谈述重庆产沼水蛙（Hylaranaguentheri）皮肤分泌抗菌肽分离纯化及性质-

论文导读：粗提物的分离纯化28-313.2.2蛋白质含量的测定313.2.3分子量的测定31-323.3讨论32-334沼水蛙的皮肤分泌抗菌肽的性质探讨33-424.1材料与策略33-354.1.1主要仪器与设备334.1.2主要材料与试剂334.1.3策略33-354.2结果35-404.2.1最小抑菌浓度35-364.2.2不同温度的影响364.2.3不同pH的影响36-374.2.4金属离子对抗菌
摘要：近年因病原性细菌耐药性日趋严重，迫切需要以各种自然资源中寻找新的抗菌药物；因两栖类抗菌肽具有分子量小、水溶性好、抗原性低、抗菌作用强等优点，由此自然地引起人们的关注，并作为筛选抗菌药物的重要探讨对象。当前的探讨表明，两栖类抗菌肽除具有抗菌作用外，还有抗病毒、抗肿瘤、溶血等作用；因其结构不同，可归为3类：线性α-螺旋多肽、环性肽和含10～13个氨基酸残基长度的多肽；目前已发现抗菌肽有很多家族，如Magainin家族、Aurein家族、Bombinin家族、Bombinin-pke家族、Brevinin家族等；抗菌肽家族不同，其生物活性也不同；它们杀菌主要通过膜裂解或膜不裂解机制完成；且两栖类抗菌肽已广泛地运用到临床医药、食品保鲜防腐、农业生产等领域。在本探讨中，采取麻醉法、去甲肾上腺素注射法、电击法、剥皮浸提法等四种策略对沼水蛙、中华蟾蜍和蟾蜍卵的分泌物进行了提取，并检测了其抗菌活性和蛋白酶抑制剂活性，结果显示，麻醉法提取的沼水蛙皮肤分泌物具有抗菌活性，无蛋白酶抑制活性；其余实验样品均无这两种活性。重点对重庆采集的沼水蛙的皮肤分泌物中的抗菌肽进行了分离、纯化和鉴定，包括：通过高效液相色谱仪C-18和C-4柱两步色谱法，以沼水蛙皮肤分泌物中分离纯化出两种分子量约为1215.46Da和1704.73Da的抗菌肽A、B。皆显示单一色谱峰；其蛋白质含量分别为1.115mg/ml和1.955mg/ml，对温度、酸度、金属离子、抑制剂均具有较好的耐受性，对金葡萄球菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌都有良好的抗菌活性；且当其浓度分别为13μg/ml和24μg/ml时就能有效地杀灭啤酒酵母菌，但对青霉没有作用；它们均无胰蛋白酶水解活性、胰蛋白酶抑制剂活性、凝血活性、抗凝血活性，但有轻微的溶栓活性；抗菌肽A无溶血活性，但抗菌肽B有轻微的溶血活性，当其浓度达到154μg/ml时，溶血率为50%。关键词：两栖类动物论文抗菌肽论文生物学性状论文
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ABSTRACT6-8
英文缩写一览表8-12
1 引言12-16

1.1 探讨目的和作用12-13

1.2 主要探讨内容13-15

1.2.1 粗提物的制备13

1.2.2 沼水蛙皮肤分泌抗菌肽的分离纯化13

1.2.3 沼水蛙皮肤分泌抗菌肽的性质探讨13-15

1.3 探讨技术路线15-16

2 沼水蛙、中华蟾蜍及其卵的抗菌肽粗提物的定性测定16-26

2.1 材料与策略16-21

2.

1.1 主要仪器与设备16

2.

1.2 主要材料与试剂16-17

2.

1.3 策略17-21

2.2 结果21-24

2.1 不同样品在不同提取策略下的抗菌活性21-23

2.2 沼水蛙、中华蟾蜍及其卵粗提物的蛋白酶抑制剂活性的测定23

2.3 沼水蛙皮肤分泌粗提物的抑菌活性23-24

2.4 沼水蛙、中华蟾蜍及其卵抗菌肽粗提物的收获率24

2.3 讨论24-26

3 沼水蛙的皮肤分泌抗菌肽的分离纯化26-33

3.1 材料与策略26-28

3.

1.1 主要仪器与设备26

3.

1.2 主要材料与试剂26

3.

1.3 策略26-28

3.2 结果28-32
3.

2.1 ABP 粗提物的分离纯化28-31

3.

2.2 蛋白质含量的测定31

3.

2.3 分子量的测定31-32

3.3 讨论32-33
4 沼水蛙的皮肤分泌抗菌肽的性质探讨33-42

4.1 材料与策略33-35

4.

1.1 主要仪器与设备33

4.

1.2 主要材料与试剂33

4.

1.3 策略33-35

4.2 结果35-40
4.

2.1 最小抑菌浓度35-36

4.

2.2 不同温度的影响36

4.

2.3 不同 pH 的影响36-37

4.

2.4 金属离子对抗菌活性的影响37

4.

2.5 抑制剂、变性剂对抗菌活性的影响37-38

4.

2.6 抗菌肽 A、B 的热稳定性38

4.

2.7 胰蛋白酶水解活性38-39

4.

2.8 胰蛋白酶抑制剂活性39

4.

2.9 溶血活性的测定39

4.

2.10 凝血活性的测定39

4.

2.11 抗凝血活性的测定39

4.

2.12 溶栓活性的测定39-40

4.3 讨论40-42
5 全文小结42-43
6 文献综述43-53

6.1 两栖类皮肤抗菌肽的组织学分布43-44

6.2 生物学活性44-45

6.

2.1 抗细菌作用44

6.

2.2 抗病毒作用44

6.

2.3 抗肿瘤作用44-45

6.

2.4 溶血活性45

6.

2.5 其他活性45

6.3 理化性质45

6.4 家族分类45-46

6.5 分子结构46-47

6.6 杀菌机制47-48

6.1 膜裂解机制47-48

6.2 膜不裂解机制48

6.7 运用价值48

6.7.1 临床医药方面48

6.7.2 食品保鲜防腐方面48

6.7.3 农业生产方面48

6.8 探讨难点48-50

6.8.1 溶血毒性49

6.8.2 免疫毒性49

6.8.3 生理副作用49-50

6.8.4 体内不稳定性50

6.9 基因工程的探讨50-51

6.9.1 化学修饰50-51

6.9.2 天然两栖类抗菌肽基因的克隆与表达51

6.10 探讨展望51-53

参考文献53-61
作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录、科研情况61-62
致谢62