简谈中国少数民族基因组DNA样本库建立和CYP2D6在维吾尔族人群中多态性分布规律-学报

论文导读：
摘要：[目的与作用]药物通常是和特定的靶点结合而产生药物效应,由此药物效应与靶部位的药物浓度有密切的联系,而靶部位的药物浓度又与血药浓度有着着动态平衡。血药浓度不仅取决于药物剂量,而且还与各种药物代谢动力学参数密切相关。由此如能了解个体或群体的药物代谢动力学参数,就能有效预测靶部位的药物浓度,使个体化给药成为可能。在各种药物动力学参数中,药物的代谢速率是影响血药浓度的最主要因素,而药物的代谢速率和代谢方式则是由特定的药物代谢酶所决定的。细胞色素氧化酶P450是人类肝脏中一种重要药物代谢酶系,能代谢多种内源性底物、药物和外源性化合物,是目前探讨最多的药物代谢反应的第I相酶,其代谢的药物约占肝脏代谢药物的40%。CYP2D6是细胞色素氧化酶P450酶系中的一个重要成员,是最先被发现具有基因多态性的药物代谢酶,也是迄今为止发现最具有遗传多态性特点的代谢酶。已发现CYP2D6有70多种突变基因,参与代谢了临床上20%-25%的处方药物,而且CYP2D6基因多态性具有很大的种族差别,其多态性在不同种族之间呈多元化的分布。经科学探讨证明,相同剂量的药物在不同种族、不同民族,甚至是不同个体之间的代谢是不同的,这种代谢差别性是药物毒性及不良反应的主要因素,而药物代谢酶基因遗传多态性是这些不良的医疗效应产生的主要内在因素之一。本探讨在建立中国少数民族基因组DNA样本库,保护现有少数民族遗传资源基础上,利用维吾尔族基因组DNA样本库,通过现代分子生物学技术,对药物代谢酶基因CYP2D6在维吾尔族人群中的多态性分布规律进行检测,以而为了解各民族药物代谢水平的差别,优化治疗剂量,减少药物不良反应奠定充分实验基础。[探讨策略]在民族大学新入学学生中,通过问卷调查,筛选三代以内无外族通婚史的少数民族健康成年人,在知情同意的原则下,按照临床采血标准进行采血,通过非离心柱法提取全血基因组DNA。按照人类遗传资源标准编码统一编号,并通过琼脂糖电泳及紫外分光光度计测定,剔除断裂及降解的DNA,剔除纯度较低样本,超低温保存,建立了中国少数民族基因组DNA样本库。目前对CYP2D61-5号外显子实验已经就绪,本实验浅析CYP2D66-9号外显子突变情况及多态性分布规律。以维吾尔族人群全基因组DNA为模板扩增CYP2D66-9号外显子,采取直接测序法对各样本进行了序列测定,利用生物信息学软件对突变位点进行筛查,并对突变位点的多态性分布规律进行小规模扫描。在此基础之上,通过采取点突变PCR实验策略以CYP2D6CDS为模板获得了2444-2445insG、2456GA、4124GC的三个突变位点,并采取双酶切、链接和转化实验构建了三个突变位点的真核表达质粒。[探讨结果]1.中国少数民族DNA样本库的建立共采集血液样本1800例,其中包括汉族501例、维吾尔族145例。初步建成包括朝鲜族,蒙古族,傣族,哈萨克族,维族,苗族,回族,藏族,土家族,彝族,侗族,羌族,壮族,瑶族,德昂族,纳西族,锡伯族,白族,柯尔克孜,满族,哈尼族,布依族,仡佬族,畲族,黎族,水族,阿昌族,汉族,乌孜别克族,裕固族等37个民族的1494个基因组DNA样本。2.CYP2D6基因在维吾尔人群中的突变位点筛查我们在中国维吾尔族人群中对CYP2D6外显子6-9筛查中得到2个已报导的等位基因型和5个未报道的等位基因型。已报导的等位基因分别是CYP2D6*2和CYP2D6*10D,它们的分布频率分别为10%和15%。5个未报道的新的等位基因型,其分布频率介于5%到10%之间。3.CYP2D6突变位点的构建采取点突变策略,利用PCR技术,以pEGFP-N1为载体,成功构建了CYP2D6CDS和2444-2445insG、2459GA、4124GC三个突变位点的真核表达系统。[结论]1.中国少数民族基因组DNA样本库初步成功建立。2.CYP2D6基因在中国维吾尔族人群分布频率与该基因已报道的其他民族中分布特点有着显著差别。3.构建了CYP2D6CDS和2444-2445INSG、2459GA、4124GC三个突变位点的真核表达系统。关键词：CYP2D6论文PCR论文遗传多态性论文真核表达系统论文药物代谢论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要6-9
ABSTRACT9-13
第一章 药物代谢酶基因CYP2D6的国内外探讨进展13-22

