试述大分子中药大分子活性成分示踪及鹿茸蛋白示范性中国

论文导读：质混合物的离体与在体吸收历程。通过本策略的活性示踪，确定其是否能够吸收入血及吸收入血的蛋白种类。本探讨的最大作用在于，通过本探讨建立稳定的实验手段，以推广到所有中药中的蛋白质大分子的探讨中，解决中药蛋白口服能否被吸收的不足，必将为揭示中药大分子作用机理做出巨大贡献。关键词：中药论文大分
摘要：传统中药多为口服给药，口服后，中药中的大分子物质，如蛋白质、多糖等，经过体内的生物降解与修饰，发生一系列的变化。由于大分子结构变化复杂、同源背景噪音高、检测手段有限等理由，至今尚没有合适的策略对大分子的中药成分进行活性示踪和综合浅析。由此，现代医药学探讨大多认为，蛋白质类药物是以氨基酸的形式吸收，在体内不具有生物学活性，这与中医千百年的临床实践相违背，同时，探讨策略的限制又影响了这类药物的现发。由此，对中药大分子整体水平上作用机制及生物学活性的探讨显得尤为重要。本探讨首先提取鹿茸中的大分子蛋白质混合物，用异硫氰酸荧光素对其进行非特异性荧光标记（以下简称FITC-PE），使FITC-PE可在488nm下被激发出绿色荧光，通过与人工胃液及人工肠液作用，证明人工胃液及人工肠液对FITC-PE的荧光强度及蛋白含量都有一定的削减，加大给药量可减轻这种破坏；其次通过半离体的肠囊外翻实验证明，分子量小于45KD的FITC-PE可透过肠粘膜吸收；然后通过口服整体实验在血液中检测到大量荧光信号，可以说明，FITC-PE可以以胃肠道吸收入血，以而发挥药效学作用；最后将血液中荧光物质分离进行非变性蛋白电泳，结合激光扫描共聚焦显微镜观察电泳胶块，将含有荧光蛋白的胶块酶解、纯化，通过蛋白质组学策略得到氨基酸组成序列，并进行数据库搜索，以而得知吸收入血的蛋白种类。本实验结合了生物化学、药理学、生物光子学、蛋白质组学等学科的关键技术建立了中药中蛋白类大分子物质的活性示踪策略，探讨了未知组分的鹿茸蛋白质混合物的离体与在体吸收历程。通过本策略的活性示踪，确定其是否能够吸收入血及吸收入血的蛋白种类。本探讨的最大作用在于，通过本探讨建立稳定的实验手段，以推广到所有中药中的蛋白质大分子的探讨中，解决中药蛋白口服能否被吸收的不足，必将为揭示中药大分子作用机理做出巨大贡献。关键词：中药论文大分子论文鹿茸蛋白提取物论文荧光标记论文活性示踪论文
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Abstract5-8
第1章 综述8-18
1 中药大分子荧光标记探针选择9-14

1.1 中药大分子蛋白质的荧光标记9-12

1.2 中药论文导读：成像技术152.5双光子激发荧光各向异性度成像技术152.6荧光关联谱技术15-162.7二次谐波成像技术163中药大分子结构鉴定中常用技术-蛋白质组学相关技术16-183.1双向凝胶电泳技术163.2高效液相色谱法16-173.3用于蛋白质定量和比较探讨的相关质谱技术17-18第2章荧光标记鹿茸蛋白提取物胃肠道吸收离体实验探讨18-251材料
大分子多糖的荧光标记12-14
2 中药大分子荧光标记中的常用检测技术14-16

2.1 荧光显微镜14

2.2 激光扫描共聚焦显微镜成像技术14-15

2.3 荧光共振能量转移技术15

2.4 双光子激发荧光成像技术15

2.5 双光子激发荧光各向异性度成像技术15

2.6 荧光关联谱技术15-16

2.7 二次谐波成像技术16

3 中药大分子结构鉴定中常用技术-蛋白质组学相关技术16-18

3.1 双向凝胶电泳技术16

3.2 高效液相色谱法16-17

3.3 用于蛋白质定量和比较探讨的相关质谱技术17-18

第2章 荧光标记鹿茸蛋白提取物胃肠道吸收离体实验探讨18-25
1 材料与策略18-20
2 结果20-23

2.1 鹿茸提取物的蛋白含量测定及荧光标记20

2.2 鹿茸提取物及 FITC-PE 的蛋白组分确定及分子量浅析20-21

2.3 FITC-PE 在人工胃液及人工肠液中的稳定性浅析21-22

2.4 肠囊外翻实验观察 FITC-PE 透过肠粘膜吸收情况22-23

3 讨论23-25
第3章 荧光标记鹿茸蛋白提取物口服整体实验探讨25-38
1 材料与策略25-27
2 结果27-35

2.1 鹿茸提取物的蛋白含量测定及荧光标记27

2.2 鹿茸提取物及 FITC-PE 的蛋白组分确定及分子量浅析27-28

2.3 FITC-PE 给药后血清各时间点荧光强度28-29

2.4 FITC-PE 及 FITC 给药后血清中荧光物质的扩散系数测定29

2.5 FITC-PE-serum 电泳后各胶块荧光强度和扩散系数的测定29

2.6 高效液相色谱法分离血清中的荧光物质29-31

2.7 样品

1、2 号的 PMF 浅析31-32

2.8 样品

1、2 号的 PFF 谱图浅析32-35

2.9 NCBI 检索氨基酸序列所归属的蛋白35
3 讨论35-38
第4章 结论38-40
参考文献40-44
作者介绍及在学期间所取得科研成果44-45
致谢45