简析黄连总碱—卡波姆复合物制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价

论文导读：ediumwithpH1.2，pH5.0，pH6.8，pH7.0orpH7.4wererespectivelyinvestigatedbyusingthedeterminationofinvitroreleaserate.Thevitrogastricbioadhesivepropertiesofcompoundoftotalalkaloidsofcoptisandcarbomerwerepreliminarilyinvestigatedbyusingthedeterminationofratgastri
[摘要] 目的 探讨黄连总碱-卡波姆复合物的缓释特性及其胃生物粘附性能。 策略 以复合物收率和载药量为指标，采用单因素法分别探讨卡波姆品种、卡波姆浓度、黄连总碱浓度等因素对酸碱沉淀反应的影响。采用体外释放度测定法探讨黄连总碱-卡波姆复合物在pH值分别为1.2，5.0，6.8，7.0和7.4的介质中的释药动力学。采用大鼠胃内的留存量测定法初步探讨黄连总碱-卡波姆复合物在体内的胃生物粘附性。 结果 （1）黄连总碱-卡波姆复合物消除了黄连的强烈苦味，最佳的卡波姆品种为934P，卡波姆浓度为0.25%，黄连总碱浓度为1%。（2）黄连总碱-卡波姆复合物在人工胃液中具有较佳的缓释性能。但在纯水、pH 5.0、pH 6.8和pH 7.4四种介质中的释药非常缓慢。（3）黄连总碱-卡波姆复合物在胃内的滞留时间远远大于黄连总碱。 结论 黄连总碱-卡波姆复合物具有良好的缓释性能和胃生物粘附性能。
[关键词] 黄连；卡波姆；小檗碱
[] A [文章编号] 2095-0616（2013）22-14-04
Evaluation of preparation， in vitro release characteristics and gastric bioadhesive properties of compound of total alkaloids of coptis and carbomer
LIU Taoshi ZHAO Xinhui DI Liuqing CAI Baochang
Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China
[Abstract] Objective To explore the release characteristics and gastric bioadhesive properties of compound of total alkaloids of coptis and carbomer. Methods Making the yield and drug loading of compound as indexes， the varieties of carbomer and concentration of carbomer and total alkaloids of coptis which were effect on the acid precipitation reaction were respectively investigated by using the single factor method.The release kinetics of compound of total alkaloids of coptis and carbomer in the medium with pH 1.2，pH 5.0，pH 6.8，pH 7.0 or pH 7.4 were respectively investigated by using the determination of in vitro release rate. The vitro gastric bioadhesive properties of compound of total alkaloids of coptis and carbomer were preliminarily investigated by using the determination of rat gastric retained amount. Results （1）The compound of total黄连总碱—卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价由提供海量免费论文范文的www.7ctime.com,希望对您的论文写作有帮助. alkaloids of coptis and carbomer eliminated the bitterness of coptis，the optimal varieties of carbomer was 934P，the optimal concentration of carbomer and total alkaloids of coptis were 0.25%，1% respectively.（2）The compound of total alkaloids of coptis and carbomer had better release characteristics in artificial gastric juice.But the drug release were very slowly in four kinds of medium with water， pH 5.0，pH 6.8 and pH 7.4.（3）The residence time in the stomach of compound of total alkaloids of coptis and carbomer was significantly longer than that of total alkaloids of coptis. Conclusion The compound of total alkaloids of coptis and carbomer has good release characteristics and gastric bioadhesive properties.
[Key words] Coptis；Carbomer；Berberine
当前生物粘附制剂的制备策略主要是将药物与生物粘附材料混合后装胶囊或压片，或制成微球，或用生物粘附材料包衣，由于药物与粘附材料松散结合，存在药物突释和黏膜药物传递效率差等理由（生物粘附材料与黏膜粘附并不意论文导读：
味着药物也与黏膜粘附）。将药物与粘附材料通过化学反应制成既具有生物粘附性又能缓释药物的聚合物前药[1-2]，是生物粘附给药系统研究的一种崭新思路，可望降低药物的突释以及提高药物的黏膜传递效率。卡波姆（Carbopol、Carbome黄连总碱—卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价论文资料由论文网www.7ctime.com提供,转载请保留地址.r）属于聚丙烯酸衍生物，具有优良的流变学性质和生物粘附性能，是目前中药生物粘附制剂和外用凝胶剂的一种重要的常用高分子药用辅料[3]。黄连是一种重要的清热解毒中药，主含生物碱，包括小檗碱、黄连碱，巴马亭和药根碱等，具有抗菌、抗病毒、止泻、抗溃疡、抗炎、抗心律失常、降血糖、降血脂、预防动脉硬化和抗癌等作用。由于卡波姆分子含有大量活性羧酸基团，可与黄连生物碱发生酸碱反应生成盐类复合物。本研究对黄连总碱-卡波姆复合物的制备策略、体外释药性能和胃滞留性能进行初步研究，探讨中药聚合物前药型生物粘附给药系统的可行性。
1 材料与策略

