浅谈高效液相色谱 串联质谱法测定牛羊组织中苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药多残留
最后更新时间：2024-03-20
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论文导读：虫和羊蝇蛆亦有较好作用。随着国内驱虫药的广泛应用和研究，发现碘醚柳胺有明显胚胎毒性；氯氰碘柳胺对肝、肾具有一定的毒、副作用；高剂量硝碘酚腈可引起心脏、神经、肌肉和呼吸的损害。欧洲医药评价署、澳大利亚以及食品法典委员会均已制定了上述药物的最大残留限量（Maximumresiduelimit，MRL），残留标志物均为原形药物，残
摘 要 建立了高效液相色谱 串联质谱法同时测定牛、羊组织中硝碘酚腈、氯羟柳胺、氯氰碘柳胺、碘醚柳胺4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留检测策略。样品用乙腈 丙酮（60∶40，V/V）（肌肉、肝脏和肾脏组织）或1%三乙胺乙腈（脂肪组织）超声提取，MAX阴离子固相萃取柱净化，液相色谱分离，采用多反应监测负离子模式对4种药物同时进行定性定量分析，在1～100 μg/L 范围内，4种药物与其对应峰面积的线性关系良好，相关系数均大于0.99。在牛、羊组织中的检出限（LOD）均为1 μg/kg，定量限（LOQ）均为2.5 μg/kg。 在LOQ、0.5倍最高残留限量（MRL）、MRL、2倍MRL添加水平下，4 种药物的平均回收率在71%～112%之间，日内相对标准偏差（RSD）在1.1%～14.0%之间，日间RSD在6.4%～14.7%之间。采用本策略对市场上动物可食性组织进行抽样检测，共抽检40份样品，2份样品检测出苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药残留。
关键词 苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药； 牛羊组织； 多残留； 高效液相色谱 串联质谱
1 引 言
氯羟柳胺（OXY）、硝碘酚腈（NIT）、氯氰碘柳胺（CLO）、碘醚柳胺（RAF）是一类苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药，作用机理是通过阻断肝片吸虫的氧化磷酸化过程，使虫体麻痹、死亡，用于驱杀牛、羊的肝片吸虫、蛔虫和绦虫，对血毛线虫、巨片吸虫和羊蝇蛆亦有较好作用。随着国内驱虫药的广泛应用和研究，发现碘醚柳胺有明显胚胎毒性[1]； 氯氰碘柳胺对肝、肾具有一定的毒、副作用[2]； 高剂量硝碘酚腈可引起心脏、神经、肌肉和呼吸的损害[3]。欧洲医药评价署、澳大利亚以及食品法典委员会均已制定了上述药物的最大残留限量（Maximum residue limit，MRL），残留标志物均为原形药物，残留监测的动物是牛羊。靶组织MRL分别如下：硝碘酚腈：牛、羊，肌肉400 μg/kg、脂肪200 μg/kg、肝20 μg/kg、肾400 μg/kg。碘醚柳胺：牛，肌肉30 μg/kg、脂肪30 μg/kg、肝10 μg/kg、肾40 μg/kg； 羊，肌肉100 μg/kg、脂肪250 μg/kg、肝150 μg/kg、肾150 μg/kg。氯氰碘柳胺：牛，肌肉1000 μg/kg、脂肪3000 μg/kg、肝1000 μg/kg、肾3000 μg/kg； 羊，肌肉1500 μg/kg、脂肪2000 μg/kg、肝1500 μg/kg、肾5000 μg/kg。氯羟柳胺：牛、绵羊，肌肉20 μg/kg、脂肪20 μg/kg、肝500 μg/kg、肾100 μg/kg。我国农业部（2003）235号公告[4]已经颁布硝碘酚腈、碘醚柳胺、氯氰碘柳胺的最高残留限量，氯羟柳胺的最高残留限量正在制定中。
目前，关于苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在组织中残留的检测策略主要有高效液相色谱与紫外检测器[5～8]、荧光检测器和质谱检测器联用[9，10]、高效液相色谱 串联质谱法[11～16]。国内仅报道高效液相色谱 串联质谱法[9]检测氯氰碘柳胺在牛组织和牛奶中残留的研究，国外对于苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在组织中残留分析策略的报道主要局限于某种组织或者是单残留和两种药物的残留检测策略，尚未报道关于4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在牛、羊组织中的多残留检测策略。本研究采用HPLC MS/MS分析牛、羊组织中4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留，策略前处理简便易行，灵敏度高，精密度及重复性好，适用于牛、羊组织中苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留检测。
2 实验部分
硝碘酚腈（Nitroxinil，NIT）精制对照品（纯度98.5%，批号 091205），氯羟柳胺（Oxyclozanide，OXY）精制对照品（纯度98.5%，批号1670811），氯氰碘柳胺钠（Closantel，CLO）精制对照品（纯度94.1%，批号 67111001），碘醚柳胺（Rafoxanide，RAF）精制对照品（纯度99.5%， 批号 0505028），均购自河北远征药业有限公司； 乙腈、甲醇、甲酸（色谱纯，德国CNW科技公司）； 乙酸铵（色谱纯，美国TEDIA公司）； 氨水、冰醋酸（分析纯，江苏强盛功能化学股份有限公司）； 实验用水为超纯水。
