试议UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学

论文导读：，氮气吹干（水浴40℃）；再加入700μL甲醇-乙腈（1∶3）复溶，涡旋振荡1min，12000r·min-1下离心5min，仍取上清液依前法吹干，以250μL甲醇复溶，涡旋振荡1min，12000r·min-1下离心5min，取上清液5μL进样检测。2.3溶液的配制精密称定各对照品适量，用甲醇溶解定容，分别配制储备液：栀子苷12

7.5mg·L-1，京尼平龙胆双

[摘要] 为了建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸灵敏可靠的分析策略，并对这3种环烯醚萜苷在脑中风大鼠口服醒脑静后的脑药动力学进行研究。该实验中脑浆样品沉淀蛋白2次；采用Acquity BEH C18柱，流动相为乙腈-1%甲酸-水梯度洗脱，质谱采用电喷雾电离源（ESI），多反应监测（MRM） 进行负离子检测，样品分析时间为3.5 min。结果表明3种环烯醚萜苷成分在大鼠脑中的线性关系良好，提取回收率在99.6%～114.3%，日内、日间精密度和准确度良好UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学论文资料由论文网www.7ctime.com提供,转载请保留地址.，稳定性等均符合要求。各物质在中风大鼠脑中的t1/2和MRT相似，栀子苷与京尼平龙胆双糖苷有现象，而栀子苷酸为单峰。表明该策略特异灵敏、准确可靠，可用于醒脑静口服制剂的脑药动力学研究。
[关键词] UPLC-MS/MS；栀子苷；京尼平龙胆双糖苷；栀子苷酸；醒脑静；脑药动力学；脑中风
醒脑静由经典名方安宫牛黄处方精简而来（栀子、艾片、麝香和郁金），药理研究表明[1-2]，它有显著的抗脑缺血再灌注损伤、抗氧化损伤、兴奋中枢、解热、抗炎、神经保护等作用，已作为注射剂被广泛应用于脑中风的防治中。但由于注射剂使用不便及安全性理由[3]，近年来对醒脑静口服制剂的开发研究得到重视[4-5]。栀子作为醒脑静方中的主要药味，其主要活性成分是以栀子苷为代表的环烯醚萜类物质[6-7]。对于它们口服后的血药动力学研究较为广泛[8-9]，但考虑到在脑中风的病灶部位在脑部，而且这些水溶性的药效成分不易入脑去发挥药效，因此对其脑部的药动学进行研究很有必要的。本文采用UPLC-MS-MS对大鼠脑中的3种环烯醚萜类成分栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和栀子苷酸的含量进行检测，并研究了三者在脑中风大鼠灌胃醒脑静后的脑药动力学特征，为醒脑静口服制剂的研发和临床应用奠定基础。
1 材料

1.1 药品与试剂

栀子苷对照品 （批号110749-201115）及内标芍药苷 （批号110736-201337）购自中国食品药品检定研究院；京尼平龙胆双糖苷对照品 （批号121120） 与栀子苷酸对照品 （批号MUST-12121502） 购自成都曼斯特生物科技有限公司；乙腈、甲醇 （质谱级，Fisher公司）；甲酸（色谱级，ROE公司）；超纯水自制；其他试剂均为分析纯；醒脑静口服制剂为实验室自制 （栀子提取物-冰片-麝香酮-郁金挥发油38∶18∶3∶1）。

1.2 仪器

Waters UPLC-MS/MS 分析系统 （Waters公司，美国），由Acquity 超高相液相色谱系统及TQS三重四极杆串联质谱仪组成，装有电喷雾电离源 （ESI），MassLynx 4.1 工作站。SynergyTM超纯水净化系统 （Millipore公司）；XW-80A 涡旋混合器 （上海医科大学仪器厂）；UGC-12WF氮吹仪 （北京优晟联合科技有限公司）；Techcomp CT15RT高速离心机 （上海天美科学仪器厂）；IKA-T10BS25匀浆机 （德国）；2634-100栓线 （北京沙东生物技术有限公司）。

1.3 动物

雄性SD大鼠150只，体重240～260 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK （京）2013-0001。实验前至少饲养7 d以适应环境。
2 策略与结果

2.1 液质分析条件

液相条件如下，色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱 （2.1 mm ×100 mm，1.7 μm；Waters公司，美国）。流动相为0.1%甲酸-水（A）和乙腈（B）；梯度洗脱，0～0.5 min，5% B；0.5～1.0 min，5%～15% B；1.0～2.0 min，15%～25% B；2.0～2.5 min，25%～80% B；2.5～3.0 min，80% B；3.0～3.5 min，80%～95% B；流速为0.4 mL·min-1。进样5 μL。柱温40 ℃，进样室4 ℃。
质谱条件：电喷雾电离源。毛细管电压：2.50 kV。喷雾气为N2 （流速 800 L·h-1）。去溶剂气温度400 ℃。碰撞气为Ar （3.4×10-3 mbar）。扫描方式为多反应监测 （MRM），用于定量的正离子对分别为：栀子苷m/z 433.147/225.005；京尼平龙胆双糖苷m/z 549.286/225.121；栀子苷酸m/z 373.153/123.087；芍药苷m/z 479.131/12

1.058。

2.2 脑组织样品预处理
取单个脑组织，吸干水分，精密称重，以脑重（g）：生理盐水体积（mL）=1∶1.5加入的生理盐水，匀浆。取匀浆液500 μL，加入50 μL 内标溶液、10 μL甲酸溶液 （20%） 和1.5 mL乙腈，涡旋振荡2 min，1万 r·min-1下离心10 min，取上清液，氮气吹干（水浴40 ℃）；再加入700 μL甲醇-乙腈（1∶3） 复溶，涡旋振荡1 min，12 000 r·min-1下离心5 min，仍取上清液依前法吹干，以250 μL甲醇复溶，涡旋振荡1 min，12 000 r·min-1下离心5 min，取上清液5 μL进样检测。

2.3 溶液的配制

精密称定各对照品适量，用甲醇溶解定容，分别配制储备液：栀子苷127.5 mg·L-1，京尼平龙胆双糖苷113.1 mg·L-1，栀子苷酸121.92 mg·L-1，并取适量各溶液混合后逐级稀释，得系列混标溶液；同法配制芍药苷内标溶液 （194.0 mg·L-1），于4 ℃冰箱中保存备用。取50 μL混标加入到500 μL空白脑匀浆中制备质控样品，使各成分的低、中、高浓度分别为：栀子苷 6.375，63.75，318.75 ng·g-1；京尼平龙胆双糖苷1.508，15.08，75.4 ng·g-1论文导读：；栀子苷酸3.2512，16.256，81.28ng·g-1。UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学由优秀论文网站www.7ctime.com提供,助您写好论文.UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学由优秀论文网站www.7ctime.com提供,助您写好论文.上一页12
；栀子苷酸3.251 2，16.256，81.28 ng·g-1。UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学由优秀论文网站www.7ctime.com提供,助您写好论文.UPLC—MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学由优秀论文网站www.7ctime.com提供,助您写好论文.