1.1 仪器

Waters高效液相色谱仪（Waters 515泵，Waters 2487紫外-可见检测器，Rheodyne进样器，中科院大连化学物理所WDL-95色谱工作站）；RC610型智能药物溶出仪（天津医疗器械研究所）、MJ-500电子天平（精度1mg，日本Chyo公司）、Libror AEL电子天平（精度0.01mg，瑞典Shimadzu公司）。

1.2 试药

乙腈（高效液相色谱纯，美国默克公司生产）；甲醇（高效液相色谱纯，江苏淮安市恒天工贸有限公司）；磷酸（AR）、磷酸二氢钾（AR）、水为重蒸馏水。其余试剂均为分析纯。化学对照品：盐酸小檗碱（批号10713-200208，含量测定用）；盐酸巴马汀（批号732-9002，含量测定用）；以上对照品均购自中国药品生物制品检定所。

1.3 策略

1.3.1 黄连总碱的提取 称取黄连药材，加水煎煮2次，水提液减压浓缩至0.2g药材/mL，高速离心，取上清液备用。取预处理后的药用规格的HPD-100大孔树脂300g，湿法装柱，将上述黄连水提浓缩液上柱，吸附流速为1BV/h；蒸馏水洗脱杂质，洗脱流速2BV/h，用碘化铋钾试液判定水洗终点；然后用60%乙醇洗脱黄连生物碱，洗脱流速1BV/h，碘化铋钾试液判定醇洗终点；合并含生物碱醇洗液，减压回收乙醇，真空干燥，即得黄连总生物碱。
1.3.2 黄连总碱-卡波姆复合物的制备及其影响因素考察 将卡波姆和黄连总碱分别配成一定浓度的水溶液，混合，静置12h，过滤收集沉淀，低温真空干燥或冷冻干燥，即得黄连总碱-卡波姆复合物。以复合物收率和载药量为指标，采用单因素法分别探讨卡波姆品种、卡波姆浓度、黄连总碱浓度等因素对酸碱沉淀反应的影响。
1.3.3 黄连总碱-卡波姆复合物体外释放度测定法 采用中国药典二部附录XD释放度测定第二法“浆法”。搅拌桨转速50r/min，温度（37.0±0.5）℃，溶出介质是分别是脱气的纯水、0.1mol/L盐酸溶液、pH 5.0磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、pH 7.4磷酸盐缓冲液各900mL。取黄连总碱-卡波姆复合物约0.3g，精密称定，投入溶出杯中，自样品接触溶出介质起立即计时，至规定时间（0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12.0h），直接取样5mL（每次取样后补充介质5mL），用0.8μm孔径的微孔滤膜滤过，照分光光度法，以溶出介质为空白，在345nm波长处测定吸光度，并计算累计释放百分率。

