阐释单壁碳纳米管功能化及其用于转载三种siRNA抗乳癌细胞初步-学年

论文导读：nMsiRNA浓度下72h抑制率达到44.53%。通过本课题的探讨发现,通过DSPE-PEG-Amine的功能化和Sulfo-LC-SPDP的交联作用,siRNA能够高效率结合到SWNT载体上。这种SWNT-siRNA在转染B-Cap-37时,浓度高于60nM时能取得较高的转染效率。利用SWNT载体转染三个乳腺癌相关基因的siRNA,能够有效的对乳腺癌细胞产生增殖抑制123下一页
摘要：单壁碳纳米管(single-wall carbon nanotube, SWNT)是一种结构规整、性质稳定的纳米材料。尺寸合适的SWNT能够通过内吞进入细胞内,具有药物载体的潜质。同时,SWNT对肿瘤组织具有靶向性,在肿瘤药物转载上具有显著优势。siRNA干扰能够有效地沉默肿瘤中过度表达的基因,中断肿瘤发生进展中的异常信号传递,以而实现对肿瘤的抑制,是当前肿瘤治疗的热点。本探讨拟将SWNT与siRNA连接,利用SWNT的穿膜能力将siRNA载入细胞内发挥作用。首先超声处理,利用DSPE-PEG-Amine对SWNT进行功能化,降低SWNT的聚集。而后,通过异双官能团交联剂sulfo-LC-SPDP将siRNA与功能化的SWNT连接,形成SWNT-siRNA结合物(SWNT-siRNA)。利用FITC荧光标记的siRNA的示踪作用,测定SWNT-siRNA对肿瘤细胞转染的转染效率。最后,在SWNT载体上连接SURVIVIN、MDM2和β-CATENIN特异性的siRNA,对乳腺癌B-Cap-37细胞作用,通过MTT法检测对细胞的增殖抑制效果和通过Annexin V/PI双染法检测对细胞凋亡的推动效果。近红外光谱测定得出功能化后的SWNT载在水中的浓度为50mg/L。该SWNT与siRNA连接,效率为83.55%。形成的SWNT-siRNA对B-Cap-37细胞转染,60nM以上取得较好的转染效率,100nM时达到82.43%。细胞毒性检测显示,SWNT载体无显著细胞毒性,对细胞增殖的抑制率均在10%以下。三个乳腺癌相关基因的SWNT-siRNA对B-Cap-37细胞均起到增殖抑制作用和推动凋亡的作用,其中,SWNT-siRNA-SURVIVIN对细胞凋亡的推动效果最显著,100nM siRNA浓度下48h凋亡率达到39.42%；SWNT-siRNA-MDM2对细胞增殖的抑制效果最显著,101.25nM siRNA浓度下72h抑制率达到44.53%。通过本课题的探讨发现,通过DSPE-PEG-Amine的功能化和Sulfo-LC-SPDP的交联作用,siRNA能够高效率结合到SWNT载体上。这种SWNT-siRNA在转染B-Cap-37时,浓度高于60nM时能取得较高的转染效率。利用SWNT载体转染三个乳腺癌相关基因的siRNA,能够有效的对乳腺癌细胞产生增殖抑制论文导读：111.2碳纳米管在药物转导中利用的探讨背景11-191.2.1生物用碳纳米管的功能化11-141.2.2碳纳米管的毒性14-161.2.3碳纳米管对生物大分子的运载作用16-171.2.4碳纳米管的体内分布和半衰期17-191.2.5碳纳米管的体内靶向及肿瘤的初步治疗191.3乳腺癌的发生及其相关基因19-201.3.1SURVIVIN基因在乳腺癌细胞中的作用19-201
和推动凋亡的作用。关键词：单壁碳纳米管论文乳腺癌论文SURVIVN论文MDM2论文β-CATENIN论文
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Abstract6-9
第1章 绪论9-24

1.1 引言9-11

1.2 碳纳米管在药物转导中利用的探讨背景11-19

1.2.1 生物用碳纳米管的功能化11-14

1.2.2 碳纳米管的毒性14-16

1.2.3 碳纳米管对生物大分子的运载作用16-17

1.2.4 碳纳米管的体内分布和半衰期17-19

1.2.5 碳纳米管的体内靶向及肿瘤的初步治疗19

1.3 乳腺癌的发生及其相关基因19-20

1.3.1 SURVIVIN基因在乳腺癌细胞中的作用19-20

1.3.2 β-catenin基因在乳腺癌发生中的作用20

1.3.3 MDM2基因在乳腺癌中的作用20

1.4 本探讨的作用、目标和思路20-24

1.4.1 本探讨的作用与目标20-21

1.4.2 本探讨的思路21-24

第2章 SWNT-siRNA转载药物的制备24-33

2.1 引言24

2.2 材料和策略24-28

2.1 实验试剂24-25

2.2 实验器材25

2.3 试剂配制25-26

2.4 SWNTs的功能化策略26

2.5 超声位置的优化26

2.6 超声时间的优化26

2.7 siRNA的纯化26-27

2.8 功能化SWNTs与siRNA的连接27

2.9 连接效率的测定27-28

2.3 结果与浅析28-31

2.3.1 超声位置的优化结果28

2.3.2 超声时间的优化28-29

2.3.3 PEG功能化SWNTS的近红外光谱29-30

2.3.4 功能化SWNTs的RAMAN光谱30-31

2.3.5 SWNT-siRNA的连接效率31

2.4 小结31-33

第3章 SWNT载体的转染效率及细胞毒性33-41

3.1 引言33

3.2 材料和策略33-36

3.

2.1 材料33-34

3.

2.2 实验器材34

3.

2.3 试剂配制34

3.

2.4 SWNT-siRNA的制备34-35

3.

2.5 细胞的复苏35

3.

2.6 细胞的传代35

3.

2.7 细胞的冻存35

3.2.8 转染效率的测定35论文导读：424.2.4SWNT-siRNA的制备424.2.5细胞的复苏、细胞的传代和细胞的冻存424.2.6细胞增殖的检测424.2.7细胞凋亡的检测424.3实验结果与浅析42-494.3.1SWNT-siRNA-SUR对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响42-444.3.2SWNT-siRNA-MDM2对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响44-464.3.3SWNT-siRNA-β-CAT对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响4

3.

2.9 MTT法测定细胞毒性35-36

3.3 实验结果与浅析36-40

3.1 SWNT-siRNA对B-Cap-37细胞的转染效率36-38

3.2 SWNT载体的细胞毒性38-40

3.4 小结40-41

第4章 SWNT-siRNA对乳腺癌B-Cap-37细胞的活性探讨41-50

4.1 引言41

4.2 材料与策略41-42

4.

2.1 材料41-42

4.

2.2 实验器材42

4.

2.3 试剂配制42

4.

2.4 SWNT-siRNA的制备42

4.

2.5 细胞的复苏、细胞的传代和细胞的冻存42

4.

2.6 细胞增殖的检测42

4.

2.7 细胞凋亡的检测42

4.3 实验结果与浅析42-49
4.3.1 SWNT-siRNA-SUR对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响42-44
4.3.2 SWNT-siRNA-MDM2对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响44-46
4.3.3 SWNT-siRNA-β-CAT对乳腺癌B-Cap-37细胞活性的影响46-48
4.3.4 三种SWNT-siRNA对乳腺癌B-Cap-37细胞活性影响的比较48-49

4.4 小结49-50

第5章 结论50-51
参考文献51-62
致谢62-63
发表文章63