简析总量统计矩法评价祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内药代动力学特征

论文导读：为指标并采用传统数学模型进行药代动力学研究，尚不能满足中药复方整体效应的体现，不利于进一步研究药物所发挥的整体作用、整体药效的作用机制及物质基础。总量统计矩分析法的原理是根据统计矩学中的多维随机向量求数学期望及方差的思路来寻找药物中多个成分的代谢动力学中心，该法以统计矩分析法为基础，并以药-时曲线下面积为
摘要： 为明确总量统计矩分析法的适用性，该文运用总量统计矩分析法获取祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内的整体药动学特征，同时获悉2个有效成分于生理和病理状态下在家兔体内的整体药动行为的差异。该文通过复制家兔血瘀模型，采用已建立的家兔血浆中大黄酸与大黄酚HPLC含量检测策略，测定灌胃祛瘀清热颗粒后正常与血瘀家兔体内2个成分的经时血药浓度，进一步采用总量统计矩分析法计算各总量药动学参数，比较2个成分在正常与血瘀家兔体内的整体药动学特征的差异。结果，血瘀组VRTt大于正常组，且具有显著性差异（P<0.05）；血瘀组的AUCt，MRTt，t1/2t与Vt参数值均大于正常组，而kt，CLt小于正常组；表明与正常家兔相比，大黄酸与大黄酚在血瘀家兔体内的总体入血量更大，释放和吸收更快，滞留时间更长，消除减慢。总量统计矩可整合大黄酸与大黄酚的药代动力学参数，能表达祛瘀清热颗粒中这2个有效成分整体的药代动力学行为。
[关键字] 祛瘀清热颗粒；大黄酸；大黄酚；药代动力学；总量统计矩
[收稿日期] 2013-09-24
[基金项目] 浙江省自然科学基金项目（Y2110991）
[通信作者] *严云良，副教授，从事数理医药学研究，Tel：（0571）86633116，E-mail：yylhz123456@sina.com
祖国医学治疗血瘀证的历史悠久，经验独到，其中不乏有许多经方、名方沿用至今。桃核承气汤为《伤寒杂病论》中辨治瘀证的重要基础代表方，具逐瘀泄热之功效，现代研究表明，该方及其加减方能降低血黏度、总量统计矩法评价祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内的药代动力学特征由提供海量免费论文范文的www.7ctime.com,希望对您的论文写作有帮助.胆固醇、纤维蛋白原和血糖、降低血小板黏附机能而不影响血小板数量[1-2]，并能显著扩张血管、改善微循环[3]。在中医药理论指导下，项目组前期已对桃核承气加减方进行了剂型改良，根据现药工艺精制成了祛瘀清热颗粒剂。前期研究显示，祛瘀清热颗粒剂可有效改善血瘀家兔体内血液流变学和抗氧化作用。项目组拟在对其质量制约、制备工艺以及药效研究[4-6]的基础上，进一步开展药代动力学和药效物质的相关研究。
中药复方药代动力学研究常套用基础药代动力学的数学模型，多为房室、非线性以及统计矩模型，然而中药复方成分复杂，各有效成分的作用途径、对机体的影响各不相同，且它们之间也会相互影响[7]。因此，对于中药复方而言，仅以单一活性成分（效应）为指标并采用传统数学模型进行药代动力学研究，尚不能满足中药复方整体效应的体现，不利于进一步研究药物所发挥的整体作用、整体药效的作用机制及物质基础[8]。总量统计矩分析法的原理是根据统计矩学中的多维随机向量求数学期望及方差的思路来寻找药物中多个成分的代谢动力学中心，该法以统计矩分析法为基础，并以药-时曲线下面积为主要计算依据，其不受房室模型等数学模型的限制，适用面广[9-10]，能整合多成分的动力学参数，表达多成分体系的总量药动学行为，可弥补传统药动分析策略仅能实现单一成分分析的不足，在当前缺少中药复方药代动力学多成分信息处理策略的情况下，该策略不失为一种行之有效的分析策略。
大黄酸和大黄酚为祛瘀清热颗粒中君药大黄的主要活性成分，具抗肿瘤、抗炎、抗血栓形成、抑菌以及抗氧化等作用[11-14]，有关此2个成分的研究一直以来较受关注。本文拟以大黄酸和大黄酚为切入点，运用总量统计矩分析策略，对祛瘀清热颗粒中此2个成分在正常与血瘀2种不同机体状态下家兔体内的血药浓度-时间数据进行处理，并计算相应的总量统计矩药动学参数，拟获得相应的总量药动学参数，为进一步评价祛瘀清热颗粒的总量药动学特征提供依据。
1 原理
统计矩分析法属于非房室模型分析策略，其主要有以下几种参数[15]。
