增殖的潜能。而p63则是诱导基底细胞分化的重要调控基因之一。最近的探讨发现,细胞的癌变机制不仅与细胞凋亡受抑、增殖异常密切相关,还与细胞分化受阻紧密相关。与其他类型细胞的分化结局不同,鳞状细胞分化成熟后形成角化细胞(Cornification又称keratinization),而角化细胞与凋亡细胞形态特点的诸多相似性,角化又被认为是鳞状细胞的另一种凋亡形式。由此,鳞状细胞分化的任一环节受阻(如分化的关键调控基因p63表达异常)将导致细胞角化障碍而逃离死亡命运,细胞周期也将调节失控,最终可能导致细胞癌变。④其他作用：p63还在细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖、等方面起着一定的调控作用。Involucrin是上皮组织进入终末分化的早期表达的标识,基底细胞一旦进入分化,体积增大,细胞交联(cross-pnking), involucrin即开始在细胞膜、胞浆中表达。探讨还发现,Involucrin在许多上皮肿瘤中表达,且其表达水平与肿瘤细胞分化程度密切相关：在高分化的肿瘤细胞中高表达,在中低分化的肿瘤细胞中表达显著降低,可以作为癌细胞分化程度的重要标识之一。鉴于p63是上皮细胞的分化的关键性调控基因,而involucrin是上皮细胞及上皮肿瘤细胞分化程度的重要标识,本论文拟首先明确p63在子宫颈上皮组织、子宫颈癌组织中表达的亚型；其次阐明该亚型的p63在子宫颈癌组织中的表达水平及其与癌细胞分化的相关性。本探讨分为两部分：第一部分：p63在正常及癌变子宫颈组织中的表达亚型；第二部分：p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织分化程度的相关性及临床作用。第一部分：p63在正常及癌变子宫颈组织中的表达亚型目的：1.探讨p63在正常子宫颈组织中的表达部位、亚型、水平；2.探讨p63在子宫颈癌组织中的表达部位、亚型、水平；3.探讨p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型、水平。策略：选择安徽省立医院2006年4月～2010年4月收治的子宫颈癌患者134例,其中子宫颈鳞癌104例,包括Ⅰa21例、Ⅰb28例、Ⅱa55例；病理分级：G129例,G229例,G346例。子宫颈腺癌30例,包括Ⅰa6例、Ⅰb8例、Ⅱa16例；病理分级：G16例,G27例,G317例。正常子宫颈组织取自同期79例子宫肌瘤行全子宫加双附件切除患者。子宫颈癌细胞株包括MS751、ME-180、 CaSki、HeLa、SiHa、C33-A。通过p63各种亚型的特异检测抗体进行以下探讨：①免疫组化检测p63在正常子宫颈组织及子宫颈癌组织中的表达部位、亚型、水平；②通过Western Blot检测p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型及水平；③通过RT-PCR检测p63在子宫颈癌细胞株中的表达亚型及水平。结果：1.p63在正常子宫颈上皮组织中的表达及主要亚型通过可以检测p63所有亚型的4A4抗体浅析,发现79例正常子宫颈组织均表达p63,其表达部位在正常子宫颈鳞状上皮的基底细胞、副基底细胞中,而腺上皮、结缔组织、鳞状上皮组织的中层细胞、表层细胞中均未见p63的表达(Fig1.1)。选择79例中的10例标本进一步浅析发现,特异识别△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型的p63抗体中,仅△N亚型及α亚型抗体可以检测到p63的表达,其部位均特异表达在正常子宫颈上皮的基底细胞、副基底细胞中；而TA亚型、γ亚型的抗体检测不到p63的表达。由此,子宫颈组织中表达的p63亚型为△Np63α。2.p63在子宫颈鳞癌及腺癌组织中的表达及主要亚型分别对134例子宫颈癌组织进行浅析,发现p63在子宫颈鳞癌组织中35例表达、39例低表达、30例不表达；而p63在30例腺癌组织中均不表达。进一步浅析104例鳞癌组织中表达p63的10例标本,经特异识别△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型及所有亚型(4A4)的p63抗体检测,发现△N亚型及α亚型抗体可以检测到p63在子宫颈鳞癌组织中的表达,表明子宫颈癌组织论文导读：