1.3.4 黄连总碱-卡波姆复合物的体外生物粘附性评价

1.3.4.1 体外胃黏膜组织的粘附留存量测定 采用自制的测定装置，见图1（左），取禁食24h的大鼠，用钠溶液（40mg/kg）经腹腔注射麻醉，解剖取出胃，沿胃大弯剪开，用0.1mol/L盐酸将胃内壁冲洗干净，固定在支撑物玻片上，将卡波姆-生物碱复合物约40mg均匀洒在胃黏膜组织上，在相对湿度为92.5%（饱和氯化钠溶液）的密闭容器中放置20min，充分水化后，将玻片倾斜45°放置，以输液器制约流速，用0.1mol/L盐酸溶液100mL冲洗，淋洗液收集于一已知重量的烧杯中，在70℃烘干，称重，计算胃组织粘附百分率。
1.3.4.2 体外胃黏膜粘附分离力的测定 采用自制的测定装置，见图1（右）。用塑料袋中水的重量来测定药膜与生物膜之间的剥离力。取禁食24h的大鼠，用钠溶液（40mg/kg）经腹腔注射麻醉，解剖取出胃，沿胃大弯剪开，用0.1mol/L盐酸将胃内壁清洗干净，剪成约1cm2的小块，固定于玻片2上。取卡波姆-生物碱复合物，以蒸馏水配制成10%混悬液，涂布于玻片1上，50℃烤干，临用前，以0.1mol/L盐酸溶液润湿10min后，覆盖于玻片2上，使药膜与生物膜紧密接触，并施予100g压力，15min后撤去外力，将1和2悬挂于铁架台，在2的下方系一塑料袋，向塑料袋中滴加水，直至因拉力过大而分离，称取塑料袋中水的重量，即为粘附力大小。
组织留存量的测定装置 分离力的测定装置
图1 体外生物粘附性评价测定装置示意图

1.4 体内生物粘附性初步评价

1.4.1 体内生物粘附性初步评价 将黄连总碱-卡波姆复合物和黄连总碱分别给大鼠（2组，每组8只）灌胃，一定时间（1，2，4，6h）后处死大鼠，解剖胃，取大鼠胃采用1%盐酸甲醇提取，HPLC法测定小檗碱含量，计算经一定时间后大鼠胃内药物的保留率。
1.4.2 黄连总碱的含量测定策略 小檗碱是黄连生物碱中主要成分，占50%以上，且巴马汀、药根碱、黄连碱和黄连碱等季铵盐类生物碱与小檗碱结构、分子量和紫外吸收图谱均相似。故采用紫外分光光度法测定黄连总生物碱含量（策略学考察另文发表），结果表明该策略可靠、灵敏、快速。
1.4.3 黄连总碱中小檗碱和巴马汀的定量策略（策略学考察另文发表） （1）色谱条件：色谱柱为Kromasil反相C18柱（5μm，4.6mm×2论文导读：
50mm），柱温30℃，检测器灵敏度0.5AUFS，测定波长350nm，流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液-磷酸（40∶60∶0.2），流速1.0mL/min，进样5μL。（2）对照品溶液制备法：称取盐酸小檗碱2.71mg、盐酸巴马汀2.53mg和盐酸药根碱2.66mg，用盐酸-甲醇（1∶100）定容至100mL，摇匀，即得。2 结果

2.1 黄连总碱-卡波姆复合物的理化特征

黄连总碱和卡波姆在水溶液通过酸碱沉淀反应生成的复合物为无味的黄褐色沉淀，该复合物不溶于水、乙醇和氯仿，可溶于酸水。差示扫描量热分析和红外分光光度法结果表明黄连总碱和卡波姆形成了新的化合物。扫描电子显微镜结果（图2）表明黄连总碱和卡波姆在水溶液中生成片状或颗粒状的沉淀。
表1 不同品种的卡波姆与黄连总碱在水溶液中的酸碱沉淀反应
卡波姆品种卡波姆浓度（%）黄连总碱浓度（%）用量比（体积比）沉淀收率（%）沉淀载药量（%）
934P0.2512∶17

