阐述革兰氏阳性球菌引起血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏方法

论文导读：
[摘要] 目的 分析讨论革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的策略。策略 对我院2012年3月——2013年3月间的革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本的细菌鉴定和药敏的策略进行归纳统计，用直接法上机鉴定药敏和常规法鉴定药敏，比较两种策略的鉴定、药敏符合率、发报告时间等。结果 直接法和常规法两种策略的鉴定符合率分别100%、93.33%，药敏符合率分别为98.33%、96.67%，发报告时间分别为3-4d、5-6d，鉴定符合率两组相比较具有显著性差异，药敏符合率、发报告时间无显著性差异。结论 革兰氏阳性球菌的鉴定相比较革兰氏阴性杆菌等的鉴定有些难度，程序复杂，鉴定的准确率也受到影响，使用全自动血培养仪鉴定药敏更为可靠、方便，但成本高，需要购买鉴定仪，这对于基层医院还是有难度。
[关键词] 革兰氏阳性球菌；血培养阳性标本；直接细菌鉴定；药敏
文章编号：1004-7484（2014）-03-1251-01
随着抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂、各种侵袭性操作，特别是静脉导管及各种介入手段的应用，血行性感染在医院中的发生率有上升趋势[1]，所以对血培养中病原菌的耐药性监测和寻找敏感的药物显得特别重要。血培养（blood culture）是将新鲜离体的血液标本接种于营养培养基上，在一定温度、湿度等条件下，使对营养要求较高的细菌生长繁殖并对其进行鉴别，从而确定病原菌的一种人工培养法。用于菌血症、败血症及脓毒败血症的病因学诊断，随着全自动血培养仪的引进，不仅大大提高了血培养阳性率，而且对于阳性标本24h内可报警提示，比传统手工血培养缩短了24-48h，但血培养阳性标本从采集到给临床一份完整的结果报告，仍需要3-4d[2]为了提高血培养的阳性率，客观的反映出败血症患者血内存在病原菌的实际状况，临床医生精确选用血培养，检验科室精心分离鉴定，现就革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的策略做以下的讨论分析：
1 资料与策略
1.1 一般资料 对我院2012年3月——2013年3月间的120例革兰氏阳性球菌引起的血培养阳性标本的细菌鉴定和药敏的策略进行归纳统计。
1.2 仪器及其材料 血培养仪为BacT9050型全自动血培养仪，树脂血培养瓶均为美国Bactec Dickinson公司生产；G+菌鉴定及药敏综合板（PC11）为美国DadeBerhing公司产品，血平板和M-H药敏平板购于（北京奥博星生物技术责任有限公司），药敏纸片购于（陕西中北公司），由美国B.D公司生产，菌株鉴定按照常规策略使用VITEK微生物全自动分析仪，手工药敏试验采用K-B划线法。
1.3 标本采集及其培养 由临床在寒颤或高热时无菌操作采集标本与血培养瓶中，送检微生物室置于血培养仪中，仪器报警后转种血平板，5天阴性标本进行盲种。
1.4 质控菌株 大肠杆菌ATCC25922、金葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853、肺炎克雷伯ATCC700603购于卫生部临床检验中心。
1.5 策略 将临床所采集的血培养瓶放入BacT9050系统，系统自动孵育和检测.当系统发生响声报警时，提示有细菌生长的阳性瓶被检出，用无菌注射器抽取阳性瓶中菌液涂片行革兰氏染色后镜检，根据镜检结果为革兰氏阳性球菌是做触酶试验，直接法将菌液浓度调整至6.9×108CFU/L.然后将其接种于PC11综合板，上微生物分析仪进行细菌鉴定与药敏试验；常规法是将阳性标本分别转种血平板、麦康凯平板和巧克力平板，经35℃孵育18-24h后，挑取生长菌落涂片，行革兰染色镜检，根据镜检结果触酶试验，按VITEK微生物全自动分析仪系统操作步骤上机进行细菌鉴定与药敏试验。

1.6 统计学处理 采用MannWhitney U检验，检验水准α=0.05。

2 结 果
直接法和常规法两种策略的鉴定符合率分别100%、93.33%，药敏符合率分别为98.33%、96.67%，发报告时间分别为3-4d、5-6d，鉴定符合率两组相比较具有显著性差异，药敏符合率、发报告时间无显著性差异，见表1。
3 讨 论
血培养是临床诊断败血症的重要策略，阳性结果对明确诊断、对症治疗有极高的应用价值。因此临床上疑为败血症的患者，必须尽快做血培养检测，为临床尽早明确诊断和准确治疗败血症提供直接依据[3]，国内相关文献报道显示血培养阳性率大多在10%左右[4]。在血培养阳性标本中，有革兰氏阳性球菌引起的阳性比率较高，但革兰氏阳性球菌的鉴定没有革兰氏阴性杆菌那么容易，在本次讨论数据中我们选择了直接法和常规法对革兰氏阳性球菌进行鉴定药敏，讨论结果显示直接法和常规法两种策略的鉴定符合率分别100%、93.33%，药敏符合率分别为98，33%、96.67%，发报告时间分别问3-4d、5-6d，鉴定符合率两组相比较具有显著性差异，药敏符合率、发报告时间无显著性差异。自动血液细菌培养仪配合其抗生素中和增菌培养基，操作简便，结果快速准确[3]，48h内大部分病原菌都能及时检测出来，大幅度缩短了检测时间[4]。本实验所采取的直接鉴定法也是只需根据阳性标本涂片染色后的镜检结果来选择相应的鉴定板型，调整合适的菌液浓度直接上机进行检测.但与过去文献报道的直接鉴定法相比，本实验在两个方面有所改善：一是采用了树脂血培养瓶，其最大优点是能溶解血液红细胞和白细胞、无须离心且对直接法检测的结果没有影响[7]，同时也比较了两种策略的药敏符合率。
综上所述，在血培养中，革兰氏阳性球菌的阳性率比较高，在鉴定和药敏过程中，如果条件允许，尽量使用全自动血培养仪，这样不但能提高鉴定、药敏符合率，也能提前发出报告尽快为临床提供诊断和用药依据。
参考文献
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