零阶矩（AUC）：为血药浓度时间下曲线面积（时间从零到无限大），公式为（1），式中t为时间，C为经时血药浓度，k为消除速率常数，i为采血点数。 AUC=∫∞0Cdt=∑n i=1（Ci+Ci-1）（ti-ti-1） 2（1）
一阶矩（MRT）：为平均滞留时间，可定义为公式（2）。
MRT=∫∞0tCdt/∫∞0Cdt=AUMC AUC（2）
（AUMC=∫∞0tCdt=∑n i=1（tiCi+ti-1Ci-1）（ti-ti-1） 2+tnCn k+Cn k2）
二阶矩（VRT）：为平均滞留时间的方差，其公式为（3）。
VRT=∫∞0t2Cdt/AUC-MRT2=S AUC-（AUMC AUC）2（3）
（S=∑n i=1（ti2Ci+ti-12Ci-1）（ti-ti-1） 2+tn2Cn k+2tnCn k2+2Cn k3）
总量统计矩分析法可根据统计矩学中的多维随机向量求数学期望及方差的思路来寻找药物中多个成分的代谢动力学中心。中药复方属多成分体系，其总量药代动力学可以根据统计矩原理，建立中药复方总量零阶矩、总量一阶矩、总量二阶矩，并由此推导出如总体表观半衰期、总体表观消除平衡常数、总体表观清除率以及总体表观分布容积等总量药代动力学表观参数[16]，整合各单个成分的各药动学参数，从而实现微观各成分药动学参数与宏观总量药动学参数的统一。
总量统计矩分析法可克服传统药代动力学研究受诸多数学模型的局限，可将复方各成分的动力学参数整合，寻找到多成分的动力学总量中心点及离中心点的方差，即为总量一、二阶统计矩。假设中药复方为一个由n个单体成分群构成的体系，其中m个成分服从线性药代动力学，i个成分分别服从一、二、三室模型，N个成分符合非线性药代动力学，S个成分为不规则药动学模型，按照统计矩计算原理，可将各单成分药代动力学研究模型整合起来构成统计矩复合函数模型参数[17]，即复方多成分总量药动学参数，总量零阶矩、总量一阶矩、总量二阶矩等参数公式（4）～（10）如下。总量零阶矩：AUCt=∑n j=1AUCj（j代表各成分）（4）
总量一阶矩：MRTt=∑n j=1MRTj·AUCj ∑n j=1AUCj（5）
总量二阶矩：VRTt=∑n j=1（MRTj2+VRTj）·AUCj ∑n j=1AUCj-MRT2t（6）
总体表观半衰期：t1/2，t=-ln1 2MRTt（7）
总体表观消除平衡常数：kt=1/MRTt（8）
总量清除率：CLt=Xt ∑n j=1AUCj（论文导读：Fig.1MeanconcentrationversustimeprofilesofrheinandchrysophanolinrabbitsafteroraladministrationofQYQRGA.空白血浆；B.加大黄酸和大黄酚对照品后的空白血浆；C.灌胃QUQRG后的血浆样品；1.大黄酸；2.大黄酚。图2大黄酸，大黄酚HPLC图Fig.2HPLCchromatogramsofrheinandchrysophanolμL
Xt为总给药量）（9）
总体表观分布容积：Vt=CLt·MRTt（10）
2 材料
2.1 仪器 Waters-1525-2998高效液相色谱仪（美国沃特斯公司）；0412-1型高速离心机（上海手术器械厂）；BS110S电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；WH-861涡旋混合器（苏州欧倍科学仪器有限公司）；HH-S型恒温水浴锅（巩义市英峪予华仪总量统计矩法评价祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内的药代动力学特征相关论文由www.7ctime.com收集,如需论文.器厂）；DHG-9035 热风循环烘箱（上海林频仪器设备有限公司）。
2.2 样品 祛瘀清热颗粒（批号12050502）由浙江中医药大学药学院制剂室提供；大黄酸对照品（批号0757-200206）及大黄酚对照品（批号110796-200716）均购自中国食品药品检定研究院；高分子右旋糖酐（批号091125，相对分子质量20万） 购于上海丽臣生物科技有限公司；肝素钠注射液（批号100501）购于上海第一生化药业有限公司；色谱纯甲醇（批号20100401）购于天津四友精细化学品有限公司；分析纯磷酸（批号10015418）购于国药集团化学试剂有限公司；分析纯高氯酸（批号20090702）购于上海金鹿化工有限公司；实验用水均为纯净水。
