试述细胞CHO细胞微核全自动化检测技术

论文导读：
摘要：微核实验是一种以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒性的毒理学浅析策略,能经济、简便、准确地检测各种理化因子对细胞的遗传损伤,在化合物遗传毒性检测方面发挥着重要作用。传统微核实验耗时费力、检测结果易受主观因素影响,很难满足快速、大量检测化合物的需要,而基于仪器的微核自动化检测技术可以达到快速、高通量检测化合物的遗传毒性的目的。本论文选择了国内外毒理学检测常用的细胞株之一中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)作为材料,利用流式细胞仪和激光扫描细胞仪来探讨体外微核的全自动检测技术,旨在建立CHO细胞体外微核的流式细胞仪自动化检测策略和激光扫描细胞仪自动化检测策略,以达到快速准确地进行化合物遗传毒性检测的目的。流式细胞仪策略利用体外微核浅析试剂盒对染色体断裂剂环磷酰胺和非整倍体剂秋水仙碱引起的CHO细胞微核进行了浅析和探讨,并与传统的显微镜检测策略相比较,参考美国国家临床实验室实验室标准化委员会EP9-A文件的策略,对两种策略的微核检测结果进行离群值检验、取值范围判断以及回归浅析。探讨结果显示,流式细胞仪自动化检测策略和传统的显微镜检测策略具有良好相关性,由此建立了一种CHO细胞体外微核的流式细胞仪自动化检测策略,为了考察该策略的可靠性和适用性,并将所建立的流式细胞仪策略运用于食品添加剂、化妆品(染发剂)、药品、农药、水体、重金属离子、卷烟烟气等诱发的CHO细胞微核检测,同时与传统的微核显微镜检法相比较浅析。结果表明,二种策略的测定值无显著离群值,相关性良好,说明该策略可以适于食品添加剂、化妆品(染发剂)、药品、农药、水体、重金属离子、卷烟样品总粒相物诱发的体外细胞遗传损伤的检测,结果准确可靠。激光细胞仪策略结合细胞胞质分裂阻断微核技术,采取两种荧光染料,对环磷酰胺(CP)诱导的CHO细胞微核进行了探讨,并将该策略与传统的微核显微镜检法进行比较浅析,结果显示两种策略的测定值无显著离群值,二者相关性良好,由此建立了一种CHO细胞体外微核的激光扫描细胞仪自动化检测策略,并利用该策略对13种不同类型的物质处理的CHO细胞进行微核检测,同时与显微镜策略相比较,探讨结果表明该策略评价结果稳定可靠,能够快速高通量检测多种类型的化合物所诱导的微核。本探讨所建立的体外细胞微核流式细胞仪策略和激光扫描细胞仪策略最大的优点是策略简便、检测速度快、准确性高,可适用性强,为体外细胞微核的自动化检测策略的探讨提供参考,同时也为化合物诱变性的筛选、食品毒理学检测和环境污染检测等提供了快速检测策略。关键词：CHO细胞微核论文自动化论文流式细胞仪论文激光扫描细胞仪论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-6
ABSTRACT6-11
第一章 绪论11-28

1.1 微核的形成机理11-15

1.2 微核实验材料15-17

1.3 微核实验策略17-22

1.3.1 常规微核实验17

1.3.2 细胞分裂阻滞微核浅析法17

1.3.3 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)17-18

1.3.4 CREST染色免疫荧光微核浅析技术18-19

1.3.5 原位启动DNA合成(Primed In Situ DNA Synthesis,PRINS)微核浅析技术19

1.3.6 自动化检测技术19-22

1.4 数据浅析策略介绍22-25

1.4.1 EP9-A策略浅析介绍23

1.4.2 数据浅析步骤23-25

1.5 立题依据25-28

第二章 CHO细胞微核的流式细胞仪全自动检测技术探讨28-41

2.1 检测原理28-29

2.2 材料与策略29-33

2.1 仪器设备29

2.2 细胞、试剂与材料29-30

2.3 实验策略30-33

2.3 结果与浅析33-39

2.3.1 流式图像浅析33-34

2.3.2 微核计数结果34-35

2.3.3 离群值检验35-38

2.3.4 取值范围判断38

2.3.5 线性回归浅析38

2.3.6 两种策略测定值比较38-39

2.4 小结39-41

第三章 CHO细胞微核的流式细胞仪自动检测技术的运用探讨41-70

3.1 材料与策略41-45

3.

1.1 仪器与材料41

3.

1.2 试剂及配制41-44

3.

1.3 实验策略44-45

3.2 结果浅析45-69
3.

2.1 食品添加剂和保鲜剂诱发微核的检测结果45-48

3.

2.2 农药诱发微核的检测结果48-51

3.

2.3 药品诱发微核的检测结果51-54

3.

2.4 重金属离子诱发微核的检测结果54-58

3.

2.5 染发剂诱发微核的检测结果58-61

3.

2.6 水体诱发微核的检测结果61-65

3.

2.7 卷烟烟气总粒相物诱发微核的检测结果65-69

3.3 小结69-70
第四章 CHO细胞微核的激光扫描细胞仪自动检测技术探讨70-77

4.1 材料与策略70-72

4.

1.1 细胞与试剂70

4.

1.2 主要器材70

4.

1.3 策略70-72

4.2 结果与浅析72-76
4.

2.1 细胞扫描图像浅析72-73

4.

2.2 双核细胞和双核细胞微核的识别73-74

4.

2.3 微核计数结果74-75

4.

2.4 两种策略的线性回归浅析75

4.

2.5 两种策略测定结果比较75-76

4.3 小结76-77
第五章 CHO细胞微核的LSC全自动检测技术的运用探讨77-87

5.1 材料与策略77-79

5.

1.1 主要器材和仪器77

5.

1.2 细胞与试剂77-78

5.

1.3 溶液配制78

5.

1.4 策略78-79

5.2 结果浅析79-86
5.

2.1 LSC策略探讨不同类型物质处理的CHO细胞微核结果浅析79-86

5.3 小结86-87
第六章 总结与展望87-90

6.1 总结87-89

6.2 展望89-90

参考文献90-97
致谢97-98
附录A 攻读硕士期间发表论文目录98