研究代谢工程大肠杆菌积累丙酮酸

论文导读：学术研讨会论文集;、覃宗华;谢明权;蔡建平;艾哈迈德;彭新宇;魏文康;吴惠贤-毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达;中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集;、孙伟;潘石;李银丽;宋林峰;张毅;吴世法-大肠杆菌与副流感病毒样品的原子力显微镜成像研究;大珩先生九十华诞文集
代谢工程大肠杆菌积累丙酮酸的论文相关文献前6条姜胜斌,喻宗沅,袁华;丙酮酸(酯)的合成策略评述[J];湖北化工;1999年05期、胡兵,龙化云,黄光斗;丙酮酸的合成研究进展[J];化工时刊;、杨辉琼,易翔,郭贤烙;乳酸氧气氧化法制备丙酮酸[J];化学世界;、李红，江琳才;间接电催化氧化法合成丙酮酸[J];精细化工;1999年03期、许平,马翠卿,祁庆生,沈亚领,曲音波;爱德华氏菌产乳酸氧化酶的条件研究[J];微生物学报;1999年02期、谷劲松,许平,李铁林,曲音波;乳酸氧化酶转化乳酸产丙酮酸[J];应用与环境生物学报;【共引文献】 中国期刊全文数据库陈梅芳,刘云,徐琪寿;代谢工程在芳香化合物生物合成研究中的应用[J];氨基酸和生物资源;、陈丽芳;丁洁女;柳志强;郑裕国-蛋白质定向进化及其在微生物代谢调控中的应用[J];基因组学与应用生物学;、赵丽丽,陈宁,张克旭;代谢工程在D-核糖生产中研究目前状况及应用前景[J];工业微生物;、刘峥,李亚敏;间接电解氧化法制备环己酮[J];合成化学;、张华;杜海燕;孙家跃;李宁-我国丙酮酸及系列产品合成工艺10a进展[J];化工时刊;、周海燕;洪厚胜-代谢分析用于丙酮酸发酵的研究进展[J];化工时刊;、堵国成;刘立明;李寅;陈坚-以高产量、高产率、高生产强度为目标的发酵过程优化技术[J];化工进展;、李寅,陈坚,伦世仪;丙酮酸分批发酵的供氧制约模式[J];化工学报;、李寅,曹竹安;微生物代谢工程:绘制细胞工厂的蓝图[J];化工学报;、许庆龙;刘立明;史仲平;堵国成;陈坚-基于动力学模型的丙酮酸分批发酵温度制约策略[J];化工学报; 前1条 李继珩;李肃-丙酮酸研究的进展[A];刊全文数据库前6条胡旭灿,沈伟,徐华龙,周亚明,王玉,项一非,刘金香;乳酸乙酯在Ag/NaY催化剂上的脱氢反应制丙酮酸乙酯[J];催化学报;1998年05期、朱京,项一非,苏斌,王力江;丙二醇空气氧化制丙酮醛的电结晶银催化剂[J];复旦学报(自然科学版);1989年01期、姜胜斌,喻宗沅,袁华;丙酮酸(酯)的合成策略评述[J];湖北化工;1999年05期、吴俊明;1,2-丙二醇空气氧化合成丙酮醛[J];化工时刊;1997年12期、李红,江琳才,蒋雄,王瑞香;溴离子在铂电极上的电化学反应[J];华南师范大学学报(自然科学版);1997年04期、姜胜斌,廖桂英,袁华,喻宗沅;丙酮酸系列产品[J];精细与专用化学品;【相似文献】 中国期刊全文数据库陈伟,于梅,李山虎,王鸣刚,周建光;pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用[J];生物工程学报;、闫继爱;张雪;张芸;左佃光;陈宁;温廷益-利用Red同源重组技术构建产L-苏氨酸的基因工程菌[J];中国生物工程杂志;、苏静;邓培生;谢希贤;陈宁-基于cdd基因敲除和嘧啶操纵子转移的胞苷产生菌的研究[J];天津科技大学学报;、熊向华;杨璐;韩晓东;汪建华;张惟材-大肠杆菌pL基因敲除与功能分析[J];微生物学报;、;毛雨;马兰;李强;李望良;邢建民;苏志国-乳糖诱导丙酮酸羧化酶基因在大肠杆菌中的表达及对丁二酸产量的影响[J];生物工程学报;、周军智;邹永康;戴红梅;李树龙;蔡亚非;方宏清-大肠杆菌ptsHIcrr操纵子的快速敲除及敲除菌生长性能测定[J];微生物学通报;、杨捷;钱晋;叶江;吴海珍;张惠展-大肠杆菌莽草酸生物合成途径的基因操作[J];华东理工大学学报(自然科学版);、陶张欢;赵旵军;郑恩霞;朱国萍-大肠杆菌arpA基因的表达及功能鉴定[J];浙江理工大学学报;、蔡润生;微生物学基础研究和微生物分子遗传学的进展[J];中国抗生素杂志;1979年05期、郭勇;永井和夫;田村学造-二环素对大肠杆菌蛋白质合成的选择性作用[J];微生物学报;1982年01期 欧阳萍;雷连成;吕爽;韩文瑜-人溶菌酶基因在大肠杆菌中的融合表达及其生物学活性的研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集（、王鹏雁;陈创夫;张再超;毛志福;任艳-表达大肠杆菌K88ac-STⅡ的口服沙门氏菌活苗的动物免疫试验[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];、杨海华-肉鸡支原体与大肠杆菌混合感染病例的综合诊治[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];、杨玲丽;陈杖榴-相同耐药谱大肠杆菌的脉冲场电泳分型研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];、覃宗华;谢明权;蔡建平;艾哈迈德;彭新宇;魏文康;吴惠贤-毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];、孙伟;潘石;李银丽;宋林峰;张毅;吴世法-大肠杆菌与副流感病毒样品的原子力显微镜成像研究[A];大珩先生九十华诞文集暨中国光学学会学术大会论文集[C];、赵姗姗;张桂荣;于艳辉;张忆华-头孢他啶诱导大肠杆菌内毒素释放的研究[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];、刘昀;李冉辉;郑易之-大豆PM2(LEA3)蛋白及22-氨基酸结构域在植物和大肠杆菌中的耐盐功能鉴定[A];中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];、王小娟;陈向东-属间细菌质粒自然遗传转化[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];、许金俊;陶建平;彭金彪;王留-柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因在大肠杆菌中的高效表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];
论文目录
摘要7-8
Abstract8-14
第一章文献综述14-27