2.3 动物 普通级正常家兔，（2.0±0.2） kg，由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物使用许可证号SYXK（浙）2009-0042。购买后由浙江中医药大学实验动物中心严格按照实验动物的饲养要求管理饲养动物。适应环境饲养1周，饲喂营养颗粒饲料，自由饮水，室内温度（22±2） ℃，相对湿度50%～60%。实验前禁食12 h，期间自由饮水。
3 策略与结果
3.1 色谱条件 Hypersil BDS C18色谱柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸（79∶21）；流速

1.0 mL·min-1；柱温36 ℃；进样量10 μL。

3.2 血瘀家兔造模策略 家兔适应性培养后，于耳缘静脉注射10%高分子右旋糖酐注射液（5 mL·kg-1），早晚各注射1次，连续2 d，并于第3日上午再次注射10%右旋糖酐注射液1次，每次注射平均3 min内注完。实验时筛选已成功造成血瘀模型的家兔5只，作为血瘀家兔给药。
3.3 药液的制备与给药 称取祛瘀清热颗粒（含大黄酸417.18 μg·g -1，大黄酚823.35 μg·g-1）适量，以纯净水溶解，超声10 min，配制成含浓度0.4 g·mL-1的混悬药液。实验时，家兔预先禁食12 h，以

5.00 mL·kg-1的剂量单次灌胃给药。

3.4 家兔全血采集 分别于给药后5，10，15，20，30，45，60，75，90，120，240，360，480 min从正常和血瘀家兔的耳中动脉取血3.0 mL，置于肝素化离心管中，摇匀，抗凝后，4 ℃ 4 000 r·min-1离心15 min，取上层血浆，-20 ℃保存。
3.5 血浆样品前处理 于5 mL 具塞离心管中加入给药后血浆1 000 μL，再加入3 mol·L-1高氯酸溶液500 μL除蛋白，涡旋30 s后，70 ℃水浴加热水解30 min，冷却，加入2 mL，涡旋混合3 min，4 000 r·min-1离心15 min，精取层（最上层）于空离心管，挥干，残渣用50 μL 色谱甲醇溶解，涡旋10 s，4 000 r·min-1离心5 min后取上清液进样。
3.6 药-时曲线 采用已建立的HPLC[4-5]测定正常与血瘀模型2组家兔血浆中大黄酸与大黄酚的经时血药浓度，每组家兔各5只。分别以大黄酸和大黄酚的质量浓度X（mg·L-1）为横坐标，以相应峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程如下。大黄酸：Y =11 887X-2 355.5 （r=0.999 9）。大黄酚：Y =10 874X +337.53 （r=0.999 1），则血浆中大黄酸在1.313～105.0 mg·L-1，定量下限为1.313 mg·L-1；大黄酚在2.125 4～ 2.5 mg·L-1呈良好线性关系，定量下限为2.125 mg·L-1。两有效成分的平均药-时曲线见图1，HPLC色谱图见图2。
3.7 精密度试验 精密吸取适量对照品溶液于5 mL具塞离心管中，挥干甲醇后加入空白血浆500
A.正常家兔；B.血瘀家兔。
图1 灌胃祛瘀清热颗粒后家兔体内大黄酸与大黄酚药-时曲线
Fig.1 Mean concentration versus time profiles of rhein and chrysophanol in rabbits after oral administration of QYQRG
A.空白血浆；B.加大黄酸和大黄酚对照品后的空白血浆；C.灌胃QUQRG后的血浆样品；

1.大黄酸；2.大黄酚。图2 大黄酸，大黄酚HPLC图

Fig.2 HPLC chromatograms of rhein and chrysophanol
μL，按照3.5项策略制备高、中、低3个浓度的质控样品，每个浓度各6份。分别测定高、中、低3个浓度样品中大黄酸与大黄酚的峰面积，并分别计算其日内、日间精密度。结果大黄酸与大黄酚的日内和日间精密度均小于15%，其中大黄酸3个质量浓度（94.50，52.50，2.625 mg·L-1）的日内精密度分别为2.3%，6.7%，9.5%，日间精密度分别为4.6%，6.7%，5.8%；大黄酚3个质量浓度（27.40，25.50，4.250 mg·L-1）的日内精密度分别为4.7%，4.7%，6.6%，日间精密度分别为5.3%，6.6%，6.0%，结果均符合《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》要求。
