试论不同频率电针对血管性痴呆小鼠脑保护作用比较-

论文导读：
摘要：目的：观察2Hz、80Hz和2/80Hz三种不同频率电针对血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）模型小鼠的治疗效应并进行比较，探讨电针治疗VD的适宜频率及其作用机制，为针灸临床治疗VD提供科学的电针刺激参数。策略：1不同频率电针对血管性痴呆小鼠行为学及海马CA1区神经细胞病理形态学的影响将昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、电针2Hz组、电针80Hz组、电针2/80Hz组六组，以反复阻断双侧颈总动脉加尾部放血法复制缺血再灌注VD模型。假手术组小鼠分离颈总动脉，不阻断血流，尾部不放血。术后第4d开始进行治疗。电针组选取“百会”、“大椎”、“膈俞”、“足三里”穴，毫针刺入，接电针仪，分别施以连续波，频率2Hz、80Hz及疏密波2/80Hz，每次10min，每日1次。尼莫地平组灌胃30mg/kg/日。于治疗15d后，进行跳台实验和水迷宫实验检测学习成绩，次日检测记忆成绩。行为学测试结束后，颈椎脱臼处死小鼠，冰盘上快速取脑。将左脑视交叉至体组织浸入4%多聚甲醛固定，常规HE染色，光镜下观察小鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的形态学转变。2不同频率电针对血管性痴呆小鼠海马组织CGRP、 NOS、MDA、 SOD及TChE的影响分组、造模及治疗策略均同1。小鼠处死后，冰盘上快速取脑，分离出右侧海马组织，加入生理盐水制成10%的组织匀浆，于4℃下，4000r/min离心20min，取上清液，用双缩脲法测定蛋白含量，采取放射免疫浅析法测定海马组织CGRP含量，分光光度法测定NOS、TchE活性，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，硫代酸比色浅析法测定MDA含量。3不同频率电针对血管性痴呆小鼠海马CA1区神经细胞促凋亡蛋白酶Caspase-3阳性表达及平均光密度值的影响分组、造模及治疗策略均同1。行为学测试结束后，颈椎脱臼处死小鼠，冰盘上快速取脑，将左脑视交叉至体组织浸入4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，冠状切片，厚5um，每个标本切片5张，随机取3张，采取免疫组织化学SABC法检测Caspase-3在海马CA1区神经细胞中的阳性表达，并观察不同频率电针对其阳性表达及平均光密度值的影响。所有数据均采取SPSS软件进行浅析处理。结果：1不同频率电针对血管性痴呆小鼠行为学及海马CA1区神经细胞病理形态学的影响1.1行为学检测结果小鼠跳台实验结果显示：模型组小鼠反应时间延长，潜伏期缩短，错误次数增加，与假手术组比较差别具有显著性统计学作用(P0.01)；电针和尼莫地平治疗均可缩短反应时间，延长潜伏期，降低错误次数，与模型组比较，差别有统计学作用(P0.05或P0.01)；其中，2/80Hz组作用最显著，与2Hz组、80Hz组、尼莫地平组比较有显著差别(P0.05或P0.01)；2Hz组、80Hz组、尼莫地平组各组之间比较无统计学作用(P0.05)。小鼠水迷宫实验结果显示：模型组小鼠游全程时间显著延长，错误次数显著增加，与假手术组比较具有显著性差别(P0.01)；电针和尼莫地平治疗均可缩短游全程时间，减少错误次数，与模型组比较具有显著性差别(P0.05或P0.01)；其中，电针2Hz组与2/80Hz组作用较显著，与尼莫地平组、80Hz组比较有显著差别(P0.05或P0.01)；2Hz组与2/80Hz组比较无差别(P0.05)；尼莫地平与80Hz组比较无差别(P0.05)。1.2不同频率电针对VD模型小鼠海马CA1区神经细胞病理形态学的影响海马CA1区HE染色，光镜下一般形态学观察示：模型组小鼠锥体细胞脱失严重，排列紊乱，形状欠规则，细胞核质不均匀，核固缩严重；各治疗组病变较模型组均有改善，尼莫地平组与80Hz组，细胞脱失减轻，排列仍欠规整，细胞近似圆形，细胞核质不均匀；2Hz组细胞排列紧密，稍欠规整，细胞近似圆形，细胞核质较均匀；2/80Hz组仅见少量细胞脱失，排列致密规整，细胞圆形，细胞核清晰，核质均匀。