1.1丙酮酸的性质与用途14

1.2丙酮酸的生产1论文导读：

4-19

1.2.1化学合成法生产丙酮酸14-16

1.2.2生物法生产丙酮酸16-19

1.2.2.1生物直接发酵法16-18

1.2.2.2生物催化转化法18-19

1.3代谢工程19-21

1.3.1代谢工程的概念19

1.3.2代谢工程的原理策略及应用19-21

1.4LpdA突变菌21-26

1.4.1LpdA基因21-22

1.4.2基因敲除22-24

1.4.3基因敲除过程中用到的辅助质粒24-26

1.5本文的研究思路和目标26-27

第二章不同糖为碳源培养E.colilpdA~-积累丙酮酸27-44

2.1引言27

2.2实验材料与仪器设备27-29

2.1菌种27

2.2试剂27-28

2.3仪器设备28-29

2.3实验策略29

2.3.1培养基组成29

2.3.2培养条件29

2.4分析策略29-35

2.4.1菌体浓度的测定29-30

2.4.

1.1菌体浓度标准曲线29-30

2.4.

1.2发酵液中菌体浓度测定30

2.4.2D-葡萄糖浓度的测定30-32

2.4.1DNS法原理30-31

2.4.2DNS法标准曲线31-32

2.4.3发酵液中葡萄糖浓度的DNS法测定32

2.4.3DNP法测定丙酮酸浓度32-34

2.4.3.1DNP法原理32-33

2.4.3.2DNP法标准曲线33-34

2.4.3.3发酵液中丙酮酸浓度的DNP法测定34

2.4.4HPLC法测定丙酮酸浓度34-35

2.4.4.1HPLC色谱条件34

2.4.4.2HPLC标准曲线34-35

2.4.4.3HPLC法测定发酵液中丙酮酸的浓度35

2.5结果与讨论35-43

2.5.1LpdA突变菌代谢网络35-37

2.5.2野生型大肠杆菌的葡萄糖发酵结果37

2.5.3LpdA突变菌分别以不同糖为碳源发酵积累丙酮酸37-40

2.5.4接种浓度对葡萄糖为碳源发酵的影响40-41

2.5.5LpdA突变菌在不同葡萄糖浓度下发酵41-43

2.6本章小结43-44

第三章E.colilpdA~-培养基优化及代谢分析44-59

3.1引言44

3.2实验材料与仪器设备44

3.

2.1菌种44

3.

2.2试剂44

3.