3.8 提取回收率试验 精密吸取适量对照品溶液于5 mL具塞离心管中，挥干甲醇后加入空白血浆500 μL，按照3.5论文导读：
项策略制备高、中、低3个浓度的质控样品，每个浓度各6份。分别测定高、中、低3个浓度样品中大黄酸与大黄酚的峰面积，并计算其提取回收率（以处理后样品浓度值与处理前样品浓度值的比作为提取回收率）。结果显示大黄酸3个质量浓度（94.54，52.50，2.625 mg·L-1）的提取回收率分别为95.01%，100.3%，104.0%，其RSD分别为2.2%，8.0%，8.5%；大黄酚3个质量浓度（37.40，25.50，4.250 mg·L-1）的提取回收率分别为100.6%，101.2%，110.0%，其RSD分别为8.8%，4.4%，8.7%，结果均符合《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》要求。
3.9 总量统计矩分析结果 根据统计矩的药动学参数（零阶矩AUC、一阶矩MRT、二阶矩VRT）以及总量统计矩的定义，计算祛瘀清热颗粒2个有效成分的总量统计矩药动学参数。具体计算策略为：分别将家兔的各采血点两有效成分的血药浓度代入公式（1）～（3），算得各家兔两成分的零、一及二阶矩参数值后，再将所得零、一及二阶矩参数值分别代入相应公式（4）～（10），即得各总量统计矩的药动学参数值，结果见表1。
如表1所示，血瘀组的VRTt与正常组相比具有显著性差异（P<0.05），提示血瘀家兔体内大黄酸与大黄酚有效成分的平均滞留时间存在较大的差别；同时，血瘀组AUCt，MRTt参数值均大于正常组，提示与正常组相比，两有效成分在血瘀家兔体内的入血量更大，停留的时间更长；血瘀组的Vt与正常组相比略大，这些总量药代动力学特征提示，与正常
家兔相比，大黄酸和大黄酚在血瘀家兔体内的入血量高于正常家兔，在体内停留的时间相对变长，吸收相对更好，释放更快。此外，血瘀家兔kt，CLt小于正常组，t1/2t大于正常组，提示两有效成分在血瘀家兔体内的消除速度相对较慢。
4 分析与讨论
建立中药复方成分总量的药代动力学参数体系可将中药复方各成分的药代动力学参数整合起来，寻找到多成分的药动学总量中心点及离中心点的方差，总量统计矩数学模型及其参数，总量统计矩法评价祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内的药代动力学特征相关论文由www.7ctime.com收集,如需论文.能较客观地描述中药复方整体的量变行为[18-21]，为最终阐明中药复方作用的量-时-效关系，正确指导中药复方临床个性化用药提供理论依据。
根据统计矩的加合性原理可对单成分药代动力学的统计矩参数进行加合计算，获得一系列总量统计矩药动学参数：总量零阶矩AUCt是一个反映量的函数，也是一个常被用于评价药物吸收程度的重要指标；总量一阶矩MRTt为平均滞留时间，是一反映速度的函数，能够反映各药物分子在体内停留的平均时间；总量二阶矩VRTt为平均滞留时间的方差，属于较高阶的矩，可反映各药物分子在体内平均滞留时间的差异；总体表观半衰期t1/2t与总体表观消除平衡常数kt均是反映药物分子在体内消除速度的常数；总体表观分布容积Vt显示药物分子在体内分布的广窄程度；而总体表观清除率CLt则表示药物分子从血中被清除的效率。本文总量统计矩分析结果提示，与正常家兔相比，灌胃祛瘀清热颗粒后大黄酸与大黄酚在血瘀家兔体内的总入血量量更大，吸收和释放的时间变短，体内滞留时间变长，消除相对减慢。
本文运用总量统计矩分析法对祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在正常与血瘀2种不同机体状态下家兔体内的总量药代动力学特征进行了评价，获得了相应的总量药动学参数，表明总量统计矩可整合2个有效成分的药代动力学参数，能表达祛瘀清热颗粒中这2个有效成分整体的药代动力学行为，所得参数能作为该颗粒剂后续开发利用的参考依据。本研究可为进一步研究祛瘀清热颗粒的体内代谢过程及其与药效的相关性提供参考资料，同时也为相关中药复方的药代动力学研究提供参考。
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Total quantity statistical moment analysis on pharmacokinetics of rhein and