一、CYP2D6基因及其编码酶所代谢的底物13-14

二、CYP2D6基因多态性14

三、CYP2D6多态性的分子机制14-17

四、CYP2D6基因多态性在中国少数民族中的分布17-18

五、CYP2D6基因多态性与疾病的易感性18-20

六、结语和展望20-22

第二章 人全血基因组DNA样本库的建立22-30
第一节 样本的选择及血液的采集22-23

一、实验仪器及试剂22

二、探讨对象的选取22-23

三、血液采集23

四、实验结果23

第二节 人全血基因组DNA样本库的建立23-29

一、实验仪器及试剂23-24

二、实验策略24-25

(一)、人全血基因组DNA的提取24

(二)、DNA纯度、盐度及浓度的测定24-25

三、实验结果25-29

(一)、琼脂糖凝胶电泳鉴定人全血基因组DNA25-26

(二)、部分基因组DNA纯度、盐度及浓度的测定结果26-27

(三)、基因组DNA样本量统计27-28

(四)、基因组DNA样本库的建立28-29

第三节 讨论29-30
第三章 CYP2D6基因在维吾尔人群中的突变位点筛查30-49
第一节 生物信息学浅析30-35

一、CYP2D6基因的染色体定位30

二、CYP2D6基因全序列、外显子和内含子信息30-32

三、CYPD6酶切位点浅析32-33

四、CYP2D6基因编码蛋白质信息33

五、CYP2D6基因编码蛋白质的MOTIF和DOMAIN浅析33-34

六、CYP2D6基因编论文导读：445insG、2459G>A、4124G>CPGR反应条件及反应系统55-59第三节实验结果59-67第四节小结67第五节讨论67-70参考文献70-76附录76-91附录1.少数民族遗传信息调查表76-77附录2知情同意书样版77-79附录3.中国少数民族血样DNA收集整理保存技术规程79-83附录

4.测序图谱及与野生型序列比对结果83-91硕士期间发表的学术论文目录9

码蛋白质的亲疏水性浅析34-35
第二节 CYP2D6基因部分外显子序列的扩增35-41

一、实验材料35-38

二、实验策略38-40

三、实验结果40-41

第三节 CYP2D6突变位点筛查41-43

一、实验材料41

二、实验策略41

三、实验结果41-43

第四节 小结43-46
第五节 讨论46-49
第四章 CYP2D6基因突变位点的构建49-70
第一节 实验材料、仪器及试剂49-51

1. 实验材料49

2. 实验仪器49-50

3. 实验试剂50-51

第二节 实验策略51-59

(一)、CYP2D6 CDS PCR反应条件及反应系统51-55

(二）、定点突变2444-2445 insG、2459G>A、4124G>C PGR反应条件及反应系统55-59
第三节 实验结果59-67
第四节 小结67
第五节 讨论67-70
参考文献70-76
附录76-91
附录

1.少数民族遗传信息调查表76-77

附录2 知情同意书样版77-79
附录

3.中国少数民族血样DNA收集整理保存技术规程79-83

附录

4.测序图谱及与野生型序列比对结果83-91

硕士期间发表的学术论文目录91-92
致谢92-93