5.1431.86

971P0.2512∶16

7.5230.55

974P0.2512∶16

5.3729.78

注：；
表2 不同浓度的卡波姆934P与黄连总碱在水溶液中的酸碱沉淀反应
卡波姆934P浓度（%）黄连总碱浓度（%）用量比（体积比）沉淀收率（%）沉淀载药量（%）
0.1512∶16

5.0933.17

0.2512∶17

5.1431.86

0.5012∶17

6.95232

图2 黄连总碱-卡波姆复合物的电子显微镜照片（放大倍数上图10000，下图20000）

2.2 黄连总碱-卡波姆复合物的制备及其影响因素考察

黄连总碱-卡波姆复合物的收得率与载药量与卡波姆种类、卡波姆水溶液浓度和黄连总碱水溶液浓度等因素有关。表1结果表明卡波姆934P与黄连总碱的复合物收得率和载药量均高于卡波姆971P和974P，故卡波姆品种选择为934P。表2结果表明，随着卡波姆水溶液浓度的提高，黄连总碱-卡波姆复合物的收得率增加，但载药量降低。表3结果表明，随着黄连总碱水溶液浓度的提高，复合物的载药量降低，但其收得率随着黄连总碱大于1%时反而有所降低。
表3 卡波姆934P与不同浓度黄连总碱在水溶液中的酸碱沉淀反应
卡波姆934P浓度
（%）黄连总碱浓度
（%）用量比
（体积比）沉淀收率
（%）沉淀载药量
（%）
0.250.52∶16

3.7134.39

0.25

1.02∶175.14386

0.25

1.52∶17

2.2830.17

0.2502∶167.0526.41

2.3 黄连总碱-卡波姆复合物的体外释药动力学研究结果

表4结果表明，黄连总碱-卡波姆复合物在人工胃液中分解并释放黄连总碱，具有较佳的缓释性能。但在纯水、pH 5.0、pH 6.8、pH 7.4四种介质中的释药非常缓慢，12h累计释放依次是7.28%、32.59%、25.13%、39.06%。提示黄连总碱与卡波姆生成盐类复合物后可能影响其在胃肠道转运与吸收，宜制成胃滞留制剂。见图3。
表4 黄连总碱-卡波姆复合物在不同介质中的释药动力学
时间
（h）人工胃液
（pH

1.2）pH

5.0

缓冲盐溶液pH

6.8

缓冲液pH

7.4

缓冲液蒸馏水 0.515.754.16

2.834.611.05

12

2.346.494.328.931.76

235.299.776.8114.052.37
452.6615.261

1.5820.903.45

668.042

1.3716.7126.454.71

880.4326.862

1.8432.125.36

1293.5732.5925.1339.067.28
图3 黄连总碱-卡波姆复合物在不同介质中的释药动力学

2.4 黄连总碱-卡波姆复合物的体内生物粘附性初步评价

表5结果表明，黄连总碱-卡波姆复合物在胃内的滞留时间远远大于黄连总碱。其理由在于卡波姆是一种常用的生物粘附材料，卡波姆仅部分羧基与黄连生物碱反应，剩余羧基保证了黄连总碱-卡波姆复合物仍具有较强的胃肠生物粘附性能。
表5 黄连总碱-卡波姆复合物在大鼠胃内的留存量测定
项目 时间
1h2h4h6h
黄连总碱-卡波姆复合物留存率（%）86.1473.526