摘 要 建立了高效液相色谱 串联质谱法同时测定牛、羊组织中硝碘酚腈、氯羟柳胺、氯氰碘柳胺、碘醚柳胺4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留检测策略。样品用乙腈 丙酮（60∶40，V/V）（肌肉、肝脏和肾脏组织）或1%三乙胺乙腈（脂肪组织）超声提取，MAX阴离子固相萃取柱净化，液相色谱分离，采用多反应监测负离子模式对4种药物同时进行定性定量分析，在1～100 μg/L 范围内，4种药物与其对应峰面积的线性关系良好，相关系数均大于0.99。在牛、羊组织中的检出限（LOD）均为1 μg/kg，定量限（LOQ）均为2.5 μg/kg。 在LOQ、0.5倍最高残留限量（MRL）、MRL、2倍MRL添加水平下，4 种药物的平均回收率在71%～112%之间，日内相对标准偏差（RSD）在1.1%～14.0%之间，日间RSD在6.4%～14.7%之间。采用本策略对市场上动物可食性组织进行抽样检测，共抽检40份样品，2份样品检测出苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药残留。
关键词 苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药； 牛羊组织； 多残留； 高效液相色谱 串联质谱
1 引 言
氯羟柳胺（OXY）、硝碘酚腈（NIT）、氯氰碘柳胺（CLO）、碘醚柳胺（RAF）是一类苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药，作用机理是通过阻断肝片吸虫的氧化磷酸化过程，使虫体麻痹、死亡，用于驱杀牛、羊的肝片吸虫、蛔虫和绦虫，对血毛线虫、巨片吸虫和羊蝇蛆亦有较好作用。随着国内驱虫药的广泛应用和研究，发现碘醚柳胺有明显胚胎毒性[1]； 氯氰碘柳胺对肝、肾具有一定的毒、副作用[2]； 高剂量硝碘酚腈可引起心脏、神经、肌肉和呼吸的损害[3]。欧洲医药评价署、澳大利亚以及食品法典委员会均已制定了上述药物的最大残留限量（Maximum residue limit，MRL），残留标志物均为原形药物，残留监测的动物是牛羊。靶组织MRL分别如下：硝碘酚腈：牛、羊，肌肉400 μg/kg、脂肪200 μg/kg、肝20 μg/kg、肾400 μg/kg。碘醚柳胺：牛，肌肉30 μg/kg、脂肪30 μg/kg、肝10 μg/kg、肾40 μg/kg； 羊，肌肉100 μg/kg、脂肪250 μg/kg、肝150 μg/kg、肾150 μg/kg。氯氰碘柳胺：牛，肌肉1000 μg/kg、脂肪3000 μg/kg、肝1000 μg/kg、肾3000 μg/kg； 羊，肌肉1500 μg/kg、脂肪2000 μg/kg、肝1500 μg/kg、肾5000 μg/kg。氯羟柳胺：牛、绵羊，肌肉20 μg/kg、脂肪20 μg/kg、肝500 μg/kg、肾100 μg/kg。我国农业部（2003）235号公告[4]已经颁布硝碘酚腈、碘醚柳胺、氯氰碘柳胺的最高残留限量，氯羟柳胺的最高残留限量正在制定中。
目前，关于苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在组织中残留的检测策略主要有高效液相色谱与紫外检测器[5～8]、荧光检测器和质谱检测器联用[9，10]、高效液相色谱 串联质谱法[11～16]。国内仅报道高效液相色谱 串联质谱法[9]检测氯氰碘柳胺在牛组织和牛奶中残留的研究，国外对于苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在组织中残留分析策略的报道主要局限于某种组织或者是单残留和两种药物的残留检测策略，尚未报道关于4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药在牛、羊组织中的多残留检测策略。本研究采用HPLC MS/MS分析牛、羊组织中4种苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留，策略前处理简便易行，灵敏度高，精密度及重复性好，适用于牛、羊组织中苯酚类和水杨酸苯胺类抗蠕虫药的多残留检测。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Agilent 1200型液相色谱仪（美国安捷伦公司）； API4000电喷雾 串联四极杆质谱仪，配Analyst 4.1.5 软件（美国应用生物系统公司）； C18 色谱柱（150 mm×2.1 mm， 3.5 μm， 美国Waters公司）； Centrifuge5804台式高速离心机（美国Eppendorf公司）； D10 24型氮气浓缩仪（杭州奥盛仪器有限公司）； Milli Q纯水机（美国Millipore公司）； CNWBOND MAX固相萃取小柱（60 mg/3 mL，德国CNW科技公司）。硝碘酚腈（Nitroxinil，NIT）精制对照品（纯度98.5%，批号 091205），氯羟柳胺（Oxyclozanide，OXY）精制对照品（纯度98.5%，批号1670811），氯氰碘柳胺钠（Closantel，CLO）精制对照品（纯度94.1%，批号 67111001），碘醚柳胺（Rafoxanide，RAF）精制对照品（纯度99.5%， 批号 0505028），均购自河北远征药业有限公司； 乙腈、甲醇、甲酸（色谱纯，德国CNW科技公司）； 乙酸铵（色谱纯，美国TEDIA公司）； 氨水、冰醋酸（分析纯，江苏强盛功能化学股份有限公司）； 实验用水为超纯水。