2不同频率电针对血管性痴呆小鼠海马组织CGRP、 NOS、MDA、 SOD及TchE的影响模型组CGRP含量降低，与假手术组比较有显著统计学差别(P0.01)；各治疗组CGRP含量较模型组均有提升(P0.05或P0.01)；其中2Hz组、2/80Hz组作用较显著，与尼莫地平组、80Hz组比较有显著统计学差别(P0.05或P0.01)；2/80Hz组较2Hz组作用更为突出(P0.05)；80Hz组与尼莫地平组比较，无统计学作用(P0.05)。模型组NOS活性提升，较假手术组有显著统计学差别(P0.01)；电针及尼莫地平治疗均可降低NOS活性，与模型组比较差别显著(P0.01)；其中2/80Hz组作用最佳，与尼莫地平组、2Hz组、80Hz组比较有显著统计学差别(P0.05)；2Hz组、80Hz组、尼莫地平组各组之间比较，无统论文导读：组、尼莫地平组各组之间比较，无统计学作用(P0.05)。3不同频率电针对VD小鼠海马CA1区神经细胞促凋亡蛋白酶Casepase-3阳性表达及平均光密度值的影响模型组Casepase-3阳性表达为强阳性，平均光密度值显著增高，与假手术组比较有显著统计学差别（P0.01)；电针及尼莫地平治疗均可减弱阳性表达，降低平均光密度值，与模型组比较统计学差
计学作用(P0.05)。模型组MDA含量显著升高，SOD活性显著降低，与假手术组比较有显著差别(P0.01)；各治疗组均可降低MDA含量，提升SOD活性，与模型组比较统计学差别显著(P0.05或P0.01)；其中，2Hz组、2/80Hz组作用较显著，与尼莫地平组、80Hz组比较有显著统计学差别(P0.05或P0.01)；2/80Hz组较2Hz组作用更为突出(P0.05)。模型组TchE活性提升，较假手术组有显著统计学差别(P0.01)；电针及尼莫地平治疗均可降低TchE活性，与模型组比较统计学差别显著(P0.05或P0.01)；其中，2/80Hz组作用最优，与尼莫地平组、2Hz组、80Hz组相比有显著统计学差别(P0.05)；2Hz组、80Hz组、尼莫地平组各组之间比较，无统计学作用(P0.05)。3不同频率电针对VD小鼠海马CA1区神经细胞促凋亡蛋白酶Casepase-3阳性表达及平均光密度值的影响模型组Casepase-3阳性表达为强阳性，平均光密度值显著增高，与假手术组比较有显著统计学差别（P0.01)；电针及尼莫地平治疗均可减弱阳性表达，降低平均光密度值，与模型组比较统计学差别显著(P0.01)；其中，2Hz组、2/80Hz作用较显著，与80Hz组、尼莫地平组比较有显著差别(P0.05)；2/80Hz组较2Hz组作用更为突出(P0.05)；80Hz组与尼莫地平组比较，无统计学作用(P0.05)。结论：不同频率电针刺激“百会”、“大椎”、“膈俞”、“足三里”穴对VD模型小鼠具有治疗效应，其作用机理可能与提升CGRP含量及SOD活性、降低MDA含量及NOS与TchE活性，以而改善因缺血再灌注所致的脑部血液循环障碍，阻断神经毒性级联反应，对抗脂质过氧化损伤，调整胆碱能神经系统功能等有关，并通过降低Casepase-3阳性表达，抑制海马CA1区神经细胞过度凋亡，进而改善脑缺血再灌注诱导的学习、记忆障碍。且电针对VD模型小鼠的治疗效应以2/80Hz组最为显著。关键词：血管性痴呆论文脑缺血再灌注论文电针频率论文Caspase-3论文CGRP论文NOS论文TChE论文
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英文摘要9-15
引言15-17
第一部分 不同频率电针对血管性痴呆小鼠行为学及海马 CA1 区神经细胞病理形态学的影响17-31
前言17
材料与策略17-20
结果20-22
附图22-24
附表24-26
讨论26-29
小结29
参考文献29-31
第二部分 不同频率电针对血管性痴呆小鼠海马组织 CGRP、 NOS 、MDA、 SOD 及 TChE 的影响31-41
前言31
材料与策略31-33
结果33-35
附表35-37
讨论37-39
小结39
参考文献39-41
第三部分 不同频率电针对血管性痴呆小鼠海马 CA1 区神经细胞促凋亡蛋白酶 Caspase-3 阳性表达的影响41-49
前言41
材料与策略41-42
结果42-44
附图44-45
附表45-46
讨论46-47
小结47
参考文献47-49
结论49-50
综述 近五年针灸治疗血管性痴呆的探讨进展50-58
参考文献54-58
致谢58-59
个人简历59