1.4947.05

黄连总碱留存率（%） 47.512

2.969.430.97

3 讨论
卡波姆分子含有大量活性羧酸基团，目前学术界对卡波姆与碱性药物能否配伍使用存在争议。李捷玮等[4]主编的《常用药物辅料手册》认为卡波姆与碱性药物（如、小檗碱、阿托品和普鲁卡因等）属于配伍禁忌，不宜混合使用。而郑俊民[5]主编的《药用高分子材料学》和萧三贯[6]主编《最新国家药用辅料手册》认为卡波姆能与碱性药物生成可溶性的内盐，具有缓释作用，能配伍使用。英美药用辅料手册[7]（英文第5版，2006）卡波姆项下未明确说明卡波姆与碱性药物能否配伍。黄连总碱—卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价相关论文由www.7ctime.com收集,如需论文.检索中国知识资源总库（CNKI）和PubMed等英文数据库，未发现专门研究中药生物碱与卡波姆相互作用的文献。
作者在前期工作中对卡波姆与中药生物碱的相互作用进行了初步探讨：（1）采用10种单味中药水提液与卡波姆进行了配伍反应，发现卡波姆与含生物碱的黄连、苦参、吴茱萸、延胡索和粉防己水提液均反应生成沉淀，但与不含生物碱的黄芩、甘草、人参、生地和金银花的水提液均不发生沉淀反应。（2）卡波姆与小檗碱、氧化苦参碱、粉防己碱和黄连总碱等在水溶液中均能生成沉淀（由于卡波姆分子仅部分羧基与生物碱反应，且不同分子结合数量不同，因此其产物是盐类复合物而不是单体）。本研究结果初步表明黄连总碱-卡波姆复合物既去除了黄连的强烈苦味，又具有很好的缓释性能，更重要的是该复合物还保留了卡波姆的生物粘附性能，因此黄连总碱-卡波姆复合物是论文导读：等方面具有重要作用，如鞣酸小檗碱、聚谷氨酸-喜树碱和HPMA共聚物-喜树碱等。此外本论文还有许多后续工作要做，如黄连总碱-卡波姆复合物的药效学和毒理学研究、体内生物利用度研究以及体内外相关性研究等。任天斌，侠文娟，吴畏，等.刺激响应型聚合物前药.化学进展，2013，25（5）：775-78

4.李宵凌，B.R.贾斯蒂.控释药物

一种很有发展前途的聚合物前药。但黄连总碱-卡波姆复合物不属于传统的前药概念而属于广义前药范畴。聚合物前药是近年来前体药物研究的热门领域，在改善药物不良味道、降低药物的刺激性和毒副作用、调节药物释放和提高药物靶向性等方面具有重要作用[8]，如鞣酸小檗碱[9]、聚谷氨酸-喜树碱和HPMA共聚物-喜树碱[10]等。此外本论文还有许多后续工作要做，如黄连总碱-卡波姆复合物的药效学和毒理学研究、体内生物利用度研究以及体内外相关性研究等。
[参考文献]
[1] 任天斌，侠文娟，吴畏，等.刺激响应型聚合物前药[J].化学进展，2013，25（5）：775-784.
[2] 李宵凌，B.R.贾斯蒂.控释药物传递系统的设计[M].徐晖等，译.北京：化学工业出版社，2008：51.
[3] 郭红叶，伊博文，闫小平，等.新型辅料卡波姆在凝胶剂中应用目前状况[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（17）：371-374.
[4] 李捷玮，刘吉祥.常用药物辅料手册[M].上海：第二军医大学出版社，2000：210.
[5] 郑俊民.药用高分子材料学[M].北京：中国医药科技出版社，2000：144.
[6] 萧三贯.最新国家药用辅料标准手册[M].北京：中国医药科技电子出版社，2006：389.
[7] Raymond C Rowe，Paul J Sheskey， Si?n C Owen.Handbook of Pharmaceutical Excipients[M].Fifth Edition. the Pharmaceutical Press and the American Pharmacists Association，2006：111-116.
[8] Modi S，Jain PJ，Kumar N.Polymer-drug conjugates：Recent development for 黄连总碱—卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价由优秀论文网站www.7ctime.com提供,助您写好论文.anticancer drugs[J].CRIPS，2004，5：2-8.
[9] 李雪，金描真，叶放，等.鞣酸小檗碱口服结肠定位包衣片的制备及体外释药性[J].广东药学院学报，2009，25（3）：221-225.
[10] Gillies RE，Frechet MJ.Dendrimers and dendritic polymers in drug delivery[J].Drug Deliv Technol，2003，3（1）：40-45.
（收稿日期：2013-10-08）