中主要表达的p63亚型也是△Np63α。3.p63在在子宫颈癌细胞株中的表达通过RT-PCT检测发现6种子宫颈癌细胞株中可以检测到TA、△N亚型p63mRN段,也可以检测到α亚型、γ亚型的p63mRN段。其中以△N、α亚型p63mRNA表达为主。通过Western Blot检测发现4A4抗体可以检测到p63蛋白在MS751、ME-180、CaSki细胞中表达,而在SiHa细胞中低表达、HeLa、C33-A细胞不表达,进一步通过△N亚型、TA亚型、α亚型、γ亚型的p63抗体检测,发现△N、α亚型p63蛋白是子宫颈癌细胞株MS751、ME-180、CaSki的主要表达亚型,进一步验证了p63在子宫颈癌细胞中的主要表达亚型是△Np63α。结论：1.p63蛋白在正常子宫颈鳞状上皮组织、子宫颈鳞癌组织、子宫颈癌细胞株中的主要表达亚型是△Np63α。2.p63蛋白在正常子宫颈腺上皮组织、子宫颈腺癌组织中不表达。第二部分p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织分化程度的相关性及临床作用目的：1.探讨p63在子宫颈鳞癌组织中的表达水平、及其与临床分期、分化程度的相关性。2.以鳞状上皮细胞分化标识involucrin为对照,探讨p63与子宫颈鳞癌组织分化程度的正相关性。策略：选择安徽省立医院2006年4月～2010年4月收治的子宫颈癌患者134例,其中子宫颈鳞癌104例,包括Ⅰa21例、Ⅰb28例、Ⅱa55例；病理分级：G129例,G229例,G346例。子宫颈腺癌30例,包括Ⅰa6例、Ⅰb8例、Ⅱa16例；病理分级：G16例,G27例,G317例。正常子宫颈组织取自同期79例子宫肌瘤行全子宫加双附件切除患者。子宫颈癌细胞株包括MS75、ME-180、 CaSki、HeLa、SiHa、C33-A。通过检测p63所有亚型的4A4抗体进行以下探讨：①通过免疫组化检测p63在高、中、低级别子宫颈鳞癌组织中的表达水平,并通过SPSS13.0浅析p63的表达水平与子宫颈鳞癌组织的分化、临床分期的相关性。②免疫组化检测p63、involucrin在高、中、低级别子宫颈鳞癌组织中的表达水平；③通过Western Blot检测p63及involucrin在子宫颈癌细胞株中的表达水平；④通过免疫组化检测p63、involucrin在同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织的病理连续切片中的表达水平。结果：1.p63的表达水平与患者的临床特点、组织分化级别的相关性通过可以检测p63所有亚型的4A4抗体检测,发现p63在79例正常子宫颈组织中100%(79/79)表达阳性；104例子宫颈鳞癌组织中33.65%(35/104)的标本p63表达阳性,两者之间差别显著(p0.001)。浅析104例子宫颈鳞癌组织,发现p63在高分化、中分化、低分化组织中的表达情况分别为29/29(100%)、5/29(17.24%)、1/46(2.17%);p63在Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa期中的表达情况分别为13/21(61.90%)、10/28(35.71%)、12/55(21.82%)。2. p63、involucrin在正常及癌变子宫颈组织、宫颈癌细胞株中的表达79例正常子宫颈鳞状上皮中,Involucrin均表达在分化成熟的中层、表层鳞状上皮细胞中；而p63均表达在基底层、副基底细胞层中。对104例子宫颈鳞癌组织进行浅析,involucrin、p63在29例高分化标本中100%表达,在29例中分化标本中表达均下降,而在46例低分化标本中45例组织阴性表达。通过细胞株检测发现,involucrin与p63均在ME-180、MS751、CaSki中表达,并表达水平依次降低。3. p63、involucrin在同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织中的表达结合病理切片可以观察到疾病演变历程的优势,我们通过同时具备正常子宫颈鳞状上皮组织、分化程度由高到低的子宫颈鳞癌组织的连续病理切片探讨,发现,10例标本中均观察到,随着子宫颈鳞癌组织的侵袭、细胞分化程度的依次降低,p63、involucrin的表达水平相应降低,并具有正相关性。结论；1.p63在子宫颈鳞癌组织中的表达显著降低,其表达水平与临床分期、分化程度密切相关。2.p63与子宫颈鳞癌组织的分化程度呈正相关性,是子宫颈鳞癌组织分化级别的另外一个分子标识。关键词：子宫颈癌论文p63论文分化论文角化论文involucrin论文
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ABSTRACT12-21
符号说明21-22
第一部分22-56
前言22-26
材料与策略26-35
结果34-35
讨论35-41
结论41-42
附图表42-46
参考文献46-56
第二部分56-82
前言56-57
材料与策略57-64
结果64-65
讨论65-68
结论68-69
附图表69-74
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致谢82-84
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