chrysophanol after oral administration of Quyu Qingre granules in
normal and acute blood stasis rabbits
YAN Yun-liang， DAI Xiao-yan
（Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310053， China）
[Abstract] This study aim to reveal the total pharmacokinetics of rhein and chrysophanol after oral administration of Quyu Qingre granules （QUQRG） in normal and acute blood stasis rabbits， to identify the pharmacokinetics differences between two groups of rabbits and to evaluate the applicability of the total statistical moment analysis. Based on the concentrations of rhein and chrysophanol in plaa determined by an established HPLC method， and the calculation of main total pharmacokinetic parameters， this study found that total pharmacokinetic parameters VRTt value of blood stasis group is lager than that of normal group and the difference is significant. Compared with normal group， total pharmacokinetic parameters AUCt， MRTt， t1/2t and Vt value of blood stasis group is lager， while the kt and CLt value is aller. The findings indicated that the absorbed and released time of rhein and chrysophanol was accelerated and the total absorptive amount of these two compounds was increased in rabbits with acute blood stasis， compared with the normal rabbits. Total quantity statistical moment analysis can combine the pharmacokinetics of rhein and chrysophanol and express the pharmacokinetic behior of these two compounds in QUQRG. The parameters in this paper can provide reference f总量统计矩法评价祛瘀清热颗粒中大黄酸与大黄酚在家兔体内的药代动力学特征相关范文由写论文的好帮手www.7ctime.com提供,转载请保留.rames for the follow-up de论文导读：velopmentofQUQRG.QuyuQingregranules；rhein；chrysophanol；pharmacokinetics；totalquantitystatisticalmomentanalysisdoi：10.4268/cjcmm20140331上一页12345
velopment of QUQRG.
[Key words] Quyu Qingre granules； rhein； chrysophanol； pharmacokinetics； total quantity statistical moment analysis
doi：10.4268/cjcmm20140331
[责任编辑 陈玲]