2.3仪器设备44

3.3实验策略44-45

3.1培养基组成44-45

3.2培养条件45

3.4分析策略45-47

3.4.1菌体浓度的测定45-46

3.4.2D-葡萄糖浓度的测定46

3.4.3DNP法测定丙酮酸浓度46

3.4.4HPLC法测定丙酮酸乙酸浓度46-47

3.4.4.1HPLC色谱条件46

3.4.4.2HPLC标准曲线46-47

3.4.4.3HPLC法测定发酵液中丙酮酸、乙酸的浓度47

3.4.5荧光分光光度法检测胞内NAD~+及NADH浓度47

3.5结果与讨论47-57

3.5.1补充维生素对E.colilpdA~-发酵的影响47-50

3.5.2在基本培养基中添加LB培养基时lpdA突变菌发酵葡萄糖50-51

3.5.3丙酮酸为底物的发酵考察51-55

3.5.1野生型大肠杆菌与lpdA突变菌的丙酮酸发酵结果51-53

3.5.2不同接种量对lpdA突变菌以丙酮酸为碳源发酵的影响53-55

3.5.4丙酮酸积累与NADH/NAD~+的关联55-57

3.5.4.1LpdA突变菌丙酮酸代谢55-56

3.5.4.2丙酮酸积累与氧化还原电位的关联56-57

3.6本章小结57-59

第四章大肠杆菌呼吸链基因敲除菌株的代谢分析59-78

4.1引言59

4.2实验材料与仪器设备59-61

4.

2.1菌种59-60

4.

2.2试剂60

4.

2.3仪器设备60-61

4.3实验策略61-62
4.

3.1培养基组成61-62

4.

3.2培养条件62

4.4分析策略62-66

4.1菌体浓度的测定62

4.2胞外代谢物检测62-63

4.3CO_2和O_2检测63

4.4酶活检测63-64

4.5利用RT-PCR考察基因转录水平64-66

4.5.1RNA的抽提64

4.5.2RNA的定量64

4.5.3RNA的纯度测定64

4.5.4特定基因的扩增及电泳64-66

4.5结果与讨论66-77

4.5.1CyoA和cydB突变菌代谢66-67

4.5.2分批培养67-74

4.5.

2.1合成培养基培养67-72

4.5.

2.2缺氮培养基培养72-74

4.5.3恒化器培养74-77
4.5.

3.1合成培养基培养74

4.5.

