阐述逍遥丸含药血清影响巨噬细胞RAW264.7功能
最后更新时间：2024-02-14
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论文导读：
【摘 要】目的：采用中药血清药理学的策略，制备逍遥丸含药血清（XCS），体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，观察XCS对巨噬细胞功能的影响。策略：Wistar大鼠30只，以2.7g？kg-1？d-1剂量灌胃逍遥丸，连续3周，第22日取动物血离心，制备XCS；体外培养小鼠腹腔巨噬细胞，将细胞分为空白组、空白血清组、XCS不同浓度组，取细胞培养上清测NO及TNF-α分泌量。结果：LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7 NO、TNF-α分泌量增加，与空白血清组相比有显著差异（p<0.05）。结论：XCS对NO和TNF-α有明显促进作用。
【关键词】逍遥丸含药血清；RAW264.7细胞
传统经典妇科良药逍遥丸，出自宋代《太平惠民和剂局方》，由甘草、当归、茯苓、芍药、白术、柴胡等药物组成，具有疏肝解郁、养血健脾的功效，临床用于临床绝经期妇女。实验通过测定腹腔巨噬细胞培养上清中 NO、TNF-α的分泌水平，来研究XCS对巨噬细胞免疫调节功能的影响。
1材料
1.1药物
逍遥丸，批号：20031263，每8丸相当于生药3g，湖南九芝堂股份有限公司生产（蒸馏水配制成生药浓度为
12月龄衰老雌性Wistar大鼠，体重240±10g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK（京）2012-0001。
2策略
1？d-1，逍遥丸2.7g？kg-1？d-1，给药体积为2 mL？100g-1，每天按大鼠体重灌胃已制好的相应浓度的灌胃液，每日1次，连续3周。第22日给药后1小时，将实验大鼠背位固定，乌拉坦麻醉后，腹主动脉取血，3000 rpm，10min离心取血清，经56℃，灭活30分钟后分装，至-80℃冰箱保存备用。
3结果
XCS对巨噬细胞细胞毒作用结果表示，XCS的细胞存活率从分别为97.570±7.877%、95.393±2.875%、114.434±7.685%、108.782±9.312%、111.378±5.737%，与空白血清组相比，对细胞存活率没有影响（P>0.05），证明XCS对该细胞没有毒性作用。NO和TNF-α含量测试结果表明，XCS可推动正常巨噬细胞活化并释放NO和TNF-α（P<0.01）。当巨噬细胞受LPS 诱导活化后，XCS会使NO、TNF-α分泌减少（P<0.01）。
4讨论
巨噬细胞是免疫效应细胞，具有包括免疫防御、免疫监视、免疫调节等多种免疫功能，在机体的免疫系统中起着重要作用。活化的巨噬细胞具有抗肿瘤作用，通过释放 NO、TNF-α等增加表面分子杀灭病原微生物，诱导细胞免疫。NO 是激活的巨噬细胞杀灭病原微生物及肿瘤细胞的主要效应分子，能提高机体免疫。TNF-α不仅能直接参与炎症反应，还能诱导其他细胞因子释放，共同对组织造成损伤。过量的 NO 也会推动炎症发生，诱导炎症细胞因子如 IL-1β、TNF-α 等。与其他细胞因子形成相互作用的信号网络，刺激细胞合成、表达 IL-1β。适量的 NO、TNF-α 等可以活化巨噬细胞、杀灭病原微生物，是重要的免疫调节因子，还具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤活性。它们也是重要的炎症介质，在炎症反应初期，适量的 NO、TNF-α是机体对抗炎症的积极反应，但若它们持续不断地释放则会导致炎症不断扩大、加重。本实验研究了XCS对小鼠腹腔巨噬细胞 NO、TNF-α生成的影响，表明XCS可以通过抑制 NO和TNF-α的产生发挥抗炎作用，为XCS的进一步研究奠定了一定的理论基础。
（通讯作者：刘海洋）
参考文献
[1]张宁，李会娟，祁永华等.基于中药血清药物化学策略的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究[J].世界科学技术，中医药现代化，2010，12（4）：643.
