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试议紫山药组织培养快繁技术

最后更新时间:2023-12-23 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:15801 浏览:69885
论文导读:2.0~3.0cm,接种于生根培养基诱导生根,20d后统计生根数。1.3培养条件接种后的试材,均在温度(25±2)℃、光照度1200lx、光照时间10h/d条件下培养。2结果与分析2.1茎尖、茎段的初始培养外植体接种在初始培养基上培养2~3d,基部开始变褐,培养基出现褐化,褐色物渗入培养基呈圆形;培养10~15d,外植体基部褐化加重
摘要:以紫山药的茎尖、茎段为材料,对茎尖、茎段诱导分化不定芽进行初步研究,结果表明,茎尖、茎段不定芽的分化率随6-BA浓度的增加而提高,芽苗增殖率先由低到高,再降低;MS+6-BA0.5~1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基对不定芽有较高的分化率和增殖率;茎尖、茎段培养20d为1个继代周期,茎段在第2次继代期、茎尖在第3次继代周期培养时,不定芽的增殖率最高;不定芽苗

2.0~3.0cm时从苗基部或分枝处剪下进行生根诱导,生根率在95%以上。

关键词:紫山药;茎尖;茎段;组织培养;不定芽
1002-1302(2014)11-0048-03
紫山药俗称薯蓣、脚板薯、长芋,为薯蓣科薯蓣属(Dioscorea)的一个地方品种,为多年生蔓性植物,块根呈块状或圆柱状,表皮和肉质因呈紫红色而得名。紫山药肥大的肉质块根细腻滑爽、口感极佳,富含黏性蛋白、紫色花青素、维生素、胆碱和薯蓣皂(天然的DHEA)等,内含各种荷尔蒙基本物质,有推动内分泌荷尔蒙的合成等多种独特食疗价值,也称“紫人参”。据《本草纲目》记载,经常食用紫山药,不仅可以增加人体的抵抗力,降低血压、血糖,抗衰益寿等,而且还具有固肾、润肺益精、软化血管等药用滋补功能,故又享有“蔬菜之王”的美誉。病毒病是造成山药产量下降、品质退化的重要因素。紫山药由于长期使用块茎繁殖,出现病毒积累,种性退化,已危及到产品品质和产量,不但满足不了市场需求,还严重影响和制约地方产业的发展和种植的积极性。山药感染的主要病毒有坏死花叶病毒、绿色斑驳病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒[1],目前尚无有效药物可制约这些病毒病的发生或蔓延。采用现代生物技术,选取优良无病株种苗进行离体脱毒培养,以组培苗更替传统的营养繁殖可以从根本上解决病毒病的理由。有关盾叶薯蓣、惠楼山药、怀山药等组织培养与快繁的研究[2-5]已见报道,紫山药组织培养快繁技术研究还末见报道。为此,本试验开展紫山药组织培养快繁技术研究,以期为紫山药组培苗工厂化生产和应用提供参考。
1材料与策略

1.1试验材料

紫山药,由江西万载辉明有机农业科技开发有限公司提供。选择个大无病虫、表面根毛少、肉紫色的块茎,经表面消毒,在室(棚)温15~25℃于盆中沙藏催芽30d左右,待嫩芽生长到20~30cm即可作为外植体取材。

1.2试验策略

1.2.1培养基初始培养基:MS;诱导分化培养基:MS+6-BA0.1~2.0mg/L+NAA0.1mg/L;生根培养基:1/2MS+NAA0.1~0.5mg/L+Ac0.2g/L。所用培养基均含45g/L食用糖和琼脂6g/L,pH值为

5.8。培养基在121℃、131kPa条件下灭菌25min,备用。

1.2.2外植体消毒去掉展开的叶片,分别剪成带叶柄的茎段、茎尖;用洗液清洗干净,在无菌操作台上用70%乙醇消毒30s,无菌水冲洗数次;分别用0.1%HgCl2浸泡消毒,茎尖5min、茎段10min,用无菌水冲洗数次。
1.2.3茎尖和茎段的初始培养茎段带节剪成0.8~1.0cm的小段,共72段,茎尖剪留0.5~0.8cm,共30个;分别接种于初始培养基上,培养30d后统计枯死率和成活率。
1.2.4激素浓度对茎尖、茎段的诱导分化初始培养的茎段腋芽抽长2.0cm时,将新抽枝从基部剪下,每茎段0.5cm左右,带叶柄接种在不同激素浓度的诱导分化培养基上,每处理接种30茎段;初始培养的茎尖修剪基部褐化的部分,取茎尖0.3cm左右,接种在不同激素浓度的诱导分化培养基上,每处理接种12茎尖。茎尖、茎段培养20d,新鲜培养基继代1次,40d后观察不定芽变化,并统计诱导分化率、不定芽数和增殖率。
1.2.5培养周期对茎尖、茎段的诱导分化再生茎尖、茎段(含不同株系紫山药1#、2#)各30个,接种在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的诱导分化培养基上,每培养20d为1个继代周期,共继代4次,统计不定芽数和增殖率。
1.2.6生根培养剪取不定芽苗2.0~

3.0cm,接种于生根培养基诱导生根,20d后统计生根数。

1.3培养条件

接种后的试材,均在温度(25±2)℃、光照度1200lx、光照时间10h/d条件下培养。
2结果与分析

2.1茎尖、茎段的初始培养

外植体接种在初始培养基上培养2~3d,基部开始变褐,培养基出现褐化,褐色物渗入培养基呈圆形;培养10~15d,外植体基部褐化加重,部分茎尖变褐、枯死,茎段基部1/3处枯死;培养20d,茎尖枯死率为17%,茎段枯死率为7%,外植体基部的茎节处肿大,并有淡红色圆形芽点,茎段叶柄张开,腋芽开始萌动;培养30d左右,茎段叶腋抽生1~2个不定芽,长0.5~2.5cm,稍嫩的茎段叶腋形成0.1~0.2cm小瘤状物,茎尖、茎段成活率分别为43%和91%。

2.26-BA浓度对茎尖、茎段诱导分化的影响

茎尖0.3cm、茎段0.5cm分别接种在不同6-BA浓度的诱导分化培养基上,培养3~5d,茎段切口处分泌褐色物,在培养基中扩散由浅褐至深褐;培养10~15d,茎段基部增粗,叶柄张开,腋芽萌发单个或多个不定芽小点,单个不定芽伸长,生长较快,不定根长2~4cm,不定芽长2.0cm,随激素浓度的加大,茎段形成的丛生芽体数增加,最多可达5~7个,茎尖由于个体小,分化的芽点也小,分化率虽高,但能形成正常的小芽少,随培养时间的延长,部分小芽可生长成正常芽,但芽体较弱、矮小或畸型;培养20d左右,不定芽基部生长1~3条淡红色不定根,不定根生长快,可直接伸入培养基分泌酚类化合物,受多酚氧化酶激活产生醌类物质,加重培养基褐化程度。由表1可见,6-BA浓度为0.1mg/L时,茎尖、茎段诱导分化率和增殖率均最低,分别为90%、0%和93%、123%;6-BA浓度为1.0mg/L时,茎尖、茎段诱导增殖率均为[KG*5]最高,分别为50%和250%;茎尖和茎段在MS+6-BA培养基中培养,既能保持一定的分化率又有较好的不定芽增殖率。 全文地址:www.7ctime.com/zylw/lw48293.html上一论文:简谈我院2013年中药配方颗粒用药