3.2缺氮培养基培养74-77

4.6本章小结77-78
第五章结论78-80
参考文献80-87
致谢87
丙酮酸lpdA基因大肠杆菌cyoA基因cydB基因
参考文献
秦义;光滑球拟酵母发酵生产丙酮酸中NADH的生理功能剖析[D];江南大学;刊全文数据库前6条胡旭灿,沈伟,徐华龙,周亚明,王玉,项一非,刘金香;乳酸乙酯在Ag/NaY催化剂上的脱氢反应制丙酮酸乙酯[J];催化学报;1998年05期、朱京,项一非,苏斌,王力江;丙二醇空气氧化制丙酮醛的电结晶银催化剂[J];复旦学报(自然科学版);1989年01期、姜胜斌,喻宗沅,袁华;丙酮酸(酯)的合成策略评述[J];湖北化工;1999年05期、吴俊明;1,2-丙二醇空气氧化合成丙酮醛[J];化工时刊;1997年12期、李红,江琳才,蒋雄,王瑞香;溴离子在铂电极上的电化学反应[J];华南师范大学学报(自然科学版);1997年04期、姜胜斌,廖桂英,袁华,喻宗沅;丙酮酸系列产品[J];精细与专用化学品;【相似文献】 中国期刊全文数据库陈伟,于梅,李山虎,王鸣刚,周建光;pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用[J];生物工程学报;、闫继爱;张雪;张芸;左佃光;陈宁;温廷益-利用Red同源重组技术构建产L-苏氨酸的基因工程菌[J];中国生物工程杂志;、苏静;邓培生;谢希贤;陈宁-基于cdd基因敲除和嘧啶操纵子转移的胞苷产生菌的研究[J];天津科技大学学报;、熊向华;杨璐;韩晓东;汪建华;张惟材-大肠杆菌pL基因敲除与功能分析[J];微生物学报;、;毛雨论文导读：赵博;酵母代谢进化改善丙酮酸生产性能的研究;河南工业大学;、汪军;提升光滑球拟酵母酸耐受性加强丙酮酸合成;江南大学;、王阳;大肠杆菌5-氨基乙酰丙酸合成途径的改造及其对菌体代谢影响的初步研究;山东大学;、张继冉;丙酮酸发酵工艺的优化及其快速测定策略的研究;河南大学;、王晓强;血小板反应素1活性cDN段的克隆
;马兰;李强;李望良;邢建民;苏志国-乳糖诱导丙酮酸羧化酶基因在大肠杆菌中的表达及对丁二酸产量的影响[J];生物工程学报;、周军智;邹永康;戴红梅;李树龙;蔡亚非;方宏清-大肠杆菌ptsHIcrr操纵子的快速敲除及敲除菌生长性能测定[J];微生物学通报;、杨捷;钱晋;叶江;吴海珍;张惠展-大肠杆菌莽草酸生物合成途径的基因操作[J];华东理工大学学报(自然科学版);、陶张欢;赵旵军;郑恩霞;朱国萍-大肠杆菌arpA基因的表达及功能鉴定[J];浙江理工大学学报;、蔡润生;微生物学基础研究和微生物分子遗传学的进展[J];中国抗生素杂志;1979年05期、郭勇;永井和夫;田村学造-二环素对大肠杆菌蛋白质合成的选择性作用[J];微生物学报;1982年01期 欧阳萍;雷连成;吕爽;韩文瑜-人溶菌酶基因在大肠杆菌中的融合表达及其生物学活性的研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集（、王鹏雁;陈创夫;张再超;毛志福;任艳-表达大肠杆菌K88ac-STⅡ的口服沙门氏菌活苗的动物免疫试验[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];、杨海华-肉鸡支原体与大肠杆菌混合感染病例的综合诊治[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];、杨玲丽;陈杖榴-相同耐药谱大肠杆菌的脉冲场电泳分型研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];、覃宗华;谢明权;蔡建平;艾哈迈德;彭新宇;魏文康;吴惠贤-毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];、孙伟;潘石;李银丽;宋林峰;张毅;吴世法-大肠杆菌与副流感病毒样品的原子力显微镜成像研究[A];大珩先生九十华诞文集暨中国光学学会学术大会论文集[C];、赵姗姗;张桂荣;于艳辉;张忆华-头孢他啶诱导大肠杆菌内毒素释放的研究[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];、刘昀;李冉辉;郑易之-大豆PM2(LEA3)蛋白及22-氨基酸结构域在植物和大肠杆菌中的耐盐功能鉴定[A];中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];、王小娟;陈向东-属间细菌质粒自然遗传转化[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];、许金俊;陶建平;彭金彪;王留-柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因在大肠杆菌中的高效表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C]; 中国重要报纸全文数据库记者　陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;、裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的策略[N];中国医药报;、沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;、;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;、陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;、编译王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;、记者冯卫东;除菌香皂其实并不除菌[N];科技日报;、冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;、宁夏隆德县畜牧兽医站罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;、赵承渊北京大学第一医院;“怪病”频出:医学昌明的代价?[N];大众科技报; 中国博士学位论文全文数据库孙凤军;大肠杆菌生物膜的形成及其耐药质粒传递和调控的研究[D];第三军医大学;、姜中其;仔猪断奶腹泻性大肠杆菌的多重耐药性、毒力因子分布及特异性蛋黄抗体药效的研究[D];浙江大学;、陈欣;代谢工程改造大肠杆菌发酵生产氨基葡萄糖及过程优化与制约[D];江南大学;、王倩;聚羟基脂肪酸酯在大肠杆菌中的合成、降解以及分子改造[D];山东大学;、郑宗宝;一体化生物加工过程进行大肠杆菌的半纤维素琥珀酸生产[D];天津大学;、张群芳;赖氨酸乙酰化调节大肠杆菌NhoA蛋白活性的研究[D];华中农业大学;、惠长野;大肠杆菌K1致病株外膜蛋白T毒力相关功能研究[D];南方医科大学;、康振;大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D];山东大学;、宋智青;离子束和高压电场诱变大肠杆菌K12的实验研究[D];内蒙古大学;、王庆昭;高产琥珀酸大肠杆菌的代谢工程[D];天津大学; 中国硕士学位论文全文数据库沈冬钱;代谢工程大肠杆菌积累丙酮酸的研究[D];浙江大学;、黄彦;乳酸片球菌L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[D];广西大学;、赵博;酵母代谢进化改善丙酮酸生产性能的研究[D];河南工业大学;、汪军;提升光滑球拟酵母酸耐受性加强丙酮酸合成[D];江南大学;、王阳;大肠杆菌5-氨基乙酰丙酸合成途径的改造及其对菌体代谢影响的初步研究[D];山东大学;、张继冉;丙酮酸发酵工艺的优化及其快速测定策略的研究[D];河南大学;、王晓强;血小板反应素1活性cDN段的克隆与表达[D];四川大学;、周璇;重组人IZ-CD40L在大肠杆菌中的高效表达和生物学活性的鉴定[D];苏州大学;、张建军;大肠杆菌F18菌毛操纵子fed基因的克隆、表达及其生物活性的初步研究[D];扬州大学;、涂健;抗生素和内毒素诱发鸡肠源性大肠杆菌易位的实验研究[D];安徽农业大学;