作者简介
王佳娜（1973-），女，讲师。
*通讯作者：刘海洋，男，讲师，从事中药复方药效物质基础及作用机理研究。 全文地址：www.7ctime.com/ywtjlw/lw34568.html上一论文：关于的广药集团投入100万元帮扶仙上村
【摘 要】目的：采用中药血清药理学的策略，制备逍遥丸含药血清（XCS），体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，观察XCS对巨噬细胞功能的影响。策略：Wistar大鼠30只，以2.7g？kg-1？d-1剂量灌胃逍遥丸，连续3周，第22日取动物血离心，制备XCS；体外培养小鼠腹腔巨噬细胞，将细胞分为空白组、空白血清组、XCS不同浓度组，取细胞培养上清测NO及TNF-α分泌量。结果：LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7 NO、TNF-α分泌量增加，与空白血清组相比有显著差异（p<0.05）。结论：XCS对NO和TNF-α有明显促进作用。
【关键词】逍遥丸含药血清；RAW264.7细胞
传统经典妇科良药逍遥丸，出自宋代《太平惠民和剂局方》，由甘草、当归、茯苓、芍药、白术、柴胡等药物组成，具有疏肝解郁、养血健脾的功效，临床用于临床绝经期妇女。实验通过测定腹腔巨噬细胞培养上清中 NO、TNF-α的分泌水平，来研究XCS对巨噬细胞免疫调节功能的影响。
1材料
1.1药物
逍遥丸，批号：20031263，每8丸相当于生药3g，湖南九芝堂股份有限公司生产（蒸馏水配制成生药浓度为
1.35g？mL-1的药液备用 ）。
1.2动物12月龄衰老雌性Wistar大鼠，体重240±10g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK（京）2012-0001。
1.3仪器和试剂
VictorTMX3酶标仪，美国PekinElmer；Vert.A1倒置显微镜，德国ZeISS；F151UVCO2培养箱，上海力申科学仪器有限公司；WT-DN型洁净工作台，北京亚泰科隆仪器技术有限公司。RPMI1640培养基、新生牛血清（DMEM）、青霉素、链霉素、二四氮唑蓝（MTT）、二亚砜（DMSO），均购自南京建成生物技术有限公司。2策略
2.1XCS的制备[1]
将Wistar大鼠30只，体重240±10g。人和大鼠间按体表面积折算的等效剂量比值计算，妊马雌酮大鼠的药物等效剂量675μg？kg-1？d-1，逍遥丸2.7g？kg-1？d-1，给药体积为2 mL？100g-1，每天按大鼠体重灌胃已制好的相应浓度的灌胃液，每日1次，连续3周。第22日给药后1小时，将实验大鼠背位固定，乌拉坦麻醉后，腹主动脉取血，3000 rpm，10min离心取血清，经56℃，灭活30分钟后分装，至-80℃冰箱保存备用。
2.2细胞培养和上清液测试
RAW264.7细胞常规培养，按3×105个？mL-1 接种于96孔板中，贴壁后加入不同浓度药物孵育4 h后，再加入终浓度为1μg？mL-1的LPS诱导24h（正常对照组和模型对照组加入等体积的培养基）。对巨噬逍遥丸含药血清影响巨噬细胞RAW264.7的功能相关论文由www.7ctime.com收集,如需论文.细胞进行细胞毒测试后，采用Griess法测定上清中NO的释放量，Elisa法检测TNF-α分泌量。3结果
XCS对巨噬细胞细胞毒作用结果表示，XCS的细胞存活率从分别为97.570±7.877%、95.393±2.875%、114.434±7.685%、108.782±9.312%、111.378±5.737%，与空白血清组相比，对细胞存活率没有影响（P>0.05），证明XCS对该细胞没有毒性作用。NO和TNF-α含量测试结果表明，XCS可推动正常巨噬细胞活化并释放NO和TNF-α（P<0.01）。当巨噬细胞受LPS 诱导活化后，XCS会使NO、TNF-α分泌减少（P<0.01）。
4讨论
巨噬细胞是免疫效应细胞，具有包括免疫防御、免疫监视、免疫调节等多种免疫功能，在机体的免疫系统中起着重要作用。活化的巨噬细胞具有抗肿瘤作用，通过释放 NO、TNF-α等增加表面分子杀灭病原微生物，诱导细胞免疫。NO 是激活的巨噬细胞杀灭病原微生物及肿瘤细胞的主要效应分子，能提高机体免疫。TNF-α不仅能直接参与炎症反应，还能诱导其他细胞因子释放，共同对组织造成损伤。过量的 NO 也会推动炎症发生，诱导炎症细胞因子如 IL-1β、TNF-α 等。与其他细胞因子形成相互作用的信号网络，刺激细胞合成、表达 IL-1β。适量的 NO、TNF-α 等可以活化巨噬细胞、杀灭病原微生物，是重要的免疫调节因子，还具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤活性。它们也是重要的炎症介质，在炎症反应初期，适量的 NO、TNF-α是机体对抗炎症的积极反应，但若它们持续不断地释放则会导致炎症不断扩大、加重。本实验研究了XCS对小鼠腹腔巨噬细胞 NO、TNF-α生成的影响，表明XCS可以通过抑制 NO和TNF-α的产生发挥抗炎作用，为XCS的进一步研究奠定了一定的理论基础。
（通讯作者：刘海洋）
参考文献
[1]张宁，李会娟，祁永华等.基于中药血清药物化学策略的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究[J].世界科学技术，中医药现代化，2010，12（4）：643.
作者简介
王佳娜（1973-），女，讲师。
*通讯作者：刘海洋，男，讲师，从事中药复方药效物质基础及作用机理研究。 全文地址：www.7ctime.com/ywtjlw/lw34568.html上一论文：关于的广药集团投入100万元帮扶仙上村